脊髓性肌萎缩症中运动神经元生存蛋白缺失抑制p53泛素化降解致其积累的研究

目的探究脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)中p53积累的分子机制。方法构建运动神经元生存基因(Survival motor neuron,Smn)敲低的稳转小鼠运动神经元细胞系NSC34,采用蛋白质印迹和荧光定量PCR检测蛋白和基因的变化;用蛋白合成抑制剂放线菌酮(Cycloheximide,CHX)抑制蛋白合成,蛋白质印迹检测p53蛋白降解情况,采用免疫共沉淀检测p53与MDM2结合情况;采用免疫荧光检测小鼠脊髓组织运动神经元数量,运用流式细胞仪分析细胞周期的分布。结果在Smn敲低的NSC34细胞中,p53蛋白水平显著增加,但是其基因水平未发生明显变化;当蛋白合成被抑制后,SMN缺失会抑制p53蛋白降解,p53积累后会调控下游MDM2表达显著增加,但是其与p53结合却显著减少;p⁃p53(Ser18)和acetyl⁃p53(K382)水平显著升高,K382乙酰化位点会影响p53泛素化结合,导致其泛素化被抑制;最终p53积累导致NSC34细胞和SMA小鼠脊髓组织中细胞周期阻滞和凋亡增加。结论SMN蛋白缺失通过抑制p53泛素化降解途径导致其积累,进而引起细胞周期阻滞和凋亡。

氯化两面针碱通过抑制p53泛素化降解诱导宫颈癌细胞凋亡的机制

目的探究氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)对宫颈癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法以宫颈癌细胞系HeLa及SiHa为对象,通过CCK-8法和克隆形成实验检测NC的细胞毒性作用及对细胞生长的抑制作用。通过TUNEL法检测NC对宫颈癌细胞凋亡的影响,并采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达情况。运用免疫共沉淀实验、泛素化实验及Western blot实验分析NC对宫颈癌细胞中p53与E6AP蛋白相互作用、p53泛素化修饰水平、p53蛋白稳定性的影响。结果NC可明显抑制宫颈癌细胞增殖、诱导宫颈癌细胞凋亡,可抑制宫颈癌细胞中抑癌蛋白p53与泛素蛋白连接酶E6AP相互作用,降低p53泛素化修饰水平,延缓p53降解,增加p53蛋白表达水平。结论NC可通过抑制p53泛素化降解,提升p53蛋白表达水平,恢复其抑癌功能,发挥抗宫颈癌作用。

亚超临界体系Fe-Ni/SnO_(2)酸化资源化降解制药污泥的研究

利用浸渍法制备Fe-Ni/SnO_(2)多金属催化剂,并将其用于抗生素的液相催化。结果表明,在反应温度为330℃、反应时间为0.5 h、催化剂添加质量分数为20%、氧化系数为2.5的条件下,诺氟沙星TOC去除率高达78.62%,同时,甲酸质量浓度为64.65 mg/L、乙酸质量浓度为201.65 mg/L、丙酸质量浓度为15.09 mg/L、乳酸质量浓度为35.24 mg/L。回用催化剂催化效率可达到新鲜催化剂的80%,具有较好的稳定性。

毛竹材表面光化降解的FTIR和XPS分析

竹材光变色和光化降解过程比较复杂。该文以我国资源丰富的毛竹为研究对象,利用氙光衰减仪对竹材进行表面劣化处理,采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和X射线光电子能谱(XPS)对竹材表面化学组成和结构变化进行表征。XPS测试结果表明,竹材表面光劣化处理后O元素含量及氧碳比(O/C)明显增加;从C原子结合形式来看,C1(C—C)含量减少,C2(C—O)含量增加,C3(CO)和C4(O-CO)含量增加明显,C的氧化态显著升高。FTIR分析表明,光劣化处理使得与木质素有关的吸收峰(如1 604,1 512及1 462 cm-1)强度明显降低,木质素发生降解;同时1 735 cm-1处非共轭羰基吸收峰强度明显增强,表明有新的羰基类物质生成,竹材表面发生光氧化反应。竹材表面的多糖物质(纤维素和半纤维素)受光劣化影响较小,其相对含量在劣化处理后明显提高。

肉桂高聚原花青素的氢化降解工艺研究

低聚原花青素具有显著的生物活性,高聚体由于空间位阻的影响,活性受到抑制。肉桂在41种食品中原花青素含量位居第一,但高聚体占50%以上。为了充分利用肉桂原花青素资源,采用氢化降解法将肉桂高聚原花青素降解为低聚体。以10%钯碳做催化剂,高压氢气参加反应,考察温度、压强、反应时间和催化剂用量对降解效果的影响。结果表明,平均聚合度为8.2的肉桂高聚原花青素,在100℃,压强3.5MPa,反应200min,催化剂用量0.2g/100mL的条件下,平均聚合度降为2.68。降解产物经HPLC分析表明,此工艺确实实现了肉桂高聚原花青素的降解。

金荞麦高聚原花青素的氢化降解反应

以金荞麦提取高聚原花青素为原料,通过氢化降解的方法将高聚原花青素变为低聚原花青素,研究温度、压力、催化剂、时间对于氢化降解转化率的影响。结果表明:在反应温度为120℃,反应压力为3MPa,Pd/C催化剂用量为0.3g/150mL,反应时间为3.5h时,降解效果为最佳,平均聚合度由6.3降为2.2。并且经过HPLC分析确定,得到降解效果。

改性纳米TiO_2固相光催化降解废弃聚氯乙烯

用偶联剂改性的纳米TiO2作催化剂,采用包埋法制备了一种新型的可光催化降解的纳米PVC-M-TiO2复合薄膜.在空气中紫外光照的条件下进行了该薄膜的光催化降解实验,并与以未改性的TiO2为催化剂的PVC-Un-TiO2复合薄膜的降解效率进行了比较.利用光照失重、傅立叶红外(FT-IR)光谱和扫描电子显微镜(SEM)等方法对光照前后复合薄膜进行了分析表征.实验结果表明PVC-M-TiO2复合薄(TiO2质量百分含量为2%)膜在空气中能被有效的降解,连续光照480h后降解效率达到36.9%,明显高于纯膜及未改性的PVC-Un-TiO2复合膜.

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞P53泛素化降解途径的实验研究

目的从细胞生物学及分子生物学水平探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及P53泛素化降解途径中各个蛋白表达的情况,研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用。方法以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组及保妇康组、安达芬组,通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western-Blot的方法检测HPV16E6、P53、UBcH8、E6-AP蛋白的表达情况。结果经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时含药血清可升高P53、UBcH8蛋白的表达,降低HPV16E6、E6-AP的表达。结论清毒栓含药血清可能是通过调控P53泛素化降解途径而达到抑制肿瘤的目的。

臭氧抑制木材表面光化降解的机理

本文用臭氧溅射椴木单板表面,结果表明:实施这种处理后的木材表面形成一层高氧层(氧含量高于素材),在紫外光的辐射下,集聚在该层中的臭氧也将参与木材表面的自由基反应,这大大减少了原来素材表面的氧参与自由基反应的机会,进而达到抑制木材表面光化降解之目的。

蛋白质的磷酸化作用和泛肽化降解作用与芽殖酵母细胞周期的调控

在芽殖酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）细胞中，Ｇ１期的三种ｃｙｃｌｉｎｓ和Ｓ、Ｍ期的五种ｃｙｃｌｉｎｓ之周期性的合成和分解调节着Ｃｄｃ２８的活性，驱动细胞周期的正常运转。除了ＣＤＫ的磷酸化作用外，蛋白质的泛肽化降解作用间接或直接调控细胞周期：ＣＤＣ３４泛肽化途径通过降解Ｃｄｃ２８的专一抑制子而起始ＤＮＡ复制；ＡＰＣ泛肽化途径通过降解Ｍ期后期的抑制子和Ｍ期ｃｙｃｌｉｎｓ，使姐妹染色体分离和Ｍ期终止。

偶氮染料刚果红在水中的光催化降解过程

通过研究在间歇悬浮体系中直接偶氮染料刚果红在水中的光催化降解过程 ,确定了最佳降解条件 .同时测定了染料溶液的脱色率、COD去除率和矿化率以考察降解过程中脱色与矿化的关系 .另外 ,对降解过程中溶液 pH值的变化及反应的可能中间体进行分析 ,结果表明 :刚果红染料分子的光催化降解过程分为脱色和矿化两个阶段 .矿化主要发生在脱色结束以后 ,并且伴随着脱色溶液的酸化现象 .脱色过程进行较快 ,完全脱色后形成的中间产物需要较长时间才能被逐步矿化 .

Cullin5介导PD-L1泛素化降解对胶质母细胞瘤放射敏感性的影响

目的探究Cullin5对胶质母细胞瘤细胞放射敏感性的影响及其相关机制。方法将flag-NC质粒、过表达(flag-Cullin5)质粒分别转染至胶质母细胞瘤U251细胞,建立flag-NC组、flag-Cullin5组,通过实时反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测细胞中Cullin5和程序性死亡配体1(PD-L1)的mRNA和蛋白表达水平。U251细胞接受0、2、4、8 Gy X线照射后,通过CCK-8法检测细胞存活率,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用免疫共沉淀法检测Cullin5和PD-L1的相互作用,泛素化实验探究Cullin5对PD-L1的泛素化效应。将过表达PD-L1(oe-PD-L1)和flag-Cullin5的质粒转染至U251细胞,建立flag-Cullin5组、flag-Cullin5+oe-NC组和flag-Cullin5+oe-PD-L1组,通过RT-qPCR和WB检测细胞中Cullin5和PD-L1的mRNA和蛋白表达水平。经X线照射各组U251细胞后,通过CCK-8法检测细胞存活率,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用LSD-t检验或单因素方差分析统计两组间或多组间差异。结果与flag-NC组比较,flag-Cullin5组细胞中Cullin5 mRNA和蛋白表达水平升高,PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05);经4、8 Gy X线照射后,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。Cullin5的免疫沉淀物中存在PD-L1蛋白,PD-L1的免疫沉淀物中存在Cullin5蛋白。与flag-NC组比较,flag-Cullin5组细胞中PD-L1蛋白泛素化水平升高。与flag-Cullin5组比较,flag-Cullin5+oe-PD-L1组细胞中PD-L1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);经4、8 Gy剂量的X线照射后,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论Cullin5通过介导PD-L1的泛素化降解,增强胶质母细胞瘤细胞的放射敏感性。

间歇运动降低炎症和蛋白泛素化降解改善心梗导致的大鼠骨骼肌萎缩

目的:探讨间歇运动及间歇运动联合TNF-α抑制剂Etanercept对心梗大鼠骨骼肌MuRF1和Smyd1表征的影响及炎症水平与骨骼肌功能改善的关系。方法:雄性3月龄SD大鼠70只,随机分为假心梗组(S)、心梗组(MI)、心梗+间歇运动组(ME)、心梗+Etanercept组(MIT)、心梗+生理盐水组(MIS)、心梗+间歇运动+Etanercept组(MET)、心梗+间歇运动+生理盐水组(MES),每组10只。采用左冠状动脉结扎法制备心梗模型,S组只在心脏相同位置穿线不结扎。ME组、MET组和MES组术后1周采用大鼠跑台进行间歇运动干预。其中MIT组和MET组于术前3 d腹腔注射Etanercept(1. 2μg/g) 1次,术后i. p. 1次/3 d×4周,MIS组和MES组注射定量生理盐水作为参照。各组训练结束后次日腹腔麻醉,测定心脏功能,之后冰浴条件下快速剥离并切取胫骨前肌,入甲醛固定或液氮冷藏备用。胫骨前肌重量/胫骨长度比值测定骨骼肌质量变化,免疫荧光测定骨骼肌HSP70和骨架蛋白Myosin表达变化及细胞横截面积,RT-qPCR测定骨骼肌MuRF1和MAFbx mRNA基因表达变化,Western blot测定骨骼肌MuRF1、MAFbx、Smyd1、HSP90、TNF-α、NF-κB(pp65)、IL-6、IL-10、HSP70、Myosin和α-actinin蛋白表达变化,糜蛋白酶活性试剂盒检测骨骼肌蛋白酶体活性变化。结果:心梗导致大鼠骨骼肌质量系数、细胞横截面积、细胞骨架蛋白Myosin和α-actinin及肌纤维生成关键因子Smyd1表达显著降低(P <0. 01),MuRF1、MAFbx、TNF-α、IL-6、NF-κB(pp65)和伴侣分子HSP90表达显著升高(P <0. 01),间歇运动或Etanercept干预以及2者联合干预均可显著提高心梗大鼠骨骼肌质量系数、细胞横截面积、IL-10、Myosin、α-actinin和Smyd1蛋白表达(P <0. 05,P <0. 01),降低MuRF1、MAFbx、TNF-α、IL-6、NF-κB(pp65)和HSP90水平(P <0. 05,P <0. 01);心梗大鼠骨骼肌的细胞浆和细胞核MuRF1蛋白表达显著升高(P <0. 05,P <0. 01),糜蛋白酶活性增加(P <0. 01),间歇运动可进一步升高其胞浆和胞核HSP70表达(P <0. 01),降低MuRF1蛋白表达、细胞浆/细胞核HSP70比值和糜蛋白酶活性(P <0. 05,P <0. 01),且机体炎症水平与细胞浆/细胞核HSP70比值呈显著正相关(P <0. 01)。结论:间歇运动或Etanercept干预或2者的共同干预均可显著提高心梗大鼠骨骼肌质量、骨架蛋白和Smyd1的表达,增加细胞横截面积,降低MuRF1、MAFbx和HSP90的表达,改善骨骼肌功能。

一株腈化物降解菌的分离、鉴定及降解特性

从长期被腈化物污染的土壤中分离到一株具有较宽腈化物降解利用谱的菌株YL-1。经过对YL-1形态特征及生理生化指标的分析,初步鉴定为红球菌。YL-1能降解丙烯腈生成丙烯酰胺。YL-1培养40h后可获得54U/mg的干细胞比活力。YL-1降解丙烯腈的最佳条件是温度30℃,pH=7 0,在该条件下对φ(丙烯腈)=0 2%的降解率可达99 4%。

酚顿试剂对竹林土壤中酚类化合物的降解作用(英文)

酚类化合物是农业和生态系统中主要的化感物质之一,大量积累在土壤中,抑制作物和林下植物生长,导致农作物减产、连作障碍和自然生态环境破坏。用过氧化氢(H2O2)与硫酸亚铁(Fe2+)所组成的酚顿试剂研究了化学氧化法对化感物质(对香豆酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌)、竹林土壤提取物及竹林土壤中对香豆酸的降解作用。过氧化氢与硫酸亚铁的摩尔比为15:1的酚顿试剂,过氧化氢与酚类物质浓度比为8:1时,对酚类物质的降解效率最高。以8×10-3mol/L(0.028%)的H2O2,5.4×10-4mol/L(0.075%)的FeSO4和10-3mol/L的酚类物质组成的反应体系中,反应10min和30min后,对香豆酸的降解率分别为55%和74%;对羟基苯甲酸的降解率在10min时达90%以上;而胡桃醌在10min时已经完全被降解。酚顿试剂处理土壤酚类提取物时,可使其中主要的化感物质对香豆酸降解75%。用含0.1%和1%H2O2的酚顿试剂处理竹(Bambusa chungii)林土壤,土壤对香豆酸的降解率分别为32%和37%。竹林土壤中存在过氧化氢酶和过氧化物酶活性,但没有检测到超氧化物歧化酶活性。土壤中的过氧化氢酶和过氧化物酶可能迅速分解外加的过氧化氢,一方面缩短过氧化氢处理的作用时间和降低降解效率,另一方面可分解过剩的过氧化氢。这说明酚顿试剂是降解土壤和培养液中有害化感物质的有效化学氧化剂。

生化法处理难降解混合化工废水的研究

采用厌氧水解与活性污泥处理方法对经预处理的含有酚类、苯类和蒽醌类的混合化工污水进行了处理研究。实验结果表明:当厌氧水解的水力停留时间为9h时,经水解酸化,废水的m(BOD5)/m(CODCr)可提高34.2%,当上流式厌氧滤池进水CODCr的质量浓度为700～900mg/L,总水力停留时间为36h的条件下经厌氧水解-好氧处理,出水CODCr去除率达56.8%,色度,SS,BOD5去除率分别为93.8%,55.9%,87.6%。

纳米酶催化臭氧化降解水体中有机紫外防晒剂

采用纳米酶催化臭氧化降解水体中有机紫外防晒剂的方法,探究在不同反应时间、溶液初始浓度、投加量、温度以及pH条件下通入臭氧对氨基苯甲酸和BP-3降解效率的影响.结果表明,温度35℃,pH 6.2,纳米酶用量0.9 g/100 mL溶液,通入臭氧时间13 min[400 mg/(L·h)],振荡时间30 min,对10 mg/L对氨基苯甲酸溶液的降解率达96%;温度30℃,pH 6.0,纳米酶用量0.1 g/30 mL溶液,通入臭氧时间10 min[400 mg/(L·h)],振荡时间15 min,对20 mg/L BP-3溶液的降解率达为91%,且催化氧化过程符合准一级动力学方程.

竹基微纳米混合纤维素可降解杂化吸管的制备

为了解决可降解吸管价格昂贵,普通塑料吸管难降解、不环保的问题,本研究制备了一种微纳米混合纤维素可降解杂化吸管。以低成本、可降解的毛竹渣作为原料,经氢氧化钠(NaOH)溶液处理得到超细纤维素,通过TEMPO介导氧化从硫酸盐漂白牛皮纸浆中得到纳米纤维素,二者混合后,最终获得微纳米纤维素杂化吸管。对杂化吸管的内部基团和微观形貌进行表征,并对其力学性能、水稳定性、吸水性进行测试。结果表明微纳米纤维素杂化吸管具有可降解、力学性能好、吸水率低、水稳定性好且成本低等优点,有望量化生产成为市面上现有吸管的替代品。

表面碎片化防污技术:超支化可控降解高分子材料

从超支化生物降解高分子防污材料、超支化自生两性离子基双解高分子防污材料、超支化“杀菌-抗污-再生”双解高分子材料3大类防污涂料类型,综述了近年来超支化可控降解高分子基防污材料的进展,并展望了其未来发展趋势。

E3泛素连接酶接头蛋白SPOP介导的底物非降解型泛素化修饰

蛋白质的翻译后修饰是保证其能正常行使功能的前提,泛素化修饰是维持细胞正常蛋白质水平和活性的重要翻译后修饰类型。近年来,大量研究发现,E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckle-type POZ protein,SPOP)在诸多肿瘤与遗传疾病中存在突变,这些突变主要集中在识别底物的MATH结构域影响了与底物之间的结合,进而影响底物的蛋白质水平、定位及活性,并扰乱正常生理功能从而诱发疾病。野生型SPOP能正常结合底物,这些底物绝大多数由SPOP泛素化后进入蛋白酶体途径降解,而也有个别重要底物泛素化后仅是影响其功能改变而并非蛋白质水平的变化。鉴于SPOP在细胞内的重要功能,本文将对SPOP的底物泛素化修饰类型及功能进行详细介绍。包括:泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS),SPOP的结构、功能和作用途径以及SPOP的非降解型泛素化修饰。重点围绕SPOP的3个非降解底物:髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)介导的NF-κB信号通路、组蛋白macroH2A1(macroH2A.1 histone,macroH2A1)的X染色体沉默信号通路,以及成蛋白INF2(inverted formin 2)介导的线粒体分裂融合等信号通路,将其抑制肿瘤发生发展的分子机制进行总结,以期为肿瘤精准靶向治疗提供新思路。