基于“痰瘀生风”理论探讨祛痰化瘀中药复方通过NLRP3炎症小体改善心房颤动的作用机制

目的 基于中医“痰瘀生风”理论,通过NLR家族PYRIN域蛋白3(nod-like receptor pyrin domain containing3,NLRP3)炎症小体研究祛痰化瘀中药复方对心房颤动(atrial fibrillation,AF)模型大鼠的作用机制。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,中药低、中、高剂量组和维拉帕米组。除空白组外其余大鼠以尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙(ACh-CaCl2)混合液建立AF模型。造模成功后中药低、中、高剂量组大鼠灌胃祛痰化瘀中药复方,维拉帕米组大鼠灌胃维拉帕米,持续2周,期间除空白组外仍持续尾静脉注射ACh-CaCl2混合液。心电图检测各组大鼠AF持续时间,超微电镜观察大鼠心房肌超微结构变化,Western blot测定大鼠心房肌中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing,ASC)、半胱天冬酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase)-1蛋白表达量。结果 除空白组外,其余各组大鼠均出现典型AF改变。与模型组比较,中药低、中、高剂量组和维拉帕米组大鼠AF持续时间明显缩短(P<0.05,P<0.01)。空白组大鼠心房肌细胞完整清晰、结构完整;模型组大鼠心房肌细胞断裂、模糊、排列不规则,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达较空白组明显升高(P<0.01)。与模型组比较,中药低、中、高剂量组和维拉帕米组大鼠心房肌受损情况有所改善,NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论NLRP3炎症小体在体内累积引发病理反应与“痰瘀生风”致悸的理论相合。祛痰化瘀中药复方可通过抑制NLRP3炎症小体信号通路减少心房肌细胞损伤,减轻炎症反应,发挥对AF大鼠的调节作用。

基于CAV1.2/CaM/CaMKⅡ通路探讨祛痰化瘀中药复治疗心房颤动的作用机制

目的探讨祛痰化瘀中药复方治疗心房颤动的作用机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为空白组和造模组,连续7天尾静脉注射Ach(66μg·mL^(-1))-CaCl_(2)(10 mg·mL^(-1))建立大鼠AF模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、中药复方高、中、低剂量组和维拉帕米组,中药复方高、中、低剂量组给予12.38 mg·kg^(-1)·d^(-1)、6.18 mg·kg^(-1)·d^(-1)、3.10 mg·kg^(-1)·d^(-1)祛痰化瘀中药复方溶液灌胃、维拉帕米组给予维拉帕米溶液8.31 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,期间仍持续尾静脉注射,连续14天。电生理记录仪测量大鼠Ⅱ导联房颤持续时间,透射电镜观察大鼠心房肌超微结构变化,RT-PCR法检测大鼠心房肌CAV1.2、CaM、CaMKⅡmRNA相对表达量,Western blot法检测大鼠心房肌CAV1.2、CaM、CaMKⅡ及下游蛋白RyR2、P-RyR2蛋白表达情况。结果与空白组相比,模型组大鼠均出现典型房颤心电图(P<0.01),心房肌细胞肌丝排列絮乱、线粒体嵴断裂、呈“空泡样”改变,CAV1.2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01),CaM、CaMKⅡmRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01),P-RyR2蛋白表达显著升高(P<0.01),RyR2蛋白表达无差异(P>0.05)。与模型组相比,中药复方组房颤持续时间降低(P<0.05);肌丝排列相对整齐,线粒体结构相对完整;CAV1.2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),CaM、CaMKⅡmRNA及蛋白表达下降(P<0.01),下游蛋白P-RyR2表达降低(P<0.01),RyR2蛋白表达无差异(P>0.05)。结论祛痰化瘀中药复方可缩短大鼠房颤持续时间,抑制心房肌细胞超微结构损伤,其作用机制可能与调控CAV1.2/CaM/CaMKⅡ信号通路表达,改善钙调控紊乱有关。

补肾祛痰化瘀复方治疗肾虚痰瘀型老年痴呆临床观察

目的:探讨中药补肾祛痰化瘀复方对肾虚痰瘀型老年痴呆的临床作用。方法:将27例患者随机分为治疗组与对照组。治疗组14例以中药补肾祛痰化瘀复方,对照组13例以脑复康治疗,观察两组治疗前后MMSE、ADL、ADAS-cog量表的评分情况,比较两组的差异。结果:治疗组各量表评分均优于对照组(P<0.01)。结论:中药补肾祛痰化瘀复方治疗AD临床疗效满意。

补肾祛痰化瘀复方联合益智散穴位贴敷对高龄肾虚痰瘀型MCI患者疗效观察

目的：研究补肾祛痰化瘀复方结合益智散穴位贴敷对高龄肾虚痰瘀型MCI患者疗效观察。方法：从辽宁中医药大学附属医院老年病房选取高龄肾虚痰瘀型MCI患者72例,按照随机数字表法随机分为研究组和对照组。研究组36例（脱落3例）,予盐酸多哌奈齐片和补肾祛痰化瘀方结合益智散穴位贴敷治疗,对照组36例予盐酸多哌奈齐片口服治疗,采用Mo CA、CDT、WHOQOL-BREF、中医证候评分进行疗效评价。结果：研究组较对照组MCI患者Mo CA、CDT、WHOQOL-BREF评分明显升高,中医证候评分明显降低,具有统计学意义（P〈0.01）。结论：补肾祛痰化瘀复方联合益智散穴位贴敷治疗MCI老年患者疗效显著。

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。

化瘀祛痰方药对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1、CD36表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、CD36表达的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:体外培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)使之巨噬化,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)使巨噬细胞泡沫化。细胞随机分为空白对照组、模型组、补气组、化瘀组、祛痰组和全方组。油红O染色观察细胞浆脂滴变化,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析ABCA1、CD36 mRNA水平。结果:模型组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.01);与模型组相比,全方组和祛痰组细胞TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低。RT-PCR结果提示模型组细胞ABCA1、CD36 mRNA水平显著升高;而化瘀祛痰方药及祛痰拆方含药血清可显著升高ABCA1 mRNA,显著降低CD36 mRNA水平。结论:化瘀祛痰方药及祛痰方可抑制ox-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化,该作用可能与其上调ABCA1基因、下调CD36基因表达,从而减弱THP-1细胞对ox-LDL摄取有关。

祛痰化瘀中药复方的抗高血压作用研究

[目的]通过观察在祛痰化瘀中药复方作用下高血压动物模型的心肌细胞结构变化,探讨祛痰化瘀中药复方的抗高血压作用.[方法]建立SD大鼠高血压模型,祛痰化瘀复方煎剂灌胃给药,对照组按1mL/(100g?d)给予生理盐水灌胃,连续60d,测量各组大鼠的血压,处死大鼠取心脏组织进行光镜和透射电镜观察.[结果]给药60d,中药复方高、低剂量组血压值分别为(14.28±3.230)kPa和(14.31±3.503)kPa,与模型组(18.74±2.117)kPa比较,有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠心脏组织有灶性的心肌细胞坏死,肌纤维间有大量的纤维结缔组织增生,心肌细胞超微结构出现肌原纤维断裂融解,线粒体变性;中药高剂量组的光镜和电镜观察无明显的病理性改变,中药低剂量组心肌细胞有变性,损伤程度和范围低于模型组.[结论]祛痰化瘀组方可以降低血压,恢复心肌细胞的正常形态结构.

祛痰化瘀中药复方对心房颤动模型大鼠心电图及黏附分子P-Selectin、E-Selectin的影响

目的:观察祛痰化瘀中药复方对心房颤动(AF)大鼠的疗效并探讨其作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为Control组(10只)和Model组(50只),通过尾静脉注射Ach(66μg/mL)-CaCl_(2)(10 mg/mL)连续7 d,建立大鼠AF模型。将造模成功的大鼠随机分为Model组(生理盐水)、High dose组(41.25 g·kg^(-1)·d^(-1))、Middle dose组(20.63 g·kg^(-1)·d^(-1))、Low dose组(10.31 g·kg^(-1)·d^(-1))、Verapamil组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,灌胃给药,期间仍持续尾静脉注射。连续灌胃2周后,记录大鼠心电图AF持续时间;透射电镜观察心房肌细胞超微结构的变化;ELISA法检测各组大鼠血清P-Selectin、E-Selectin的含量。结果:与Control组相比,Model组大鼠AF持续时间明显延长(P<0.01);透射电镜显示心房肌细胞肌丝排列絮乱、线粒体嵴断裂、呈“空泡样”改变;大鼠血清P-Selectin、E-Selectin含量均升高(P<0.01)。与Model组比较,所有用药组大鼠AF的持续时间均缩短(P<0.01);心房肌细胞肌丝排列相对整齐,线粒体结构相对完整,以High dose组、Middle dose组及Verapamil组最为明显;High dose组、Middle dose组、Low dose组大鼠血清P-Selectin含量均显著下降(P<0.01),High dose组、Middle dose组较Low dose组降低更明显(P<0.05);而对于E-Selectin,High dose组、Middle dose组、Verapamil组的血清含量显著下降(P<0.01),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:祛痰化瘀中药复方可缩短大鼠心电图AF的持续时间,改善心房肌细胞超微结构的损伤,降低AF大鼠血清中P-Selectin、E-Selectin的含量,抑制炎症反应和血栓前状态,从而拮抗AF的发生发展。

化瘀祛痰方及其拆方对HepG2细胞胆固醇代谢的影响及机制研究

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对人肝癌细胞株HepG2胆固醇代谢的影响,探讨该方药的作用机制,并比较方药全方及各拆方的疗效及调控作用。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、化瘀祛痰方全方组、补气组、化瘀组、祛痰组,生理盐水和相应中药予以ig,连续8 d。给药量为全方组17.9 g.kg-1,补气组7.5 g.kg-1,化瘀组5.4 g.kg-1,祛痰组4.2 g.kg-1,空白对照组ig等量生理盐水。第9天腹主动脉采血,分离血清。体外培养HepG2细胞,随机分为6组,即①空白对照组、②ox-LDL刺激组、③化瘀祛痰方全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组。其中②组加入终质量浓度为50 mg.L-1ox-LDL,③～⑥组用相应含药血清(10%)预处理24 h后加入终质量浓度为50 mg.L-1ox-LDL,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用MTT法检测细胞活性;胆固醇氧化酶终点法检测HepG2细胞总胆固醇含量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量分析3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)mRNA表达。结果:50 mg.L-1ox-LDL作用于HepG2细胞使其细胞活力显著降低至对照组的(59.37±18.21)%,细胞总胆固醇含量显著升高(幅度为71.52%)。而化瘀祛痰方全方、补气方、化瘀方、祛痰方显著升高细胞活力分别至(76.52±24.38)%,(68.13±20.35)%,(72.63±21.56)%,(73.92±23.47)%(P<0.05或P<0.01),全方、化瘀方、祛痰方能显著降低HepG2细胞胆固醇含量,幅度分别为:28.77%,17.18%,25.09%。RT-PCR结果表明经ox-LDL诱导HepG2细胞HMGCR mRNA相对表达显著减少(P<0.01),而SR-BⅠ和CYP7A1 mRNA相对表达显著增加(P<0.01,P<0.01)。化瘀祛痰方及祛痰方含药血清均能显著降低HepG2细胞HMGCR mRNA水平(P<0.01,P<0.05),显著升高SR-BⅠ和CYP7A1mRNA水平(均P<0.01)。结论:化瘀祛痰方药全方及祛痰方可通过降低HMGCR水平和升高SR-BⅠ,CYP7A1水平从而影响胆固醇合成、摄取和转化,这可能是其调控脂质代谢发挥抗AS作用的机制之一。

祛痰化瘀中药复方对心房颤动模型大鼠心肌超微结构及氧化应激的影响

目的 探讨祛痰化瘀中药复方治疗心房颤动(AF)的可能作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,维拉帕米组及祛痰化瘀高、中、低剂量组,每组10只。除空白组外其余各组大鼠采用尾静脉注射乙酰胆碱(Ach,66μg/ml)-氯化钙(CaCl2,10 mg/ml)混合液连续7天建立AF大鼠模型。从造模第2天起,祛痰化瘀高、中、低剂量组大鼠分别给予祛痰化瘀中药复方41.25、20.63、10.31 g/(kg·d)灌胃,维拉帕米组给予维拉帕米溶液25 mg/(kg·d)灌胃,空白组和模型组灌服8.93 ml/(kg·d)生理盐水,连续灌胃2周。最后一次灌胃后12 h记录各组大鼠肢体Ⅱ导联心电图,监测AF持续时间;透射电镜下观察各组大鼠心肌超微结构变化;ELISA法检测大鼠血清中晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 空白组大鼠为正常心电图,心房肌细胞的肌小节完整清晰,线粒体结构正常。与空白组相比,模型组大鼠心电图显示为AF心律,血清中AOPP、MDA、ROS含量升高,SOD含量降低(P<0.05或P<0.01),心房肌细胞的肌小节断裂,“Z”带不连续,排列混乱,“I”带模糊不清,线粒体肿胀、增多。与模型组比较,各给药组大鼠AF持续时间明显缩短;祛痰化瘀高、中剂量组大鼠血清AOPP、ROS、MDA含量降低,SOD含量升高(P<0.05或P<0.01),维拉帕米组大鼠血清AOPP、ROS含量降低,SOD含量升高(P<0.05);祛痰化瘀高、中剂量组和维拉帕米组大鼠心房肌细胞的肌小节轻微断裂,排列相对整齐,线粒体稍有肿胀、增多,结构相对完整,而祛痰化瘀低剂量组大鼠心肌超微结果改善不明显。结论 祛痰化瘀中药复方可以缩短心房颤动持续时间,改善心肌损伤,其机制可能与抑制氧化应激有关,且以高中剂量效果为佳。