北极刺参岩藻聚糖硫酸酯对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的研究北极刺参岩藻聚糖硫酸酯(Thelenata anaxsulfated fucan,Ta-FUC)对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗症状的改善作用。方法以高脂高糖饮食建立2型糖尿病小鼠模型,以含有0.04%和0.16%TaFUC的饲料分别连续饲喂小鼠11周,实验结束后,称量白色脂肪组织重量,检测各组小鼠空腹血糖、葡萄糖耐受量,及空腹血清胰岛素、脂联素、瘦素、肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)含量。结果Ta-FUC可降低模型小鼠体重(P<0.05),减少小鼠白色脂肪组织重量(P<0.01);并显著降低模型小鼠空腹血糖(P<0.05),提高口服葡萄糖耐受量(P<0.01),降低空腹血清胰岛素水平(P<0.05);同时还可降低血清中瘦素和TNF-α的含量(P<0.05,P<0.01)。结论北极刺参岩藻聚糖硫酸酯对模型小鼠的胰岛素抵抗具有显著的改善作用,其作用机理可能与改善肥胖引起的脂肪组织细胞因子的分泌紊乱有关。

海地瓜和冰岛刺参海参岩藻聚糖硫酸酯抗肿瘤作用的比较研究

目的:采用离子交换层析法分别从海地瓜和冰岛刺参中,分离纯化两种海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC),通过建立小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,比较分析两种SC-FUC对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用。方法:采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成,采用离子色谱法测定其硫酸基含量。通过连续腹腔注射两种SC-FUC 21d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤质量和计数肺表面转移灶结节数。采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:海地瓜SC-FUC和冰岛刺参SC-FUC均由岩藻糖组成,硫酸基含量分别为26.3%和29.31%;两者均能显著抑制荷瘤小鼠原位肿瘤的生长,抑瘤率分别为19.24%和28.69%;显著减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),转移抑制率分别为31.4%和57.1%;显著降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。冰岛刺参SC-FUC的效果要优于海地瓜SC-FUC。结论:两种SC-FUC均能显著抑制肿瘤的生长和转移,其作用机制与其高硫酸化程度有关。

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了 3种低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯 (LMWF M、LMWF -Ⅰ、LMWF -Ⅳ )体外清除超氧阴离子自由基 (O2-· )及羟基自由基 (·OH)的作用 ,并观察了LMWF M对高脂血症大鼠的抗氧化作用。结果表明低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力 ,随体系中LMWF浓度的增加 ,其清除活性氧自由基的能力增强。LMWF -Ⅰ清除自由基的能力最强 ,它对O2-·的IC50 为 0 .0 44mg·mL-1,对·OH的IC50 为 0 .0 6 2mg·mL-1。LMWF M能显著降低高脂血症大鼠血清和组织中LPO含量 (P <0 .0 1) ,增强SOD活力 (P <0 .0 1)。

海参岩藻聚糖硫酸酯抑制小鼠肿瘤生长和转移及其作用机制的研究

目的探讨海参岩藻聚糖硫酸酯(sea cucumber fu-coidan,SC-FUC)对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用及其机制。方法建立C57 BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)mRNA的表达。结果 SC-FUC可以抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其平均抑制率为45.5%,并可以减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),平均抑制率为66.0%。SC-FUC可以降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α、VEGF、HPA、MMP-2/9 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论 SC-FUC能抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移,其机制可能与抑制肿瘤血管新生,降低肿瘤细胞的迁移能力有关。

马尾藻岩藻聚糖硫酸酯纯化及降血脂功能研究

以亨氏马尾藻为原料,运用超声波浸提工艺提取得到的岩藻聚糖硫酸酯(SPF),采用乙醇分级沉淀法纯化后经脱脂、脱蛋白得到初级纯化的岩藻聚糖硫酸酯,喂食高血脂症的小鼠,探讨其降血脂的功能。结果表明:亨氏马尾藻岩藻聚糖硫酸酯高、中、低3个剂量组的降血脂效果都优于药品对照脂必妥的降血脂效果,并且以高剂量的降血脂效果最佳,能够极显著(P<0.01)的降低总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯的含量,能显著(P<0.05)提高高密度脂蛋白的含量,且高于空白组;能显著降低动脉硬化指数,动脉粥样硬化指数AI1和AI2都有极显著影响(P<0.01)。说明亨氏马尾藻初级岩藻聚糖硫酸酯多糖具有明显的降血脂功能。

多肋藻岩藻聚糖硫酸酯的提取及其降血脂作用研究

通过对多肋藻Costaria costata基本成分的测定与对多肋藻中活性成分岩藻聚糖硫酸酯提取工艺进行优化,研究了提取的岩藻聚糖硫酸酯对小鼠血清高血脂的抑制作用。结果表明:多肋藻的水分、灰分、蛋白质、脂肪含量分别为10.55%、15.40%、11.13%、2.00%(质量分数,下同),多肋藻的总膳食纤维、碘、甘露醇含量分别为48.05%、0.10%、11.30%。正交试验结果表明,岩藻聚糖硫酸酯的优化提取工艺为酶加量0.10%、温度50℃、pH 5.5、酶解时间30 min,在此条件下岩藻聚糖硫酸酯的提取率为1.859%,总糖与总硫酸根含量分别为1.416%和0.972%。建立高血脂症小鼠模型,采用岩藻聚糖硫酸酯粗提物对其灌胃,试验结果表明:各剂量组对小鼠血清总胆固醇(TC)均具有显著抑制作用(P<0.05);剂量高于500 mg/(kg.d)时,对小鼠血清甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)具有显著抑制作用(P<0.05)。多肋藻岩藻聚糖硫酸酯粗提物对高血脂症中的三项指标均具显著抑制作用,表明其有一定的降血脂功能。

海带岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对小鼠肝损伤的保护作用

目的 : 研究海带岩藻聚糖硫酸酯低聚糖 (LMFO)的抗氧化活性及对肝损伤的保护作用。方法 : 给药组小鼠分别灌胃 (ig)给 LMFO5 0、1 0 0、1 5 0 mg/ (kg·d) ,连续 1 0 d作预处理 ,以甘利欣 (90 mg/ kg)做阳性对照。然后分别以 0 .2 %CCl4 1 0 ml/ kg和 D-氨基半乳糖 (D- Gal N,6 0 0 mg/ kg) +脂多糖 (LPS,1 μg/ kg)造成肝损伤 ,观察小鼠血清谷草酶 (GPT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的活性及丙二醛 (MDA)的含量。结果 : 在 CCl4 和 D-Gal N+LPS两种肝损伤模型中 ,LMFO均可以非常显著地抑制肝损伤小鼠的血清 GPT的活性和MDA值的升高 ,并能提高其血清 SOD和 GSH- Px的活性。在 CCl4 和 D- Gal N+LPS肝损伤模型中 ,分别以中浓度和高浓度的 LMFO的抗氧化和肝脏保护作用最好。说明 LMFO可以保护机体和肝细胞内的内源抗氧化系统 ,抑制 CCl4 产生的自由基造成的脂质过氧化 ,抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用 ,从而达到保护肝脏的作用。结论 : LMFO具有很好的肝脏保护作用 ,其作用可能与其很好的抗氧化作用有关。

岩藻聚糖硫酸酯低聚糖降压作用的初步研究

采用两肾一夹型建立肾血管性高血压大鼠模型。探讨岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对肾血管性高血压大鼠的血压、呼吸及血浆中血管紧张素 (Ang )含量的影响。用 GY- 6 0 88型多道生理参数分析记录仪和张力传感器测定、记录血压和呼吸 ;用均相竞争法测定 Ang 的含量。实验表明 ,1 2 .5 ,2 5 ,5 0 mg/ kg的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖均能显著地降低肾血管性高血压大鼠的动脉血压。其中 ,高剂量 (5 0 mg/kg)的降压效果与 1 4 mg/kg的卡托普利相当 ;给药大鼠的呼吸频率随血压的变化呈正相关变化 ;1 2 .5 ,2 5 ,5 0 mg/ kg剂量的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖均能降低高血压大鼠血浆中 Ang 的含量。其中 ,高剂量 (2 5 ,5 0 mg/ kg)组的 Ang 水平同卡托普利组 (1 4 mg/ kg)相当。岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对肾血管性高血压大鼠有显著的降压作用 ,抑制 Ang 生成可能是其降压机制之一。

海参岩藻聚糖硫酸酯对巨噬细胞的调节作用及信号通路研究

目的研究海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路,探究其调节机体免疫的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测巨噬细胞的增殖情况;中性红法检测吞噬活性;Griess试剂法测定培养上清液中NO含量;RT-PCR检测巨噬细胞下游细胞因子IL-6、IL-10、Toll样受体和相关信号分子My D88、TRIF、NF-κB的mRNA表达量。结果 SC-FUC对巨噬细胞增殖、吞噬能力和NO分泌均有促进作用,在作用前期(6h和12h)效果更为明显。SC-FUC能上调细胞因子IL-6和IL-10的mRNA表达量,上调TLR4、TLR5、TLR9的表达量,促进信号分子My D88、TRIF和NF-κB的mRNA表达量。结论 SC-FUC能够激活巨噬细胞,促进其分泌NO、IL-6、IL-10等细胞因子,从而发挥免疫调节作用。SC-FUC激活巨噬细胞的信号通路与细胞表面TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB通路相关。

海带岩藻聚糖硫酸酯测定方法的研究

应用次甲基蓝分光光度法测定溶液中岩藻聚糖硫酸酯的含量 ,有色化合物的最大吸收波长为 5 6 0 nm ,在 4～ 2 0μg/ m L内线性良好 (r=0 .999) ,回收率为 (96 .2 7± 1.6 6 ) %。在测定过程中 ,无机盐影响较大 ,蛋白质影响很小 ,而 p H值、其它糖没有影响 ,PBS(磷酸盐缓冲液 )能完全消除褐藻胶对测定的影响。实验证明 ,该方法准确、快速、灵敏度高。

岩藻聚糖硫酸酯低聚糖的制备及其抗氧化活性研究

探讨H2O2降解岩藻聚糖硫酸酯的条件及其产物的抗氧化活性。采用Cu2+-H2O2体系降解原料Fucoidan,结果发现反应时间越长得到的高分子量的组分越少,而低分子量的低聚糖产量增加;H2O2浓度增高,水解所得主要组分的分子量明显减小;温度升高,水解速度明显加快;产物的硫酸根含量随反应温度和H2O2浓度的降低而增加。用Pyrogallol—Luminol系统对水解产物的抗氧化活性进行了研究,发现硫酸根含量低的Fucoidan水解产物除O2.-的活性较好,其中15%H2O2降解得<5KD的低聚糖清除O2.-的活性明显高于肌肽(IC50为0.65mg/mL),IC50为0.17mg/mL。

海参岩藻聚糖硫酸酯对小鼠胰岛素抵抗及炎症因子的影响

目的:比较研究海地瓜岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan from Acaudina molpadioidea,Am-FUC)和美国肉参岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan from Isostichopus badionotus,Ib-FUC)对肥胖小鼠胰岛素抵抗及相关炎症因子的改善作用。方法:以高脂高果糖饲料饲喂法建立胰岛素抵抗小鼠模型。雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、实验A、B、C、D组。正常对照组饲喂标准饲料,其他组饲喂高脂高果糖饲料。阳性对照组、实验A、B、C、D组分别在饲料中添加罗格列酮(rosiglitazone,RSG,1 mg/(kg·d))、低剂量Ib-FUC(20 mg/(kg·d))、高剂量Ib-FUC(80 mg/(kg·d))、低剂量Am-FUC(20 mg/(kg·d))、高剂量Am-FUC(80 mg/(kg·d))。各组小鼠自由摄食摄水120 d。实验结束后,称量小鼠白色脂肪质量,检测空腹血糖、血清胰岛素及血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、瘦素、脂联素水平。结果:2种FUC均可极显著地降低胰岛素抵抗小鼠的脂肪积累(P<0.01),降低血糖(P<0.01)和胰岛素(P<0.01)水平,改善胰岛素抵抗(P<0.01),降低TNF-α(P<0.01)、IL-6(P<0.01)和瘦素(P<0.01)含量,提高血清脂联素含量(P<0.01)。Am-FUC效果优于Ib-FUC。结论:Am-FUC和Ib-FUC能显著改善胰岛素抵抗小鼠的高血糖症状及胰岛素抵抗程度,Am-FUC的效果优于Ib-FUC,其作用机制可能与改善肥胖引起的细胞因子的分泌有关。

海带岩藻聚糖硫酸酯对四氯化碳致肝损伤小鼠的保护作用

对小鼠分别灌胃200、400、800 mg/(kg.d)的海带岩藻聚糖硫酸酯(简称FLJ,利用酶解法制备),于第7天腹腔注射四氯化碳制备小鼠急性肝损伤模型,以200 mg/(kg.d)的联苯双酯做阳性对照。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察肝组织形态学变化,研究FLJ对CCl4诱导急性肝损伤小鼠的保护作用。结果表明:FLJ各剂量均能抑制肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高,且中、高剂量组达到显著水平,并能显著提高肝组织中SOD活力、降低MDA含量,减轻由对肝细胞的病理损伤。FLJ对CCl4造成的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。

北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯分离纯化及结构分析

目的:从北大西洋瓜参(Cucumaria frondosa)体壁中提取纯化得到一种北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯(CF-FUC),并对其结构特征进行研究。方法:利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化出CF-FUC组分,以高效凝胶过滤色谱法测定分子质量,以离子色谱法测定硫酸根含量,以柱前衍生高效液相色谱法测定单糖组成,并通过核磁共振技术推测其精细结构。结果:CF-FUC的分子质量为360kD,硫酸根含量为(29.8±3.2)%,单糖组成为岩藻糖、半乳糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖物质的量比为1:0.22:0.07:0.07,岩藻糖存在两位硫酸酯化α型吡喃岩藻糖及非硫酸酯化α型吡喃岩藻糖两种形式。结论:CF-FUC结构有别于其他海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)。

海带岩藻聚糖硫酸酯酶解工艺及分离和纯化研究

岩藻聚糖硫酸酯是一种具有多种生物活性的多糖,对用纤维素酶、果胶酶酶解制备海带岩藻聚糖硫酸酯的工艺进行了研究,正交试验结果表明:纤维素酶、果胶酶优化的酶解工艺参数为:纤维素酶0.221%、果胶酶0.074%,温度50℃,pH值4.5,时间50min。经DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离得到3个岩藻聚糖硫酸酯组分,3个组分经Sephadex G-200凝胶柱层析进一步纯化得5个分子量很大(大于2MDa)的组分,可能为岩藻聚糖硫酸酯的凝聚体,另5个组分的分子量为57.8KDa、115KDa、125KDa、154KDa、206KDa。

海参岩藻聚糖硫酸酯对小鼠急性酒精中毒防治作用的研究

目的研究海参岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan isolatedfrom sea cucumber,SC-FUC)对小鼠急性酒精中毒的防治作用。方法将♂ICR小鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、益肝灵阳性对照组、SC-FUC低、高剂量组(50和100mg.kg-1.d-1),连续灌胃SC-FUC 4 d,于末次给药后1 h按体重灌胃乙醇体积分数为56%的白酒(15 ml.kg-1),分别记录醉酒和醒酒时间,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ala-nine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspar-tate aminotransferase,AST)活性,肝脏中乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase,ADH)、乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogen-ase,ALD)、谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果 SC-FUC能有效推迟小鼠的醉酒时间,缩短醒酒时间,明显降低小鼠血清ALT和AST活力(P<0.01),提高肝脏ADH、ALD和抗氧化酶GSH-Px和CAT活力,降低MDA含量,对SOD活力无明显影响。结论 SC-FUC能明显促进乙醇在小鼠肝脏中的代谢速度,提高肝脏的抗氧化能力,具有较好的防治醉酒和保护肝脏作用。

岩藻聚糖硫酸酯体外抗氧化特性的研究

采用化学发光分析法研究岩藻聚糖硫酸酯清除超氧阴离子自由基 (O· -2 )及羟基自由基(· OH)的作用 ,并以高效液相色谱法研究对卵磷脂 (PC)过氧化的抑制能力。结果显示 :(1)三种岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力 ,但清除超氧阴离子自由基的能力高于清除羟基自由基的能力。其中糖醛酸含量高和硫酸酯含量低的组分 清除自由基的能力最强 ,它对 O· -2 的IC50 为 0 .0 4 4 mg/m L,对· OH的 IC50 为 0 .0 6 2 mg/m L。 (2 )岩藻聚糖硫酯具有抑制 PC过氧化的能力。岩藻聚糖硫酸酯组分受活性氧损伤后 ,它们的抗氧化能力均降低。研究表明 ,岩藻聚糖硫酸酯具有较强的体外抗氧化的功能。

泡叶藻及海带藻渣中岩藻聚糖硫酸酯的提取及其抗氧化活性

采用超声波辅助提取方法提取泡叶藻(Ascophyllum mackaii)及海带(Laminaria japonica)藻渣中岩藻聚糖硫酸酯,以均匀试验设计建立回归模型优化高效制备提取工艺。采用高效凝胶过滤色谱法(HPGPC)进行了相对分子质量检测及理化性质分析;利用Fenton反应检测法、邻苯三酚自氧化法等进行了抗氧化活性研究。结果表明,优化的高效制备技术的超声波最佳条件为超声70 min,温度为90℃,水提时间2 h,料液比1︰80,泡叶藻及海带藻渣中岩藻聚糖硫酸酯的高效提取率分别为4.49%和3.69%,分子质量分别为142 kDa和136 kDa,泡叶藻和海带藻渣中的岩藻聚糖硫酸酯均具有较好的清除超氧阴离子自由基、羟自由基能力及还原能力。海带的抗氧化活性总体略高于泡叶藻。

自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性

以海带(Laminaria japonica)为原料,采用阴离子交换和自由基氧化降解反应制备了不同分子量和硫酸根含量的岩藻聚糖硫酸酯,然后以血浆复钙时间(RT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)为指标,研究海带岩藻聚糖硫酸酯抗凝血活性的构效关系。结果表明,采用离子交换,可从海带糖提取物中分离出低硫大分子组分F-A和高硫大分子组分F-B。粗糖经自由基氧化降解,可得到分子量为1.5 kD和8.0 kD左右的低分子组分,实验重复性好,产物分子量集中,其中分子量8.0 kD左右的低分子组分硫酸根含量最高。抗凝血实验表明,岩藻聚糖硫酸酯能显著延长RT、APTT和TT,尤以高硫组分大分子F-B抗凝血效果最好,而对PT影响不大,说明岩藻聚糖硫酸酯对外源凝血系统影响很小,它的抗凝血活性主要是通过内源性凝血途径来实现的。岩藻聚糖硫酸酯分子量对抗凝血活性的影响要比硫酸根含量的影响更大,其抗凝血活性随着分子量的降低而显著降低。对于分子量相近的岩藻聚糖硫酸脂,硫酸根含量越高,则抗凝血活性越高。总之,岩藻聚糖硫酸酯分子量和硫酸根含量越高,其抗凝活性越高。

海带岩藻聚糖硫酸酯对小鼠的免疫调节作用

目的:采用免疫学评价方法,研究海带岩藻聚糖硫酸酯对小鼠免疫功能的调节作用。方法:以海带粗多糖为原料,采用酸提取、离子交换和自由基氧化降解法制备得到不同的岩藻聚糖硫酸酯组分。KM小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和海带岩藻聚糖硫酸酯组分F-2、Fa和Fb的低、中、高剂量组。除正常组外,其余皮下注射氢化可的松造成免疫低下模型后灌胃。海带岩藻聚糖硫酸酯F-2、Fa和Fb组小鼠分别灌胃F-2、Fa和Fb不同剂量多糖溶液(分别为25、50、100mg/(kg.d)),阳性对照组灌胃盐酸左旋咪唑(20mg/(kg.d)),进行免疫指标的测定。结果:F-2、Fa和Fb组均能显著提高免疫低下小鼠的脾脏质量/体质量比值,提高血清溶血素含量和提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,且F-2和Fa组能增强迟发型变态反应能力,但Fb组对迟发型变态反应能力无显著性影响。结论:海带岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠具有较好的免疫调节作用,且中、低分子质量的岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠的免疫调节作用没有显著性差异。