建立L-02肝细胞脂肪变模型方法比较及脂肪乳诱导脂变条件的优化

目的:比较二甲基亚砜(DMSO)溶解油酸、乙醇溶解油酸、无水乙醇、50%胎牛血清和医用脂肪乳对L-02肝细胞的影响,优化L-02肝细胞脂肪变性模型的良好条件与方法。方法:用含10%胎牛血清PRMI-1640培养液培养细胞,细胞均匀分布进入对数生长期后随机分为正常对照组、DMSO组、DMSO+油酸组、乙醇+油酸组、乙醇组、50%胎牛血清组和医用脂肪乳组,分别用DMSO+油酸、乙醇+油酸、0.4%乙醇、50%胎牛血清(FBS)和20%医用脂肪乳培养48 h,用MTT法检测细胞活力,油红O染色观察细胞数、细胞内脂滴,用试剂盒检测细胞内甘油三酯及蛋白质。用医用脂肪乳培养L-02肝细胞,研究医用脂肪乳诱导L-02肝细胞脂肪变性的浓度和时间。结果:DMSO组和乙醇组细胞生长呈下降趋势,DMSO+油酸组和乙醇+油酸组细胞生长均呈现先升高后降低趋势。甘油三酯和蛋白质测定表明,医用脂肪乳能很好地诱导L-02肝细胞脂肪变性,医用脂肪乳含量10%,造模培养49 h,细胞脂变效果最好。结论:医用脂肪乳诱导L-02肝细胞,脂变率高、脂变细胞形态好,适合L-02肝细胞脂变模型的建立。

成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响

目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达。结果:MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高(P<0.01),CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5mg.L-1FGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低(P<0.01),CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论:FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。

不同极性酸浆提取液对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞的影响

探讨不同极性酸浆提取液对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞的影响及其可能的作用机制。用不同极性有机溶剂对酸浆进行萃取,采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度、酸浆提取液作用浓度,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和谷氨酰转肽酶(GGT)水平。与正常肝细胞株HL7702相比,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG、ALT、AST和GGT水平显著升高(p<0.01)。与模型组相比,不同酸浆提取物治疗12 h组细胞浆内橘红色的脂滴数量明显减少,TG、ALT、AST和GGT水平显著降低(p<0.01)。在体外成功建立非酒精性脂肪肝的细胞模型,不同极性酸浆提取液处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积和ALT、AST和GGT的泄漏量。