晚期糖基化终末产物受体在特发性肺纤维化中的研究进展

由于病因不明,特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)缺乏有效的干预措施。晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)是免疫球蛋白受体超家族的成员,在肺脏中表达最多,有助于维持肺组织的动态稳定。其参与糖尿病肾纤维化和肝纤维化已有证明,多项研究也表明,RAGE与IPF有关。本文就RAGE与IPF的研究进展做一综述,以期为IPF的治疗提供一思路。

血清中可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)与肺癌的相关性分析

目的分析血清中可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)与肺癌的相关性。方法将辽宁省人民医院2015年5月-2018年12月收治的102例肺癌患者纳入本研究,另将同期到我院体检的100例健康体检者作为对照组,应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组血清sRAGE水平,分析肺癌患者与健康对照者血清sRAGE水平差异及血清sRAGE水平与肺癌患者临床病理特征的相关性,并采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清sRAGE在肺癌中的诊断效能。结果ELISA检测结果显示,肺癌组血清sRAGE水平[(632.56±203.14)ng/L]明显低于健康对照组[(976.02±283.57)ng/L],二者相比差异具有统计学意义(t=9.879,P<0.05)。血清sRAGE水平与肺癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴转移及远端转移密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤直径及病理分型无明显关系(P>0.05)。采用ROC曲线评价血清sRAGE对肺癌的诊断效能,结果显示,ROC曲线下面积为0.851(95%CI:0.620-0.982),筛选其最佳截断点:当sRAGE为503.39 ng/L时,敏感性为91.39%,特异性为81.42%。结论sRAGE在肺癌患者血清中表达下调,血清sRAGE水平与肺癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴转移及远端转移密切相关,血清sRAGE对肺癌的诊断敏感性和特异性较高,提示sRAGE可能与肺癌的发生及恶性程度有关,检测血清sRAGE可能对肺癌早期诊断有一定价值。

肺功能正常吸烟者高迁移率族蛋白1(HMGB1)和可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)表达水平及其临床意义的研究

目的:研究并探讨肺功能正常吸烟者高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)和可溶性糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation end product,sRAGE)的表达水平及其临床意义。方法:选取进行健康体检且肺功能正常的80例健康志愿者作为研究对象,根据体检者是否吸烟将其分为吸烟组40例、非吸烟组40例,收集两组体检者的一般资料,再对其进行肺通气功能检查,并对其血清HMGB1、sRAGE表达水平进行测定。采用皮尔逊相关系数分析法,分析血清HMGB1、sRAGE表达水平与肺功能的相关性。结果:吸烟组与非吸烟组的肺通气功能指标比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。吸烟组的血清HMGB1表达水平明显高于非吸烟组,其血清sRAGE表达水平明显低于非吸烟组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。经相关性分析得出,血清HMGB1、sRAGE表达水平与吸烟组的肺通气功能指标密切相关(P <0. 05),HMGB1呈负相关,sRAGE呈正相关;血清HMGB1、sRAGE表达水平与非吸烟组的肺通气功能指标均无线性相关(P> 0. 05)。结论:肺功能正常的吸烟者其血清HMGB1表达水平异常增高,其血清sRAGE表达水平异常下降,在吸烟者肺功能受损前,可将血清HMGB1、sRAGE作为评估其肺功能的重要指标,以便于及时发现其肺功能受损。

血浆可溶性晚期糖基化终末产物受体和APACHEⅡ评分对脓毒症预后的评价

目的探讨血浆可溶性晚期糖基化终末产物受体（sRAGE）和急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）在预测脓毒症患者预后中的意义。方法选择2013－02-2014－08我院ICU收治的脓毒症患者79例。检测患者入院后第1、3天血浆sRAGE水平，同时记录当天APACHEⅡ评分，根据28d生存与否分为存活组和死亡组，分析两组血浆sRAGE水平、APACHEⅡ评分于第1、3天的变化及相关性，并分析两项指标对脓毒症患者预后的判断价值。结果第1、3天存活组血浆sRAGE水平及APACHEⅡ评分均显著低于死亡组（P＜0．05）；当日血浆sRAGE水平与APACHEⅡ评分之间均存在正相关（r＝0．74，P＜0．05；r＝0．61，P＜0．05）；第1天血浆sRAGE水平及APACHEⅡ评分对脓毒症预后判断的ROC曲线下面积分别为0．93、0．86（P＜0．05），第3天两指标的曲线下面积分别为0．75、0．69（P＜0．05）。结论脓毒症患者血浆sRAGE水平与APACHEⅡ评分显著相关，血浆sRAGE水平可作为脓毒症患者转归的早期预测指标。

糖化终末产物受体在大鼠胰腺星形细胞中的表达

目的研究胰腺星形细胞(PSCs)是否表达糖化终末产物受体(RAGE),并探讨糖化终末产物(AGEs)对RAGE表达的调节作用。方法分离培养SD大鼠PSCs,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学检测静息和活化的PSCs RAGE在mRNA和蛋白水平的表达,同时用RT-PCR检测AGEs刺激后RAGE表达的变化。结果静息和活化的PSCs均表达RAGE,且活化后表达水平提高;AGEs能上调RAGE的表达。结论静息和活化的PSCs均表达RAGE,活化的PSCs RAGE表达上调,提示PSCs是AGEs作用的靶细胞。

血清可溶性晚期糖基化终末产物受体表达水平与肺癌的相关性

目的:初步探讨血清可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)表达水平与肺癌的相关性。方法 :应用双抗体夹心ELISA法检测血清sRAGE水平,并比较分析其在40例肺癌患者与40例健康对照者、20例肺腺癌患者与20例其他病理类型肺癌患者、18例TNM分期M0肺癌患者与22例M1肺癌患者间的水平差异。结果:肺癌患者与健康对照者的血清sRAGE水平分别为(226±220)和(160±136)ng/L;肺腺癌患者与其他病理类型肺癌患者的血清sRAGE水平分别为(125±87)和(194±166)ng/L;TNM分期M0肺癌患者与M1肺癌患者的血清sRAGE水平分别为(198±174)和(128±85)ng/L。经总体方差不等的均数比较近似t检验,结果显示3组人群的血清sRAGE水平差异均无显著性。结论:血清sRAGE表达水平个体差异大,其表达水平与肺癌是否相关尚须大样本量进一步证实。

瑞舒伐他汀通过抑制晚期糖基化终末产物受体改善晚期内皮祖细胞再内皮化功能

目的:研究C反应蛋白(CRP)对晚期内皮祖细胞的晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响,并探讨瑞舒伐他汀是否改善CRP诱导的晚期内皮祖细胞再内皮化功能。方法:Western blot检测RAGE蛋白表达情况,MTT检测细胞活力、Transwell小室检测迁移能力及黏附能力来观察瑞舒伐他汀对于CRP诱导的晚期内皮祖细胞再内皮化功能的影响。结果:随着CRP刺激浓度增加,RAGE蛋白表达量逐渐增加;而瑞舒伐他汀预孵育后,RAGE表达量逐渐下降。瑞舒伐他汀对于CRP诱导后的晚期内皮祖细胞的细胞活性没有显著改变;而迁移能力和粘附能力均随着瑞舒伐他汀浓度逐渐增加而增加,其中10^(-6)mol/L瑞舒伐他汀组与CRP对照组比较均显著增强(P<0.01)。结论:CRP上调晚期内皮祖细胞RAGE的表达,瑞舒伐他汀可通过抑制RAGE表达增强CRP诱导的晚期内皮祖细胞的迁移和粘附能力,从而改善其再内皮化功能。

人血清晚期糖基化终末化产物受体的表达与肺癌的关系

目的 探讨人血清晚期糖基化终末化产物受体（RAGE）的表达及与肺癌的相关性.方法 采用ELISA法检测40例肺癌患者（包括无远处转移的ⅠA～ⅢB期患者18例、有远处转移的Ⅳ期患者22例）和40例健康对照者的血清RAGE表达水平,比较肺癌患者与健康对照者、ⅠA～ⅢB期患者与Ⅳ期患者间血清RAGE表达水平的差异.结果 肺癌患者、健康对照者血清RAGE水平[M（P25,P75）]分别为530 （755,2 210） pg/mL和610 （935,3 350） pg/mL（Z=-0.856,P=0.392）;ⅠA～ⅢB期患者与Ⅳ期患者间血清RAGE水平分别为590 （830,5 400） pg/mL和457（803,2 220）pg/mL,行Wilcoxon秩和检验,两者间血清RAGE表达水平差异无统计学意义（Z=-0.394,P=0.693）.结论 血清RAGE水平与肺癌关系并不密切,可能不能预示肺癌是否有远处转移.

晚期糖基化终末产物受体及配体高迁移率族蛋白-1在矽肺肺纤维化中的作用

本实验通过测量小鼠矽肺模型肺灌洗液中高迁移率族蛋白（HMGB）-1、TNF-α和肺组织中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的表达改变,进而探讨RAGE及HMGB-1在矽肺肺纤维化中的作用,现报告如下。

可溶性晚期糖基化终末产物受体与哮喘阻塞性通气功能障碍的相关性研究

目的探讨纤维支气管镜肺泡灌洗液中可溶性晚期糖基化终末产物受体水平在支气管哮喘患者阻塞性通气功能障碍中的临床意义。方法选取支气管哮喘患者共40例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测患者纤维支气管镜肺泡灌洗液中可溶性晚期糖基化终末产物受体水平,使用方差分析法对结果进行比较和分析。结果一组患者肺泡灌洗液可溶性晚期糖基化终末产物受体水平高于二组,差异有统计学意义(F=30.48,P<0.01)。直线相关分析显示,一组sRAGE水平与一秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)呈负相关(r=-0.738,P<0.05)。结论支气管哮喘患者肺泡灌洗液中可溶性晚期糖基化终末产物受体水平越高提示阻塞型通气功能障的病情越严重。

可溶性晚期糖基化终末产物受体拮抗缺血/再灌注小鼠心肌纤维化

目的探讨可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)对缺血/再灌注小鼠心脏炎症的影响及其机制。方法利用6~8周龄雄性C57BL/6小鼠构建心肌缺血/再灌注损伤模型(左前降支结扎30 min,再灌注2周),随机分为4组,每组5只C57BL/6小鼠。通过心脏超声检测心功能,HE染色观察炎症细胞浸润情况,马松和天狼星红染色检测心肌纤维化,免疫组织化学染色检测半乳糖凝集素3(galectin-3)表达。结果与假手术组相比,缺血/再灌注组小鼠的心功能减退,心肌组织间有大量炎症细胞浸润,心肌纤维化面积增加,同时,心脏组织中galectin-3的表达增多;而给予外源性sRAGE处理后,小鼠的心功能显著改善,炎症细胞浸润减少,纤维化程度减轻,心脏组织中galectin-3的表达也显著减少。结论心肌缺血/再灌注损伤时,sRAGE可能通过抑制galectin-3的表达,减少小鼠心脏炎症细胞浸润,从而减轻心肌纤维化。

NCX-4016通过下调终末化糖基产物受体表达抑制高糖内环境诱导的动脉粥样硬化

目的探讨一氧化氮(NO)供体药物NCX-4016在2型糖尿病动脉粥样硬化模型小鼠中的保护作用,并研究其与终末化糖基产物受体(RAGE)表达相关的分子机制。方法10只apoE-/-小鼠和db/db杂交后的2型糖尿病动脉粥样硬化模型小鼠给予高脂饮食诱导动脉粥样硬化形成后,均分为实验组和对照组。实验组给予NO供体药物NCX-4016,对照组给予等量生理盐水,处理4周后,油红染色检测主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积,Western bolt法检测RAGE及炎症信号通路蛋白高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、RAGE和炎症因子表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测模型小鼠可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)的血清学水平。人脐静脉内皮细胞(hUVECs)经NCX-4016加或不加eNOS合酶抑制剂、PKG抑制剂诱导后,观察炎症通路信号蛋白和炎症因子的表达水平。结果与对照组比较,实验组小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积明显减小,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组与对照组小鼠ELISA检测的血清sRAGE水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,实验组主动脉根部斑块组织内RAGE和NF-κB p65相对表达水平明显减少,eNOS相对表达水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,与对照组比较,实验组小鼠主动脉根部斑块组织内TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NCX-4016处理比较,eNOS抑制剂+NCX-4016处理hUVECs中IL-6表达水平无明显改变(P>0.05),但NF-κB p65、RAGE、IL-1β、TNF-α表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),PKG抑制剂+NCX-4016处理细胞中NF-κB p65、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NCX-4016可以明显在体外抑制hUVECs中RAGE的表达,在体外高糖刺激环境下抑制炎性反应,在体内对糖尿病动脉粥样硬化模型小鼠的血管发挥保护作用。

前列地尔对冠脉粥样硬化患者血流动力学及其血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平的影响研究

目的探究前列地尔对冠脉粥样硬化患者血流动力学及其血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平的影响。方法将2009年7月～2011年7月于笔者医院就诊并选择内科保守治疗的76例冠脉粥样硬化患者平均随机分入前列地尔治疗组和对照组。对照组采用冠脉粥样硬化常规内科保守治疗,前列地尔治疗组患者在常规内科保守治疗基础上每天采用20μg前列地尔静脉滴注治疗2周。比较两组患者的临床疗效,血流动力学指标,血脂指标和血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平。结果前列地尔治疗组临床疗效显著优于对照组(P<0.05),血小板3min聚集率和血小板最大聚集率显著优于对照组(P<0.05),血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平显著低于对照组(P<0.05)。前列地尔治疗组患者其余指标与对照组患者无统计学差异(P>0.05)。结论前列地尔能够显著改善冠脉粥样硬化患者的血流动力学指标和血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平。

绞股蓝皂苷对AGEs诱导下人肾小球系膜细胞中RAGE及转化生长因子-β_1表达的影响

目的观察绞股蓝皂苷(gypenosides,GP)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation endproducts,AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及转化生长因子-β_1(TGF-β1)表达的影响。方法将体外培养的(体积分数为0.15的FBS的DMEM低糖培养液)人肾小球系膜细胞(HMCs)分为4组:正常组、模型组、GP组、阳性对照组。除正常组外,其余组均再给予200 mg·L^(-1)AGEs刺激。此外,GP组中加入不同浓度GP(25、75、175 mg·L^(-1))进行干预,阳性对照组中加入氨基胍盐酸盐(10^(-1)mmol·L^(-1))。应用Western blot技术检测各实验组中RAGE和TGF-β_1蛋白的表达;RT-PCR技术检测各实验组中RAGE和TGF-β_1 mRNA的表达。结果模型组AGEs诱导下HMCs中RAGE、TGF-β1蛋白及mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.01);与模型组比较,GP组中GP可明显下调HMCs中RAGE、TGF-β_1蛋白及mRNA的表达,且呈浓度依赖性(P<0.01)。结论 GP可降低AGEs诱导下HMCs中RAGE的表达,阻断AGEs-RAGE信号通路,并下调下游因子TGF-β_1的表达,进而延缓糖尿病肾病纤维化进程。

桑黄素通过调控NLRP3/NF-κB信号通路对糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的通过体外细胞实验探讨桑黄素(Mh)在骨关节炎(OA)中的作用并揭示其潜在机制。方法成功从大鼠软骨组织中分离出软骨细胞并通过甲苯胺蓝染色鉴定后,将软骨细胞与糖基化终末产物(AGE)共同孵育以诱导炎症OA模型。CCK-8筛选最佳Mh干预浓度。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子水平;免疫荧光和Western印迹检测细胞外基质(ECM)降解;流式细胞仪和Western印迹检测细胞凋亡;Western印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白表达。结果Mh最佳干预浓度为20μmol/L。与Control组比较,AGE组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6表达、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶(ADAMTS)-4和ADAMTS-5蛋白水平、细胞凋亡率、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平均显著升高,CollagenⅡ和Aggrecan阳性细胞率、C-caspase 3、Bax、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与AGE组相比较,Mh组或MCC950组TNF-α、IL-1β和IL-6水平、MMP3、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5蛋白水平、细胞凋亡率、C-caspase 3、Bax蛋白表达、NLRP3、ASC和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平均显著降低,CollagenⅡ和Aggrecan阳性率、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与Mh组相比,Mh+BMS-986299组软骨细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6、MMP3、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5水平、细胞凋亡率、C-caspase3和Bax蛋白表达、NLRP3、ASC和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平明显升高,CollagenⅡ和Aggrecan阳性率、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论Mh可能通过抑制NLRP3/NF-κB通路减轻AGE诱导的软骨细胞炎症、ECM降解和细胞凋亡,从而保护软骨细胞免受AGE诱导的损伤。

启动子甲基化通过调节RAGE基因表达影响UC风险

末端糖基化终末产物受体基因(RAGE)被证实在多种炎症相关疾病中发挥重要的信号传导作用。最近我们在溃疡性结肠炎(UC)组织样本中发现在RAGE基因启动子区存在一个富含CpG的区域甲基化存在个体差异现象。启动子区高甲基化可能会影响基因的转录过程,因此本研究拟通过病例对照探索RAGE基因启动子区甲基化对其转录水平的影响极其甲基化与UC风险的相关性。研究发现启动子区甲基化程度与转录水平密切相关,该区域可能是调控RAGE基因转录的关键部位。我们的研究为进一步理解UC病变机理开辟新的切入点,同时为UC个性化风险精准预测提供理论基础。

山茱萸新苷对糖尿病肾病模型小鼠的保护作用及机制

目的探讨山茱萸新苷对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的保护作用及潜在机制。方法将雄性KK-Ay小鼠以高脂高糖饲料喂养2周复制DN小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、氨基胍组(阳性对照,100 mg/kg)、山茱萸新苷组(100 mg/kg),另取雄性C57BL/6J小鼠作为正常组,每组6只。各药物组小鼠灌胃相应药液,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白,血清白细胞介素12(IL-12)、IL-10、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平,观察其肾组织病理损伤、纤维化改变和肾小球微观结构,检测其肾皮质中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠肾皮质可见明显的炎症细胞浸润和纤维化改变,肾小球系膜增生严重且基底膜有大量不规则块状暗色致密物沉积;其FBG、24 h尿蛋白水平,血清IL-12、BUN、Scr水平,肾皮质RAGE、COL-Ⅳ、i NOS蛋白的表达量均显著升高,血清IL-10水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各药物组小鼠肾脏病理损伤、纤维化改变及肾小球微观结构均有明显改善,上述各定量指标均普遍好转(P<0.05或P<0.01)。结论山茱萸新苷对DN模型小鼠具有一定的保护作用,可抑制炎症反应,降低尿蛋白水平,缓解肾脏纤维化;上述作用可能与抑制晚期糖基终末产物/RAGE信号通路有关。

糖化碱性成纤维细胞生长因子影响人真皮微血管内皮细胞增殖和血管化效应的受体途径

目的探讨糖化碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)影响人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)增殖及血管化效应的受体途径。方法采用实验研究方法。采用葡萄糖、bFGF制备糖化bFGF刺激液。取第3~6代HDMEC进行实验。取细胞,分为小干扰RNA(siRNA)-阳性对照组、siRNA-阴性对照组、siRNA-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)组和siRNA-成纤维细胞生长因子受体(FGFR)组,分别转染siRNA-阳性对照3-磷酸甘油醛脱氢酶、siRNA-阴性对照、siRNA-RAGE和siRNA-FGFR 4~6 h,之后加入HDMEC培养基常规培养,反转录PCR法鉴定siRNA转染效果。取细胞,分为正常对照组、单纯糖化bFGF组、单纯siRNA-RAGE组、siRNA-RAGE+糖化bFGF组,接种于96孔板和6孔板。单纯siRNA-RAGE组、siRNA-RAGE+糖化bFGF组细胞转染siRNA-RAGE之后,加入HDMEC培养基常规培养,2 d后,弃去原HDMEC培养基,单纯siRNA-RAGE组细胞加入HDMEC培养基常规培养,siRNA-RAGE+糖化bFGF组细胞加入糖化bFGF刺激液常规培养;正常对照组细胞采用HDMEC培养基常规培养;单纯糖化bFGF组细胞采用糖化bFGF刺激液常规培养。取细胞,同前转染siRNA-RAGE后,接种于48孔板,分为单纯siRNA-RAGE组和siRNA-RAGE+糖化bFGF组;另取细胞不转染直接同前接种到48孔板,分为正常对照组及单纯糖化bFGF组,4组分别同前处理。取细胞,分为正常对照组、单纯糖化bFGF组、单纯siRNA-FGFR组、siRNA-FGFR+糖化bFGF组,分别接种于96、6、48孔板中,相应处理同前,仅siRNA-RAGE换为siRNA-FGFR。采用细胞计数试剂盒8法测定培养2 d细胞增殖活性(样本数为6),流式细胞术检测培养2 d细胞凋亡情况(样本数为3),成管实验检测培养6 h细胞成管能力(样本数为4)。对数据行单因素方差分析、LSD-t检验。结果200 bp条带处,未见siRNA-阳性对照组、siRNA-RAGE组和siRNA-FGFR组表达目的基因,可见siRNA-阴性对照组表达目的基因,说明siRNA转染成功。培养2 d后,单纯糖化bFGF组细胞吸光度值明显低于正常对照组(t=2.359,P<0.05);siRNA-RAGE+糖化bFGF组细胞吸光度值明显高于单纯糖化bFGF组(t=3.858,P<0.01),与单纯siRNA-RAGE组相近(t=2.148,P>0.05)。培养2 d后,siRNA-FGFR+糖化bFGF组细胞吸光度值与单纯糖化bFGF组相近(t=0.805,P>0.05),但明显低于单纯siRNA-FGFR组(t=4.201,P<0.01)。培养2 d后,单纯糖化bFGF组细胞凋亡率明显高于正常对照组(t=2.416,P<0.05),siRNA-RAGE+糖化bFGF组细胞凋亡率明显低于单纯糖化bFGF组和单纯siRNA-RAGE组(t=3.861、2.724,P<0.05或P<0.01)。培养2 d后,正常对照组、单纯糖化bFGF组、单纯siRNA-FGFR组、siRNA-FGFR+糖化bFGF组细胞凋亡率组间总体比较,差异无统计学意义(F=2.218,P>0.05)。培养6 h后,正常对照组细胞小管成环数[(636±5)个]明显多于单纯糖化bFGF组[(580±8)个,t=10.825,P<0.01],siRNA-RAGE+糖化bFGF组细胞小管成环数[(647±10)个]明显多于单纯糖化bFGF组和单纯siRNA-RAGE组[(628±4)个,t=13.040、3.641,P<0.01]。培养6 h后,siRNA-FGFR+糖化bFGF组细胞小管成环数[(619±5)个]明显多于单纯糖化bFGF组(t=9.000,P<0.01),但少于单纯siRNA-FGFR组[(632±3)个,t=2.814,P<0.05]。结论糖化bFGF通过RAGE途径影响HDMEC的增殖和血管生成,可能是造成糖尿病皮肤创面难愈的原因之一。

矽肺患者肺泡灌洗液中sRAGE表达的变化及其意义

[目的]检测不同期别矽肺患者肺泡灌洗液(BALF)中可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)、致纤维化相关因子分泌水平以及肺功能的变化,分析sRAGE与后两者间的相互关系,探讨sRAGE在矽肺纤维化进展过程中可能起到的作用及意义。[方法]选取61例于2016年5—10月在中国煤炭工人北戴河疗养院行支气管肺泡灌洗术的患者为研究对象,其中观察对象组(矽尘作业人员的X射线胸片有不能确定的尘肺样影像改变,但并未达到壹期矽肺者纳入观察对象组)7例,矽肺壹期18例,矽肺贰期15例和矽肺叁期21例。收集研究对象的年龄、工龄、血压、体重指数(BMI)、首次接尘年龄等基础资料。采用美国PB840肺功能测定仪测定研究对象用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气量(FEV1)、最大呼气峰流速(PEF)、用力呼气25%肺活量流速(PEF25)、用力呼气50%肺活量流速(PEF50)、第一秒用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)、深吸气量(IC)、最大肺活量(VCmax)等肺功能相关指标;应用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测BALF中sR AGE、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平;采用Pearson积矩相关分析sR AGE与相关指标如年龄、工龄、首次接尘年龄、血压、BMI、肺功能指标值以及TNF-α、TGF-β1水平的相关性。[结果]矽肺患者的年龄、工龄、血压、BMI与观察对象组之间差异均无统计学意义,矽肺叁期患者组的首次接尘年龄[(29.19±7.64)岁]高于观察对象组[(26.86±7.01)岁](P <0.05)。研究对象的肺功能随矽肺分期的增加而降低,矽肺叁期组的VCmax、IC、PEF、PEF25、PEF50、PEF75、FEV1、FEV1/FVC指标值均低于观察对象组(均P <0.05)。矽肺叁期患者sRAGE水平[(1 060.91±472.75)pg/mL]低于矽肺贰期[(1 490.36±688.56)pg/mL]和观察对象组[(1 450.37±530.98)pg/mL](均P <0.05);矽肺叁期患者TNF-α的水平[(2.42±0.94)pg/mL]高于观察对象组、矽肺壹期组[(1.16±1.03)pg/mL、(1.51±0.97)pg/mL](均P <0.05);各组间TGF-β1水平变化无明显统计学差异。相关性分析结果显示,sRAGE的水平与FEV1、FVC和BMI呈正相关,与首次接尘年龄呈负相关,相关系数分别为0.295、0.265、0.404和-0.267(均P <0.05)。[结论] sRAGE的水平与FEV1、FVC、BMI以及首次接尘年龄相关,s RAGE分泌的降低可能在矽肺纤维化发展后期起到重要作用。

高迁移率族蛋白B1相关分子机制在呼吸系统疾病模型中的作用及研究进展

背景高迁移率族蛋白（high-mobility group proteins，HMG）B1通常以分子伴侣形式于细胞核内维持核小体的结构并调节基因转录。研究表明HMGB1促进了多种慢性炎症和自身免疫疾病的发生。HMGBI有多种细胞膜受体，如糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation endproducts，RAGE）、Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）、巨噬细胞-1抗原（macrophage-1 antigen，Mac-1）、CD24等，并有多种胞内信号转导途径。目的在多种肺部疾病模型中总结HMGB1及其相关信号通路的研究现状。内容总结HMGB1相关信号通路在哮喘、肺纤维化、脓毒症和脂多糖（lipopolysacchairdes，LPS）相关急性肺损伤、休克和机械通气相关肺损伤、细菌性肺炎及肺动脉高压疾病中的研究现状。趋向在多种肺部疾病模型中，从急性期、慢性期到纤维化期，HMGB1均参与其中，其机制主要通过促进中性粒细胞浸润和促炎因子分泌、促进了气道重塑相关细胞因子的表达以及削弱巨噬细胞、中性粒细胞的细菌吞噬能力等促进肺损伤迁延不愈。HMGB1可激活多种膜受体，但通过哪种膜受体发挥主要作用，主要作用于哪些类型的组织细胞，研究结果差异性较大。在临床水平，关于HMGB1相关信号通路各级关键蛋白如HMGB1、RAGE、可溶性晚期糖基化终末产物受体（soluble RAGE，sRAGE）、内源性分泌型晚期糖基化终末产物受体（endogenous secretoryRAGE，esRAGE）等，由于它们的升高水平在众多研究结果中差异性较大，目前还停留在检测金指标的探寻阶段。HMGB1特异性拮抗剂在动物水平被证明有效，但在临床水平的研究还没有充分开展。