北野豌豆及其近缘种基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

摘要:采用改进的CTAB法,成功提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,成功建立了RAPD稳定的反应体系:总体积10μL,包括10 ng的DNA,1×的反应缓冲液,1.5 mmol·L-1MgCl2,0.2μmol·L-1引物,0.2 mmol·L-1dNTP混合物和1.0 U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为:先在92℃下变性3 min,然后在92℃下变性1 min、40℃下复性1 min、72℃下延伸2 min反应45个循环,最后72℃延伸10 min。

北野豌豆及其近缘种ISSR反应条件的优化

采用改进的CTAB法,成功地提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,对ISSR的反应条件进行了优化,最终确定ISSR的反应体系为:总体积10μl,包括10ng的DNA,1倍的反应缓冲液,1.5mmol.L-1MgCl2,2×10-4mmol.L-1(引物6和引物8)或2×10-3mmol.L-1(引物5,10和12)引物,0.2mmol.L-1dNTP混合物和1.0U的Taq DNA聚合酶.ISSR扩增程序为:先在94℃下变性3min,然后在92℃下变性30s,50℃(引物5,6,10,12)或55.2℃(引物8)下复性30s,72℃下延伸1min,反应30个循环,最后72℃延伸5min.并基于此反应条件,最终筛选出5条ISSR引物用于进一步的研究.

野豌豆属蒙药药用植物的rDNA-ITS序列分析

目的 比较研究野豌豆属中入蒙药的8种药用植物山野豌豆Vicia drnoena、北野豌豆V.ramuliflora、广布野豌豆V.cracca、多茎野豌豆V.multicaulis、黑龙江野豌豆V.amurensis、东方野豌豆V.japonica、大叶野豌豆V.pseudorobus和歪头菜V.unijuga的rDNA-ITS序列差异性及其规律,寻找8种植物药之间的分子鉴别方法 。方法 从野豌豆属蒙药材中提取总DNA,用PCR法扩增ITS,运用Clustal X、MEGA等软件比较和分析ITS的序列特征。结果 野豌豆属入蒙药的8种药用植物ITS序列长度为598-611bp,具变异位点40个,其中信息位点33个,特异性鉴别位点29个。序列已提交至NCBI数据库,登录号为JQ309787-JQ309794,KJ417905-KJ417931。其中5种野豌豆的ITS序列为国际首次获得,分别为黑龙江野豌豆（JQ309789）、东方野豌豆（JQ309792）、多茎野豌豆（JQ309791）、大叶野豌豆（JQ309788）和北野豌豆（JQ309793）。结论 ITS序列对野豌豆属入蒙药的8种药用植物具有较好的分辨性,为野豌豆属蒙药药用植物分子鉴别提供了参考。