北青龙衣抗肿瘤化学成分研究

目的:研究北青龙衣抗肿瘤的化学成分。方法:使用95%乙醇回流提取,大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20等分离;1H-NMR,13C-NMR,MS鉴定结构。结果:分离得到7个化合物,分别鉴定为熊果酸乙酯(1),20(R)-24β-羟基-20,25-环氧-达玛烷-3-酮(2),1,7-二羟基-3,6-二甲氧基蒽醌(3),反式邻羟基肉桂酸(4),4-羟甲基-2-甲氧基苯酚(5),没食子酸甲酯(6),4-甲氧基-5-羟基-1-四氢萘酮(7)。结论:化合物1~4为首次从该属中分离得到。

北青龙衣化学成分研究

目的:研究北青龙衣的化学成分。方法:采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、制备HPLC及重结晶为分离纯化手段;ESI-MS,~1H-NMR,^(13)C-NMR和DEPT为结构鉴定手段研究北青龙衣的化学成分。结果:分离得到7个化合物,分别鉴定为12β,20β-二羟基-达玛烷-24-烯-3-酮(1),20β-羟基-达玛烷-23(24)-烯-3-酮(2),20(S),24(S)-二羟基达玛烷-25-烯-3-酮(3),顺式对羟基肉桂酸(4),3-羟基环丁基羧酸(5),(4S)-4,8-二羟基-1-四氢萘酮(6),对羟基苯乙酮(7)。结论:化合物1,4~7为首次从该属中分离得到。

北青龙衣乙酸乙酯部位化学成分研究

目的:研究北青龙衣乙酸乙酯部位的化学成分。方法:采用正相、反相色谱、Sephadex LH-20凝胶柱和高效液相制备色谱等多种手段对乙酸乙酯部位进行成分分离和纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构。结果:从北青龙衣中共分离得到7个化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(1),反式-3-羟基-4-甲氧基肉桂酸(2),4-(1-羟基-1-甲基乙基)苯甲酸(3),3,5-二羟基-1,4-萘醌(4),4(R)-5-羟基-4-乙氧基-β-四氢萘酮(5),4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮(6),异阿魏酸甲酯(7)。结论:其中化合物1~3,化合物7为首次从胡桃属中分离获得。

北青龙衣中萘醌类有效成分动态积累规律研究

目的:明确北青龙衣中萘醌类有效成分动态积累过程,确定北青龙衣药材的适宜采收期。方法:以不同采样方式获得多产区不同采集时期北青龙衣样本,采用紫外分光光度法测定总萘醌含量,采用高效液相色谱法测定胡桃醌、胡桃酮含量,结合药材产量,研究萘醌类成分的动态积累规律,确定适宜采收时期。结果:3个产区各采集时期北青龙衣样本的总萘醌、胡桃醌、胡桃酮含量整体呈逐渐下降趋势,8月中旬后急剧下降。结合药材产量,7月中旬至8月初有效成分总量积累达到最大值。结论:综合总萘醌、胡桃醌、胡桃酮含量以及药材产量确定北青龙衣适宜采收时间为7月中旬至8月初。

北青龙衣多糖的提取、分离纯化及分析

对北青龙衣中总多糖进行分离纯化,获得分子量均一多糖,并对其进行结构分析。北青龙衣药材经沸水提取,浓缩醇沉,木瓜蛋白酶脱蛋白,D101大孔树脂柱纯化脱色,再经DEAE Cellulose 52离子交换柱层析、Sephacryl S-300凝胶柱层析得到纯化多糖组分。采用高效凝胶渗透色谱-蒸发光检测器对其进行纯度鉴定、分子量测定。气-质联用、红外光谱分析其单糖组成与结构。北青龙衣多糖经分离得到两个均一组分PJP-1a、PJP-3a,其分子量分别为:1.34×103Da、1.70×107Da。气-质联用分析PJP-3a是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,单糖摩尔比为:4.56∶7.53∶1∶2.48∶41.4∶17.94。红外光谱提示PJP-1a、PJP-3a可能均具有吡喃环结构,糖苷键的连接方式均为β型,PJP-1a存在乙酰氨基结构。

Box-Behnken响应面法优化北青龙衣总多糖提取工艺

目的:采用响应面法对北青龙衣总多糖的提取工艺进行优化。方法:以北青龙衣总多糖提取量为指标,在单因素试验基础上,选择提取温度、料液比、提取时间为考察因素,根据Box-Behnken实验设计原理,利用响应面法优化北青龙衣中总多糖的提取工艺。结果:最佳提取工艺为提取温度88℃,料液比1∶22,提取时间72min,多糖提取量实测值7.83 mg·g-1,与预测值8.02 mg·g-1较为接近。结论:采用响应面法优选北青龙衣总多糖提取工艺稳定可行,为北青龙衣资源开发利用及总多糖提取工艺产业化提供理论依据。

一测多评法同时测定北青龙衣药材中胡桃醌和胡桃酮的含量

目的:建立同时测定北青龙衣药材中胡桃醌、胡桃酮含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,以胡桃醌为内参物,计算其对胡桃酮的相对校正因子(RCF),通过RCF计算北青龙衣药材中胡桃酮的含量;以外标法测定的胡桃酮含量作实测值,采用夹角余弦法比较一测多评法的计算值与实测值的差异。结果:胡桃醌、胡桃酮检测质量浓度线性范围分别为7.6~76.0μg/mL(r=0.999 0)、8.2~82.0μg/mL(r=0.999 4);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为95.37%~97.94%(RSD=1.04%,n=6)、99.13%~100.10%(RSD=0.33%,n=6)。计算值与实测值之间的夹角余弦值为0.999 84,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于北青龙衣药材中胡桃醌、胡桃酮含量的同时测定。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣不同干燥方法对萘醌类成分影响研究

目的:研究不同干燥方法对北青龙衣萘醌类成分含量的影响,为建立适合北青龙衣产地加工方法提供参考。方法:采用晒干,阴干,40、50、60℃烘干,冷冻干燥,微波干燥5种方法对北青龙衣样品进行干燥处理。采用UPLC-Triple TOF-MS/MS技术对样品进行测定,数据用Marker View软件进行主成分分析,化合物通过Peak View2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定分子式,再通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定结构式。结果:不同干燥方法萘醌类有效成分含量发生了明显的变化,鉴定或推断了北青龙衣中24个萘醌类化合物结构,确定了40℃烘干为最适宜干燥方法。结论:该方法快速、准确,可为北青龙衣不同干燥方法的化学成分鉴定与分析提供一种新的策略,对北青龙衣加工生产具有一定的指导意义。

北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中的成分分布研究

目的利用超高液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术研究北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中化学成分分布。方法灌胃给予北青龙衣醇提物后,采集肝组织,用含0.1%甲酸水溶液(A)-含0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源,以正、负2种离子模式采集数据,通过Peakview 2.0/masterview 1.0和Metabolitepilot数据分析软件,通过对比同位素丰度比、保留时间,精确母离子质量数和二级碎片鉴定北青龙衣在大鼠肝组织中成分。结果从大鼠肝组织中鉴定了39种化学成分,包括27个原型成分和12个代谢产物,其中包含10个二芳基庚烷类,10个黄酮类,14个萘醌类,5个三萜类成分。结论初步确定了北青龙衣醇提物在大鼠肝组织中的原型成分及代谢产物,为北青龙衣体内成分及组织分布研究提供方法学参考,并为其进一步深入研究奠定基础。

多指标评价不同干燥方法对北青龙衣质量的影响

目的:研究不同干燥方法对北青龙衣质量的影响,从而优选北青龙衣的最优干燥方式。方法:对北青龙衣经5种干燥方法(阴干、晒干、烘干、微波干燥、冷冻干燥)及烘干方法下不同干燥温度(40、50、60℃)处理后,以干燥时间、复水率、含水量、醇浸出物含量、有效成分胡桃醌和胡桃酮的含量及其甲醇提取物对人胃腺癌BGC823细胞、人肺癌A549细胞的体外抗肿瘤活性为指标,对比分析不同干燥方法对北青龙衣质量的影响。结果:5种干燥方法中,微波干燥时间最短,阴干干燥时间最长;冷冻干燥样品含水量最大,微波干燥样品含水量最小;醇浸出物含量相差不大;胡桃醌含量以冷冻干燥样品最高、微波干燥样品最低;胡桃酮含量以40℃烘干样品最高、冷冻干燥样品最低;体外抗肿瘤试验表明按对2种细胞的生长抑制率将干燥方法排序为冷冻干燥>40℃烘干>阴干,且抑制率随着干燥温度的升高而降低。结论:不同干燥方法对北青龙衣质量有明显的影响。从成本、有效成分含量、抗肿瘤活性及实用性综合分析,认为北青龙衣宜采用在40℃烘干的方法进行干燥。

北青龙衣褐变机制的研究

北青龙衣在由鲜品到干品的贮藏期间会出现失水、颜色变深等褐变现象。研究该褐变过程发生的机制,为控制褐变、提高药材的稳定性提供试验依据。采用北青龙衣鲜果果皮,4℃低温贮藏,研究其褐变度(browning degree,BD)、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性变化、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总多酚(total polyphenols,TP)、还原糖含量及维生素C(Vitamin C,VC)含量变化。试验数据显示果皮颜色变深、TP含量下降、PPO活性降低、PAL活性上升、SOD和POD活性先上升后下降、MDA含量升高、还原糖和VC含量下降。BD与PPO、SOD、POD活性和TP含量呈显著负相关,与PAL活性呈显著正相关,与VC和还原糖无显著相关性。北青龙衣贮藏过程中发生了酶促褐变和非酶褐变,且以酶促褐变为主,PPO在酶促褐变中可能起主要作用。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的北青龙衣肺组织成分分布研究

目的:基于液质联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)分析北青龙衣的化学成分在肺组织中的分布。方法:采用ACQUITY BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以水(A)-乙腈(B)分别加入0.1%甲酸进行梯度洗脱。质谱采用ESI离子源,正、负离子模式下采集数据,通过数据处理软件,依据精确质量数、同位素丰度比、谱图对比和裂解规律分析,进行化学成分推断和鉴定。结果:共鉴定出19个原型成分和7个代谢产物,包括14个萘醌类、6个二芳基庚烷类、3个黄酮类及3个三萜类成分。结论:该方法检测快速、准确,为北青龙衣抗肺癌活性成分、作用机制及代谢过程研究奠定基础。

UPLC-Q-TOF/MS法分析北青龙衣总萘醌类成分的组成

目的:以超高液相色谱-质谱联用(UPLC-Q-TOF/MS)技术分析北青龙衣中总萘醌类成分的组成。方法:采用Sephadex LH-20纯化北青龙衣总萘醌类部位,通过UPLC-Q-TOF/MS技术对北青龙衣总萘醌类成分进行快速分析,利用Peakview 2.0/Masterview1.0 software数据处理软件,根据质谱所提供的保留时间、精确相对分子量及二级质谱裂解碎片鉴定及推测其化学成分。结果:通过液质数据分析及参考相关文献鉴定出北青龙衣总萘醌部位中萘醌类成分44种。结论:该方法能够快速、准确的分析北青龙衣总萘醌部位的成分,为今后更深入地研究北青龙衣总萘醌有效部位的化学成分奠定结构基础。

基于液质连用技术的北青龙衣心肌组织成分分布研究

目的:研究北青龙衣化学成分在大鼠心肌组织中的分布情况。方法:将北青龙衣乙醇提取物灌胃给予大鼠后采集心肌组织,利用UPLC-Q-TOF/MS技术采集数据,应用相关数据分析软件,通过对精确质量数以及同位素相对丰度推测化合物分子式,结合对照品的二级图谱、裂解规律与数据库、文献进行比对,对心肌组织中分布的成分进行确认。结果:共鉴定出包括22个原型成分和9个代谢产物在内的31种北青龙衣化学成分,其中萘醌18个,二芳基庚烷7个,三萜3个,黄酮2个,酚酸1个。结论:心肌组织分布的主要北青龙衣化合物为萘醌类,为进一步的毒性研究奠定物质基础,也为其体内成分及组织分布研究提供方法学借鉴。

北青龙衣中萘醌类衍生物的细胞毒活性研究

目的研究北青龙衣中萘醌类衍生物的细胞毒活性。方法利用MTT法测定从北青龙衣中分离得到的12个萘醌类衍生物对SMMC7721人肝癌细胞和MCF-7人乳腺癌细胞的细胞毒活性。结果 12个萘醌类衍生物中,4-羟基萘-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9),1,4,8-三羟基萘-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)和1,4,8-三羟基萘-1-O-β-D-[6'-O-(3'',4'',5''-三羟基苯甲酰)]吡喃葡萄糖苷(11)对SMMC7721人肝癌细胞显示不同程度的抑制作用,仅11对MCF-7人乳腺癌细胞显示较强的细胞毒作用。结论北青龙衣中萘醌类衍生物在其抗肿瘤活性中可能起重要作用。

基于UPLC-Q-TOF/MS分析北青龙衣成分

目的采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术,对不同产地78批次北青龙衣进行分析,确定其主要的活性组分。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,通过Markerview1.2.1软件提取78个样本中1 000个离子,按离子在所有样本中均出现,且相对强度基本大于e4的原则选取共有离子。通过Peakview 2.0/masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定共有离子分子式,通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定共有离子结构式。结果鉴定或推断了北青龙衣中31种主要化学成分,其中包括11种萘醌类、3种二芳基庚烷、3种黄酮、8种三萜类及6个其他类化合物。结论该方法检测快速、准确,为北青龙衣的化学成分鉴定提供一种新的策略,主要化学成分的确定为北青龙衣质量评价指标选择及药效物质深入研究奠定基础。

北青龙衣细胞毒活性部位中的萘酚苷

目的研究北青龙衣细胞毒活性部位中的化学成分。方法利用MTT法测定北青龙衣醇提取物经大孔树脂柱色谱得到的4个组分对胃癌细胞BGC803的细胞毒作用,对其中活性最强的30%乙醇洗脱部位经硅胶柱色谱和反相硅胶柱色谱进行化学成分的分离。结果得到4个萘酚苷类化合物并经核磁共振谱确定了它们的结构,分别为1,4,5-三羟基萘-1,4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),1,4,5-三羟基萘-1,5-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),1,4,8-三羟基萘-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),1,4,8-三羟基萘-1-O-β-D-[6'-O-(3'',4'',5''-三羟基苯甲酰)]吡喃葡萄糖苷(4)。结论北青龙衣细胞毒活性部位中含有萘酚苷类化合物,可能在其抗肿瘤活性中起重要作用。

北青龙衣抗肿瘤谱效关系研究初探

目的:对北青龙衣抗肿瘤谱效关系进行初步研究。方法:采用乙醇冷浸提取,大孔树脂进行初步分离,所得到的各组分用MTT法进行体外细胞毒试验,测定各组分对人胃癌细胞BGC803的抑制活性,并用薄层色谱进行初步谱效关系研究。结果:大孔树脂经30%乙醇洗脱的组分显示较强的细胞毒活性,薄层色谱显示该组分为极性大和极性小的成分的复杂组合。结论:大孔树脂经30%乙醇洗脱的组分在北青龙衣抗肿瘤活性中起重要作用。

北青龙衣质量控制的研究

目的:建立北青龙衣质量控制的方法。方法:采用薄层色谱进行鉴别,展开条件为三氯甲烷-甲醇(8:2),采用高效液相色谱进行含量测定,以乙腈-水-磷酸(10:90:0.2)为流动相,指标成分为(4S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮-4-O-β-D-吡喃葡糖苷。结果:方法灵敏、可靠、准确、重复性好。结论:该方法可作为北青龙衣质量控制的方法。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的北青龙衣有效成分动态变化分析

采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析不同采集时期北青龙衣有效成分动态变化规律。用Marker View软件对6个采集时期18批样品测定数据进行主成分分析,差异性化合物通过Peakview 2.0/Masterview1.0软件,依据精确质量数和同位素峰度比确定分子式,再通过对照品及数据库的二级谱图比对、裂解规律分析,结合已有文献报道,确定结构式。结果表明不同采集期萘醌类有效成分含量发生了明显的变化,鉴定或推断了北青龙衣中38个萘醌类化合物结构,随着采收时间的变化大部分萘醌类成分含量逐渐下降。该方法快速、准确,为北青龙衣的化学成分鉴定与分析提供一种新的策略,为揭示不同生长期北青龙衣有效成分动态变化规律及确定其药材合理采收期提供基础资料。