基于网络药理学与细胞实验探索藏药十一味草果丸治疗结直肠癌机制

目的通过生物信息学挖掘结直肠癌相关基因,基于网络药理学对十一味草果丸治疗结直肠癌的机制进行探索研究,利用HCT116结直肠癌细胞进行实验对网络药理学预测结果进行验证。方法结直肠癌疾病相关基因,通过GEO数据库、孟德尔人类遗传基因库、GeneCard数据库获取;基于知网、TCMSP数据库对藏药十一味草果丸主要成分进行检索,探索其相关靶点蛋白通过Uniport数据库与DrugeBank数据库获取蛋白质对应基因;使用GeneCards数据库对结直肠癌疾病相关的所有基因与筛选得到的十一味草果丸作用的靶基因进行比对选取相关性高的基因用以探索二者间的相关关系;使用DAVID数据库对得到的相关基因进行富集分析,得到相关的生物过程与信号通路;使用分子对接技术对活性成分进行研究。最后利用HCT116结直肠癌细胞对网络药理学预测的十一味草果丸作用于结直肠癌的效果进行检验。结果GEO数据库筛选后获得差异基因与GeneCard对比后与疾病相关度大于30分的相关基因288个。数据库检索得到药物有效化学成分169个,对化学成分进行预测靶点蛋白进行检索,去重后得到508个靶基因。508个药物基因与288个疾病相关基因取交集后64个共同基因。KEGG富集结果主要有癌症通路、PI3K-Akt信号通路、P53信号通路等。通过使用水和乙酸乙酯提取十一味草果丸中的药物成分,利用水和二甲基亚砜(DMSO)进行溶解并控制其浓度后,对结直肠癌HCT116细胞进行干预,其中5氟尿嘧啶(5-FU)作阳性对照而提取药物设置不同浓度剂量组干预结果显示,乙酸乙酯提取的药物作用效果优于水提取药物和5-FU。结论藏药十一味草果丸可以通过多个靶点和多条通路对结直肠癌细胞起到抑制和促进凋亡作用。

高效液相色谱法测定十一味草果丸中5种成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定十一味草果丸中麻黄碱、伪麻黄碱、没食子酸、木香烃内酯、去氢木香内酯的含量。方法采用SB-C_(18) Analytical色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,用甲醇(A)-乙腈(B)-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0±0.1)(C)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1);麻黄碱、伪麻黄碱的检测波长为210 nm;没食子酸、木香烃内酯、去氢木香内酯的检测波长为254 nm。结果麻黄碱、伪麻黄碱、没食子酸、木香烃内酯、去氢木香内酯的线性范围分别为4.12～41.2μg·mL^(-1)(r=0.9996)、3.58～35.8μg·mL^(-1)(r=0.9994)、7.11～71.1μg·mL^(-1)(r=0.9993)、8.04～80.4μg·m L^(-1)(r=0.9999)、7.58～75.8μg·mL^(-1)(r=1.000);平均回收率分别为90.6%(RSD=1.2%)、90.5%(RSD=0.72%)、98.0%(RSD=1.1%)、95.7%(RSD=0.96%)、94.0%(RSD=1.0%);精密度、重复性及稳定性试验的结果可靠(RSD <2%)。结论该方法准确、简便,可用于该制剂中麻黄、诃子、木香3味药材含量的测定。