化瘀消癥杀胚中药复方给药血浆的药物成分检测

目的以人工饲养的大鼠为介质,探讨治疗异位妊娠的化瘀消癥杀胚中药复方给药血清的药物成分。方法通过高效液相-质谱联合分析方法(HPLC-MS)对灌服宫外孕复方的SD大鼠血清及空白SD大鼠血清、甲氨喋呤SD大鼠血清、混合标准品溶液进行检测,并进行定性差比分析。结果在灌服化瘀消癥杀胚中药复方后的SD大鼠血清中找到瓜氨酸、ββ’-二甲基丙烯酰阿卡宁、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、苦杏仁苷、芍药苷。而甲氨喋呤组和生理盐水组的含药血清中不含有上述任何一种药物成分。结论 HPLC-MS/MS法检测化瘀消癥杀胚中药复方含药血浆药物成分的实验证实,中药含药血清中含有上述化瘀消癥杀胚的中药成分。这些成分可能是化瘀消癥杀胚中药治疗输卵管妊娠的药效基础。

化瘀消癥杀胚中药复方对人输卵管妊娠滋养细胞趋化因子受体CXCR4表达影响

目的:探讨化瘀消癓杀胚中药复方对人输卵管妊娠滋养细胞趋化因子受体CXCR4表达的影响。方法:原代培养的输卵管妊娠滋养细胞与低、中、高不同剂量中药复方共同培养48 h后,用免疫细胞化学染色法检测各组细胞中CXCR4表达情况。结果:与对照组比较,中药低、中、高剂量组滋养细胞中CXCR4的相对光密度值分别为79.3%、59.2%、29.3%,表达水平均阳性下降。低剂量组滋养细胞CXCR4的表达水平与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05),中剂量组滋养细胞CXCR4的表达与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组滋养细胞CXCR4的表达与阴性对照组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:化瘀消癓杀胚中药复方可显著降低输卵管妊娠滋养细胞中CXCR4的表达。

化瘀消癥杀胚中药复方对体外培养输卵管妊娠滋养细胞凋亡能力的影响

目的:探讨化瘀消癥杀胚中药复方对输卵管妊娠滋养细胞凋亡能力的影响。方法:①透射电镜观察化瘀消癥杀胚中药复方作用前后输卵管妊娠滋养细胞微观形态的变化;②采用Western Blot法观察化瘀消癥杀胚中药复方对输卵管妊娠滋养细胞FASL和caspase-3表达的影响。结果:高、中、低不同剂量中药复方和输卵管妊娠滋养细胞共作用48h后,可显著增加凋亡蛋白FASL和caspase-3的表达,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中剂量组滋养细胞FASL和caspase-3表达的水平均与甲氨喋呤组无统计学差异,而中药低剂量组FASL和caspase-3的表达水平明显低于甲氨喋呤组(P<0.05)。结论:化瘀消癥杀胚中药复方中药复方可显著增加输卵管妊娠滋养细胞凋亡相关蛋白Fasl和caspase-3的表达。

化瘀消癥杀胚中药对输卵管妊娠滋养细胞凋亡及凋亡通路的影响

目的:探讨化瘀消癥杀胚中药复方对输卵管妊娠滋养细胞凋亡及凋亡通路的影响。方法:(1)Hoechst染色法观察中药复方对输卵管妊娠滋养细胞形态学的影响;(2)透射电镜观察中药复方对输卵管妊娠滋养细胞超微结构的影响;(3)流式细胞术检测药物干预后输卵管妊娠滋养细胞的凋亡率;(4)采用Wester blot法及QT-PCR法检测Bax、Fasl、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9凋亡相关蛋白及基因的表达。结果:与阴性对照组比较,中药中、高剂量组凋亡率明显增加(P<0.01);中药高剂量组和中药+甲氨蝶呤组Bax、Fasl、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05),中药中剂量组FasL、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),中药低剂量组Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05),且中药高剂量组、中药+甲氨蝶呤组还可增加FasL、Caspase-3、Caspase-8基因表达(P<0.01,P<0.05)。结论:化瘀消癥杀胚中药复方可能通过诱导Caspase介导的死亡受体及线粒体凋亡通路而促进滋养细胞凋亡。

化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养输卵管妊娠滋养细胞凋亡的影响

目的:探讨化瘀消癥杀胚复方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的影响。方法:取化瘀消癥杀胚复方含药血清及甲氨喋呤、生理盐水组血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞进行培养,通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测与含药血清作用72h后,滋养细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:滋养细胞与含药血清共同作用72h后,可降低Bcl-2蛋白表达量,与对照组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。而Bax蛋白表达量未见有明显变化,两组含药血清与对照组比较,差异均无统计学意义。结论:化瘀消癥杀胚复方可能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax比值,从而促进凋亡的途径起到治疗输卵管妊娠的作用。

化瘀消癥杀胚复方含药血清对输卵管妊娠滋养细胞ER、PR、MMPs2的影响

目的:以体外培养的输卵管妊娠滋养细胞为载体,探讨化瘀消癥杀胚复方含药血清对输卵管妊娠着床的相关调节因子雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、基质金属蛋白酶2(MMPs2)表达的影响。方法:以化瘀消癥杀胚复方含药血清、甲氨喋呤血清、0.9%氯化钠溶液血清,对培养的人输卵管妊娠滋养细胞进行干预,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测,观察3组含药血清对培养的人输卵管妊娠滋养细胞作用72h后,滋养细胞中ER、PR、MMPs2的表达。结果:化瘀消癥杀胚中药复方组能降低ER、PR的表达,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),能上调MMPs2的表达,与对照组比较,差异无统计学意义;西药组能降低ER、PR的表达,上调MMPs2的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:化瘀消癥杀胚中药复方能从受体水平拮抗雌孕激素,能加速输卵管蜕膜的溶解,导致绒毛组织变性、坏死,从而起到治疗输卵管妊娠的作用。

化瘀消癥杀胚中药对异位妊娠裸鼠体内模型的影响

目的:观察化瘀消癥杀胚中药对异位妊娠裸鼠体内移植模型的影响。方法:通过绒毛组织块移植法建立人源妊娠绒毛组织块裸鼠体内移植模型,中药灌服7d,并设西药组(肌注甲氨蝶呤)和阴性组(灌服纯净水)。观察裸鼠一般生长情况、包块情况,给药前后测裸鼠绒毛膜促性腺激素(CG),采用qRT-PCR检测种植包块的雌、孕激素受体的表达。结果:裸鼠一般生长情况良好,3组包块变化、CG变化比较差异无统计学意义。中药组和西药组雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达量较阴性组均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),中药组与西药组的ER、PR表达量比较差异无统计学意义。结论:化瘀消癥杀胚中药能够下调ER、PR表达,从受体水平拮抗雌孕激素,从而导致绒毛组织因缺乏雌孕激素而变性、坏死。