北柴胡及常见伪品藏柴胡、锥叶柴胡鉴别研究

目的建立北柴胡、藏柴胡、锥叶柴胡鉴别方法。方法采用外观性状鉴别、薄层色谱和HPLC指纹图谱系统建立北柴胡、藏柴胡、锥叶柴胡鉴别方法。结果锥叶柴胡横切面为菊花状,北柴胡横切面为年轮状并具有不定程度的裂纹,外部有较薄的黑色外环纹,藏柴胡横切面较平整,外部有较厚的黑色外环纹。薄层色谱显示藏柴胡的荧光斑点强度最强,北柴胡与藏柴胡相似,荧光强度较藏柴胡弱,锥叶柴胡在Rf值约为0.90处具有独特的绿色荧光斑点。HPLC指纹图谱显示,藏柴胡与北柴胡野生药材的相似度约在0.50~0.80,锥叶柴胡与北柴胡野生药材的相似度约在0.20~0.45,北柴胡与北柴胡野生药材的相似度在0.90以上,可以相似度数值范围区分北柴胡、藏柴胡与锥叶柴胡。结论3种鉴别方法均可用于对上述3种柴胡的鉴别,且各有利弊,因此内外在质控方法联用可更加有效地鉴别柴胡品种,保障临床用药质量。

韭菜迟眼蕈蚊在北柴胡种植地空间格局的初步研究

为研究韭菜迟眼蕈蚊在北柴胡种植地中的空间格局,2022年5~6月对韭菜迟眼蕈蚊成、幼虫在略阳北柴胡种植地中的空间分布情况进行调查,采用频次比较法对调查结果进行多种分布型的拟合计算。结果表明在北柴胡种植地中,韭菜迟眼蕈蚊幼、成虫的空间格局均为聚集型分布,符合负二项分布。韭菜迟眼蕈蚊成虫在北柴胡种植地中主要集中在植株顶部上方飞行,植株顶部上方0至30.00 cm高度内的成虫占比达到71.51%,其中在植株顶部上方约15.00 cm处飞行的成虫最多,粘虫板粘附成虫数量达到10.6头/板。

基于高通量测序的北柴胡根转录组SSR位点信息分析

以北柴胡根为试材,采用高通量转录组测序方法,获得uingene序列信息,研究分析SSR分布、基元特征,设计、验证EST-SSR引物的有效性,为开发、丰富EST-SSR分子标记奠定基础。结果表明:从北柴胡根转录组中共筛选到31176个SSR位点,分布于21732条unigenes,出现的频率为20.08%,分布密度为3.20个/10 kb,主要重复基元类型以二核苷酸最为丰富,共21056个,占SSR位点总数的67.54%;其次是单核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR的19.05%和12.07%;四核苷酸~六核苷酸重复基元数量均较少。不同核苷酸基序类型共有131种基元,重复基元次数在5~11次的数量最多,占SSR总数的91.7%,且长度基本小于15 bp,其中AT/AT和AC/GT这两种基元在二核苷酸中出现频率最高。2064条和1004条含有SSR位点的unigenes分别注释到GO和KEGG通路,获得注释的基因功能主要与基础代谢相关。从22090对具有潜在多态性的EST-SSR引物中,随机挑选20对引物对3个北柴胡种质DNA进行PCR扩增,扩增成功率最高达85%。北柴胡根转录组SSR位点丰富、可用性较强,将促进柴胡的种质资源评价及分子标记辅助育种等工作。

北柴胡质量控制研究

目的对北柴胡质量进行控制。方法分析采用VenusilXBPC_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0mL/min;柱温35℃;检测波长210nm。建立HPLC指纹图谱,测定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F、6″-O-乙酰基柴胡皂苷A的含量,进行主成分分析。结果12批药材指纹图谱中有13个共有峰,相似度0.970~0.995。7种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9998),平均加样回收率90.75%~100.91%,RSD1.6%~4.0%。内蒙古、山西产药材中各成分含量接近。结论该方法精密、准确、稳定,可用于北柴胡质量评价。

北柴胡农艺性状与总黄酮、皂苷含量的相关性研究

目的研究北柴胡农艺性状与总黄酮、皂苷含量的相关性,为柴胡的良种选育提供参考依据。方法采用常规方法测定11个不同种质北柴胡一年生和二年生的农艺性状指标,紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定柴胡皂苷含量,运用Origin Pro 2021软件分析农艺性状与总黄酮、皂苷含量之间的相关性。结果农艺性状会对北柴胡总黄酮、皂苷含量产生影响。一年生农艺性状与含量的相关性分析表明,主茎叶长、根长、根鲜重、根干重与总黄酮含量之间存在负相关;根冠比与皂苷c含量之间存在极显著正相关;须根数与皂苷d、a+d含量之间存在显著正相关。二年生农艺性状与含量的相关性分析表明,主茎叶宽、根粗与总黄酮含量之间存在显著正相关,茎生叶数与皂苷c含量之间存在显著负相关;根干重与皂苷d、a+d、c+a+d含量之间存在显著正相关;根粗、根干重与皂苷a含量之间存在正相关。生长年限也会对北柴胡总黄酮、皂苷含量产生影响,随着生长年限的增加,总黄酮含量增加,皂苷含量减少。结论以皂苷含量为选育指标,须根数、根粗、根干重可作为北柴胡良种选育的重要指标。

北柴胡与不同作物套种的生态种植模式比较研究

目的:比较不同种植模式下北柴胡产量、质量及综合效益的差异,为北柴胡的生态种植推广应用提供科学依据。方法:通过UHPLC方法测定北柴胡的柴胡皂苷含量,通过随机样方统计测定北柴胡产量,采用SPSS统计软件对北柴胡-玉米套种、北柴胡-高粱套种等套种模式下北柴胡药材的成苗数、产量、柴胡皂苷含量进行统计分析。结果:北柴胡-玉米套种模式下,出苗期遮阴率为78%,柴胡皂苷a+d的含量为0.62%,产量较单种北柴胡提升15.91%,每667 m^(2)增收3823.2元,且药材品相优良,分支较少;北柴胡-高粱套种模式下,出苗期遮阴率为87.36%,柴胡皂苷a+d的含量为0.62%,产量较单种北柴胡相差1.89%,每667 m^(2)增收1765元。结论:玉米-北柴胡套种模式更具优势,实施方法是条播北柴胡,行距30 cm,播种量每667 m^(2)播种北柴胡种子2.5 kg,每隔2行北柴胡种植1行玉米。

不同激素浸种对北柴胡种子萌发的影响

为了探究6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、赤霉素(GA_(3))、吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)4种激素对北柴胡种子萌发的影响,为北柴胡种子处理提供理论支持,以北柴胡种子为试验材料,用不同质量浓度的4种激素浸种,开展了北柴胡种子萌发试验。结果表明,不同激素种类和激素处理浓度均可影响北柴胡种子的萌发。与清水浸种对照相比,50 mg/L 6-BA、100 mg/L GA_(3)浸种均可显著促进北柴胡种子的萌发,且前者效果更好;50 mg/L IBA浸种可促进北柴胡种子的萌发,但效果不显著;25 mg/L NAA浸种会显著抑制北柴胡种子的萌发。生产中适宜用50 mg/L 6-BA处理北柴胡种子3 h,可以显著提高北柴胡种子的发芽势、发芽率和发芽指数。

半干旱区不同栽培模式对北柴胡农艺性状和产量的影响

以北柴胡为研究材料,比较研究了半干旱区不同栽培模式对北柴胡农艺性状和产量的影响。结果表明:黑膜全地面覆盖垄上栽培出苗率较对照提高14.22%;根长较对照提高67.47%;株高较对照提高43.08%,亩产量较对照增加101.41 kg,提高32.97%,达到409.03 kg。综合考虑出苗率和产量,黑膜全地面覆盖垄上栽培模式可大力推广。

北柴胡(Bupleurum chinese)花序分化进程研究

为了了解造成北柴胡(Bupleurumchinese)种子发芽率低、无胚率高等种子质量问题的原因,本文对北柴胡花序分化进程的各个时期以及不同位置花序分化进程的差异进行了研究。根据观察结果,将北柴胡花序分化进程划分为初生期、小伞原基分化期、小花原基分化期、雌雄蕊原基分化期、生殖结构分化始期和花粉粒完熟期6个时期。同时,发现各级次级花序均比上一级花序在分化进程上落后至少1个时期。不同位置花序分化进程的不同步性是导致北柴胡种子质量问题的一个重要原因。通过人工措施促进早分化的主茎及Ⅰ和Ⅱ级花序发育,抑制晚发育的Ⅲ和Ⅳ级花序发育,可望提高北柴胡的种子质量。

略阳北柴胡韭菜迟眼蕈蚊危害情况及发生规律初探

为了了解韭菜迟眼蕈蚊在北柴胡上的危害情况和发生特点,对韭菜迟眼蕈蚊在略阳北柴胡种植地中的发生情况进行调查,并于2020-2021年对其种群动态通过黄板诱集及挖根检查等方法进行系统调查。调查发现韭菜迟眼蕈蚊在略阳各北柴胡种植地均有发生,严重时危害率达85%,死株率达23%;韭菜迟眼蕈蚊一年中存在春(4月中旬至6月中旬)、秋(9月上旬至9月下旬)2个危害高峰,其中春季危害高峰的危害期长且发生严重。

不同施氮量对北柴胡质量及其土壤微生态影响

目的:探究不同施氮量与柴胡产量、质量及土壤微生物群落变化之间的关系,为合理施肥提供科学依据。方法:以二年生北柴胡为试验对象,研究不施氮肥(0 g/盆)、低氮(1.377 g/盆)、高氮(2.754 g/盆)三个处理的北柴胡产量、质量及其土壤化学性质、酶活性、微生物功能多样性的差异。结果:外源施氮主要促进根中柴胡皂苷a的积累,其中低氮组含量较对照组提高51.35%,且该处理可显著提高根重及根冠比。同时氮肥的施入引起土壤pH值降低、β-葡萄糖苷酶活性增强,并促进土壤微生物代谢。冗余分析结果表明,电导率、pH值是影响土壤微生物碳源代谢的主要因素,以醇类、胺类为碳源的微生物对氮素较为敏感。结论:适量的氮有利于柴胡根系生长发育及土壤微生态平衡,若土壤含氮量超过阈值,则会对植物根系发育、次生代谢产物及微生物产生一定的不利影响。

北柴胡标准汤剂的制备与质量评价研究

目的根据标准汤剂的制备方法制备15批北柴胡标准汤剂,并对其进行质量评价研究。方法收集产自不同地区的15批北柴胡饮片,依据标准化工艺制备成15批北柴胡标准汤剂。以出膏率、柴胡皂苷a含量及其转移率、特征图谱为主要表征参数,对北柴胡标准汤剂进行质量评价。结果北柴胡标准汤剂的出膏率在13.71%~17.21%之间;柴胡皂苷a转移率在21.24%~37.17%之间,其中特征图谱指认了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷b 1和柴胡皂苷b 2共4个共有峰。结论本研究制备的北柴胡标准汤剂符合《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》中的相关规定,建立的含量与特征图谱测定方法精密度、稳定性及重复性良好,可为北柴胡标准汤剂及其配方颗粒的质量控制提供参考。

北柴胡内生真菌分离鉴定及其生防促生活性分析

为揭示北柴胡植株内生真菌组织分布特点,探索具有拮抗活性和促生活性内生真菌资源,本试验采用组织块分离法对北柴胡植株根、茎、叶内生真菌进行分离并鉴定,通过活性测试,包括体外抑菌活性、产真菌细胞壁降解酶能力、分泌IAA能力、固氮活性、解钾活性、溶磷活性、产铁载体能力,筛选具有生防与促生作用的北柴胡内生真菌。结果表明,北柴胡内生真菌在茎中的分离率(84.14%)、多样性指数(1.31)最高,青霉菌属(Penicillium)与生赤壳属(Bionectria)为根、叶内生真菌优势属,链格孢属(Alternaria)和曲霉属(Aspergillus)为茎内生真菌优势属。在54株测试菌株中,BCS-428[深绿木霉(Trichoderma atroviride)]及其发酵液抑菌活性最高,BCS-591[尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)]及BCS-500[草酸青霉(Penicillium oxalicum)]具有较高的IAA分泌能力,分泌量分别为59.55 mg/L和76.16 mg/L。BCR-513[嗜松篮状菌(Talaromyces pinophilus)]具有较强的解钾活性,相比空白营养液,菌液可溶性钾增加26.76 mg/L;BCL-449(Coprinellus silvaticus)具有较强的固氮活性,菌液可溶性氮含量增加111.51 mg/L;BCR-427(Aphanocladium aranearum)和BCS-420[细疣篮状菌(Talaromyces verruculosus)]表现出较强的溶解有机磷与无机磷活性。综上,北柴胡内生真菌资源丰富,从北柴胡内生真菌中寻找开发生防与促生功能菌株具有巨大潜力。

粉末显微鉴定北柴胡与竹叶柴胡及鉴别意义

柴胡作为草本植物,受生长区域影响,虽然不同区域的柴胡植物外观无显著差异,但其品种、皂苷成分含量、实际用药价值等均存在一定差异,所以不同品种的柴胡,需加强鉴定、分辨方面的工作,尤其是外观相似度相对较高的北柴胡、竹叶柴胡,有效鉴别两种柴胡可以帮助药师选择更适宜的柴胡入药品种,保障用药效果。本研究针对北柴胡和竹叶柴胡的粉末显微鉴定结果展开论述,以便于为这两种柴胡的鉴定、鉴别方法提供依据。

不同居群北柴胡ISSR遗传多样性分析

利用简单重复间序列(inter-simple sequence repeat,ISSR)分子标记技术对10个不同居群的北柴胡样品进行遗传多样性分析,为进一步开展北柴胡优良种质的选育提供依据。以不同居群的北柴胡新鲜叶片为材料,用植物组织DNA提取试剂盒提取北柴胡样品DNA。利用单因素梯度实验研究最佳ISSR-PCR反应体系,将不同居群的DNA扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,利用NTSYS-pc软件分析不同居群北柴胡的遗传多样性。结果发现,10个居群的北柴胡遗传相似系数介于0.1428~1.0000。经聚类分析,10个不同居群的北柴胡分为3大类,第1类为甘肃北柴胡;第2类包括5个北柴胡样品,分别为陵川、河南、闻喜、平陆、襄汾北柴胡,均属于山西省晋南居群;第3类包括4个北柴胡样品,分别为内蒙古、临汾、浑源、广灵北柴胡,类属于山西省北部居群及内蒙古居群;10个居群的北柴胡存在比较丰富的遗传多样性,且与其地理环境有一定的关联性。研究结果可为北柴胡种质资源保护及优良种质选育提供理论依据。

基于太赫兹及含Inception块残差网络的北柴胡鉴别

为更准确鉴别藏柴胡、锥叶柴胡和北柴胡,本文首先对柴胡样本进行太赫兹光谱测定,然后用含Inception块的残差网络对光谱数据进行识别.本文方法将Inception块中的卷积核收缩成一维,通过一维Inception块堆叠及残差连接来构建残差网络的主干部分.主干部分后面依次是全局平均池化(Global Average Pooling,GAP)层、全连接(Full Connection,FC)层和Softmax层,其中,网络的主干部分用于对输入的太赫兹光谱数据进行多尺度特征提取,GAP层用于汇聚多尺度特征,FC层和Softmax层用于实现最后的分类.本文算法与9种传统模式识别算法进行了对比实验.结果表明,本文算法鉴别精度达88.99%,优于9种传统模式识别算法.本文算法为北柴胡的鉴别提供了新的解决方案.

北柴胡标准汤剂中柴胡皂苷量值传递规律研究

目的:通过计算北柴胡中柴胡皂苷(SS)的K值,研究北柴胡标准汤剂中物质传递规律。方法:依据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》制备北柴胡标准汤剂,同时针对SS中的原生苷与次生苷建立超高效液相色谱(UPLC)特征图谱方法,采用对照品进行特征峰指认,并结合以标准汤剂、饮片中单位浓度下特征峰峰面积、标准汤剂出膏率为因子的公式,计算K值,描述标准汤剂中SS的量值传递。结果:采用UPLC建立的特征图谱确定了SS类9个特征峰,采用对照品指认了7个特征峰,经方法学验证,精密度、稳定性良好,能适用于标准汤剂特征图谱的检测。并基于SS特征图谱数据结合K值对标准汤剂物质分析,结果显示峰1、2、3、4、8的K值均小于1,表明标准汤剂中该SS类成分不易转移或发生分解(即负转化);峰7、9的K值大于1,表明标准汤剂中该SS类成分得到富集或由其他物质转化而来(即正转化);峰5、6在不同批次中传递趋势不同。结论:采用特征图谱结合K值分析的模式,能够明确北柴胡标准汤剂中SS类成分的物质传递规律,以指导北柴胡配方颗粒的生产全过程,保证临床用药的安全性、有效性。

不同贮藏条件对北柴胡种子发芽率的影响研究

在北柴胡种子含水量12%~14%的情况下,采用室内常温、5℃冷藏、-5℃冷冻3种不同的贮藏温度;在每一个恒定温度条件下,种子分别贮藏120天、180天、270天、360天、450天。通过对不同温度条件下不同贮藏时间北柴胡种子发芽情况调查,结果表明:北柴胡的种子在种子含水量12%~14%的前提下,贮藏温度5℃,贮藏时间180天发芽率最高为53%,低温干燥有利于延长柴胡种子寿命,保持较高种子发芽率。

基于ITS序列PCR-RFLP鉴别北柴胡混伪品藏柴胡

目的基于ITS序列用PCR-RFLP方法鉴别北柴胡药材掺伪藏柴胡的方法。方法分析并筛选出藏柴胡特有的限制性内切酶AseⅠ,用Primer Premier 5.0设计特异性引物,对引物PCR扩增条件和酶切试验进行优化,并对该方法的准确性进行了考察。结果PCR扩增的目的片段为331 bp,且建立的PCR反应方法对不同的酶均具有适应性。限制性内切酶AseⅠ将藏柴胡切成79 bp和252 bp两个片段,而北柴胡及其他柴胡均不能被酶切,且掺伪检出限为1%。结论PCR-RFLP方法实现了准确鉴别北柴胡中的混伪品藏柴胡。

南北柴胡差异、成分与功效探讨

柴胡因产地和性状不同分为“北柴胡”与“南柴胡”。因外观尤其相似,非常容易被混淆,南、北柴胡中挥发油、皂苷、多糖、黄酮等成分的种类和含量的差异,都有可能成为影响柴胡药理及功效的关键因素。本研究利用文献挖掘结合因效而异准则,掌握毒副剂量,使不良作用在最小前提下,为临床用药提供有效依据,并确保柴胡质量评价的客观性和可操作性。