应用区带离心法纯化地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的应用区带离心法纯化原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗。方法浓缩的原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗,经36％和60％不连续蔗糖密度、23 000r/min离心4h后,收取纯化的乙脑抗原组分,制成纯化乙脑疫苗。结果浓缩疫苗经一步区带离心纯化后,抗原效价提高3倍以上,蛋白去除99.5%以上。经稀释制成的半成品疫苗与未经浓缩的原疫苗相比,抗原效价提高4倍以上,蛋白去除99％以上。结论区带离心法可用于纯化地鼠肾细胞乙脑疫苗。

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。

速度区带离心分离提纯蚕豆叶绿体

一、原理速度区带离心是在离心过程中借助于密度梯度介质,使不同大小和形状的样品颗粒因沉降速度不同而从达到分离目的的一种离心技术。速度区带离心由于在离心过程中应用了密度梯度介质,故又称作密度梯度离心。1951年,Brakke首次应用了速度区带离心技术。六十年代以来,速度区带离心得到较大的发展,目前已成为一种广泛应用的离心技术。速度区带离心有以下特点:①由于在离心过程中引进了密度梯度介质,增加了整个离心体系的稳定性,有助于克服对流影响。②分离效率高。通常应用的差速离心法虽操作简便,但对沉降系数(S)接近的样品颗粒不易分离。

区带离心在肾综合征出血热（HFRS）纯化疫苗生产中的应用

根据区带离心原理和肾综合征出血热病毒的特点，采有蔗糖作为梯度介质，经区带离心，纯化出效抗原成分囊膜糖蛋白和核壳蛋白，除去非特异性杂蛋白，以此为基础建立了肾综合征出血热疫苗纯化工艺。

Sephadex G-200柱层析与蔗糖梯度速率区带离心对Sindbis病毒纯化的比较

在病毒的浓缩提纯中,广泛采用各种物理和化学相结合的方法。把“分子筛”柱层析作为一重要步骤,国内外均有报告。由于方法简便,适于大量制备,我们在早先工作的基础上,对PEG6000沉淀结合SephadexG-200柱层析浓缩提纯病毒进行了研究。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的MARC-145细胞中外泌体的分离与鉴定

旨在寻找有效方法,能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中分离细胞产生的外泌体,并为探索外泌体在PRRSV感染细胞时的作用奠定基础。使用试剂盒提取MARC-145细胞产生的外泌体,利用电镜负染色法和Western blot技术对MARC-145细胞产生的外泌体进行鉴定;采用碘克沙醇速率区带离心分离MARC-145细胞产生的外泌体,并用Western blot技术检测外分泌体的分布区间。用PRRSV感染MARC-145细胞后,使用试剂盒对MARC-145细胞产生的外泌体进行初步分离后,采用免疫磁珠捕获技术进行进一步纯化,并使用Western blot进行验证。Western blot结果显示MARC-145细胞产生的外泌体存在特异性标记蛋白CD63、Tsg101和Alix,不存在外泌体非标记蛋白EEA1、GRP94和Cytochrome C;电镜负染色结果显示MARC-145细胞产生的外泌体尺寸大小处于30~100nm,符合外泌体特征。利用Western blot对碘克沙醇速率区带离心中收集到的样品进行分析,结果显示MARC-145细胞产生的外泌体分布于7.2%~18%碘克沙醇密度区间。Western blot结果显示免疫磁珠捕获法获得的对照组不存在外泌体标记蛋白Tsg-101。以上结果表明MARC-145细胞能够产生外泌体,并且通过免疫磁珠捕获法能够从PRRSV感染的MARC-145细胞中将其分离。

抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究——猪瘟病毒抗原的提纯

本文介绍了用 PEG 和蔗糖密度梯度区带离心纯化猪瘟病毒的方法和步骤。先用 PEG 沉淀浓缩猪瘟兔化弱毒感染的牛睾丸细胞培养液,再经蔗糖密度梯度区带离心,出现4条区带,其中病毒感染力最强的位于Ⅱ带,其次为Ⅰ带,蛋白质含量多为0.14～0.19毫克/毫升和0.21～0.12毫克/毫升。电镜检查可见带有膜囊的病毒粒子,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ带均各出现一条明显蓝色条带外,在它前后侧还隐约可见一条浅带。用这些方法浓缩提纯兔化猪瘟弱毒效果较好,且较简便易行。

原代大鼠胰岛细胞分离纯化及单细胞培养初探

目的:探讨获得高质量、数量多的原代大鼠胰岛细胞的有效可靠的方法。方法:以Ⅴ型胶原酶顺行灌注大鼠胆总管消化胰腺,以Histopaque 1077等密度区带离心法分离胰岛和胰腺腺泡组织。以双硫腙染色及免疫组化法分别鉴定提取物,胰岛素释放试验鉴定胰岛的活性。结果:经Histopaque 1077等密度区带离心法分离纯化,每只大鼠平均获取(251±26)枚胰岛。双硫腙染色后完整胰岛呈猩红色细胞团。胰岛单细胞培养及胰岛素释放试验起始2.8 mmol/L低糖培养胰岛素分泌量为(23.53±5.946)pmol/L,16.7mmol/L高糖刺激后胰岛素分泌量为(32.61±4.085)pmol/L,最后恢复2.8mmol/L低糖培养胰岛素分泌量为(27.81±3.616)pmol/L,3者之间比较差异均有统计学意义(P<0.05),提示胰岛细胞活性良好。结论:用Histopaque 1077等密度区带离心法分离纯化原代大鼠胰岛细胞兼具有数量多、活性好、纯度高的优点,可继续用于研究。

血清白蛋白和Dane颗粒的作用

HBeAg强阳性患者之血清,经密度区带离心和8ephadex G-200分离后,可以得到具有极高DNA一多聚酶活力的Dane颗粒.对提纯的Dane颗粒的研究表明,这种颗粒结合了一定量的白蛋白,结合的白蛋白在PAGE上和人血清白蛋白单体无明显差别,并非以多聚形式出现.对Dane颗粒和白蛋白结合状态的研究表明,这种结合是非共价的,PAGE可以使其分离.体外条件下,随着时间的推移,这种结合逐渐离解,具有可逆性,提示Dane颗粒和白蛋白的结合可能是以受体和配体的形式出现.目前普遍认为病毒可能通过白蛋白的桥联作用而入侵肝细胞,本文对血清白蛋白可能起的作用进行了讨论.