二氟沙星光敏损伤溶菌酶的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

本文采用稳态光照的方法研究了二氟沙星药物对溶菌酶生物大分子的光敏损伤。研究发现,在315~375 nm波长的光照射下,二氟沙星药物能够光敏损伤溶菌酶类大分子物质。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析光照产物发现,生物大分子的光敏损伤途径和损伤产物与二氟沙星药物的浓度、光照时间、光照气氛等条件密切相关。其他条件相同时,二氟沙星浓度越高,光照时间越长,光照对溶菌酶的损伤越严重;三种不同气氛(氮气、空气、氧气)条件下,氧气气氛对溶菌酶的损伤最严重。通过对不同气氛条件下损伤机理的研究发现,在氮气气氛条件下为Ⅰ型光敏损伤机制,在有氧气氛条件下是I型和Ⅱ型反应协同作用的结果,并以Ⅱ型反应为主。

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定饮料中红豆含量

目的建立十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)法定量分析植物蛋白饮料中红豆成分含量的方法。方法从8个主要蛋白条带中选取一个蛋白条带作为定量标记蛋白,配制红豆标准品进行SDS-PAGE实验,用Image J软件测量特征蛋白条带的灰度面积值,得到特征蛋白条带灰度面积与红豆含量关系的标准曲线。最后以市售红豆饮料为实际样品,检验该方法对于复杂样品的实用性。结果红豆含量在3~8 g/100 mL范围内,特征蛋白条带灰度面积与红豆含量呈良好的线性关系(r~2=0.9944)。向市售样品中添加2 g/100 mL标品,得到加标回收率为99.2%,相对标准偏差为1.68%(n=3)。结论该方法为红豆饮料中红豆含量的检测提供了一个可行的手段。日后,该方法可推广应用于其他以蛋白为标志物的饮料成分的定量测定。

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定壳斗科植物种质资源

通过对5个壳斗科植物盐溶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析,为壳斗科植物的种质资源鉴定提供科学依据。以栗属(板栗、锥栗、茅栗)和栎属(麻栎)5个壳斗科植物为试验材料,分别提取种子内盐溶蛋白,并进行PAGE电泳检测。结果表明,茅栗(Castanea seguinii Dode)的盐溶蛋白种类最丰富,有19条,而麻栎(Quercus acutissima Carr)最少,有11条。对每条谱带进行相似性比较,发现茅栗与板栗(Castanea mollissima Bl)的相似程度最高,其次是锥栗[Castanea henr-yi(Skan)Rehd.et.Wils]和麻栎,再次是茅栗与锥栗,而板栗与麻栎的差异性最大。从而推断出它们之间进化关系:麻栎→锥栗→茅栗→板栗。表明利用SDS-PAGE技术可用于鉴定壳斗科植物之间的进化关系和亲缘关系。

聚丙烯酰胺凝胶电泳及其在食品检测中的应用

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷数量来进行分离。文中就其原理及在食品检测方面的应用做一简要概述。

两种染色方法对聚丙烯酰胺凝胶电泳回收蛋白的影响

以牛血清白蛋白(BSA)为材料进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别采用考马斯亮蓝(CBB)G-250染色和咪唑-Zn反染,用电洗脱仪回收。它们的灵敏度分别为500ng和5ng;蛋白质回收率分别为37.9％和74.4％。

薏苡仁蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的:比较酸沉前后蛋白种类的差异,获取薏苡仁蛋白分子量的信息。方法:采用碱溶酸沉法制备薏苡仁蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,标准曲线法计算分子量信息。结果:得到了6种薏苡仁水溶性蛋白条带,确定了其分子量分别是91.598,77.169,39.839,28.977,23.822,16.100 k Da,对比了薏苡仁蛋白酸沉前后的变化,即酸沉后缺失了23.822 k Da和16.1 k Da两个条带。结论:该方法得到的谱图清晰,重现性好,对薏苡仁蛋白分离与分析的研究有着重要的指导意义。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。

利用种子蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定玉米种子纯度的研究

利用种子贮存蛋白SDS-PAGE技术,对2份玉米母本种子的蛋白质进行电泳分析,结果表明,它们的母本种子蛋白质电泳图谱差异明显,特征谱带稳定。种子蛋白电泳鉴定与田间小区种植鉴定结果之间纯度达97%以上,该技术可作为玉米杂交种和自交系种子纯度鉴定的一种手段。

鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的SDS-PAGE凝胶电泳比较研究

目的:探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法:运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC-T6增殖的影响。结果:炮制后的醋鳖甲所含成分增多,一级谱带相对分子质量降低,导致小分子肽类物质产生;生鳖甲和醋鳖甲均具有抗肝纤维化的作用,但醋鳖甲的药效优于生鳖甲。结论:鳖甲炮制前后活性部位明显差异,为临床选择用药及进一步活性成分研究提供依据。

银屑病患者指甲和鳞屑的蛋白质SDS-电泳图谱和转谷氨酰胺酶活性探讨

目的:探讨银屑病患者指甲和鳞屑蛋白质十二烷基硫酸钠(SDS)-电泳图谱和转谷氨酰胺(transglutaminase1,TGase1)酶的活性。方法:各取5例银屑病患者的指甲和鳞屑与5例健康人的指甲和鳞屑,分别提取蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。应用辣根过氧化物酶(HRP)-单丹酰尸胺结合物对鳞屑铺片标本检测TGase 1酶活性。结果:健康人指甲和鳞屑的SDS-PAGE图谱皆呈现4条主带:63 ku、54 ku、48 ku及38 ku,银屑病患者指甲及鳞屑的SDS-PAGE图谱也呈现此4条主带,但多数主带扫描数值的水平较高,P<0.01。健康人的鳞屑铺片标本TGase 1酶活性呈现为棕黄色细颗粒定位于角质深层角质形成细胞(KC)的周缘;相比之下银屑病患者的TGase 1酶活性缺乏。结论:指甲及鳞屑的SDS-PAGE主带相似,前者图谱更清晰可能与其蛋白较稳定有关。银屑病患者比健康人的SDS-PAGE图谱主带表达水平升高,提示其KC可能呈增生状态,表达产物较多;患者TGase 1酶活性的缺如提示其表皮屏障功能有缺陷,可能与其参与代偿性增生有关。

尿蛋白普通琼脂糖凝胶电泳与SDS-PAGE的比较

目的:评价尿蛋白普通琼脂糖凝胶电泳(AGE)的临床价值。方法:采用普通AGE检测305例患者尿蛋白,其中112例做十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),两者进行比较,并结合患者的临床和病理诊断分析。结果:普通AGE图谱可分为五种类型,对应于SDS-PAGE的四种蛋白尿类型,分别为肾小管性蛋白尿、肾小球性蛋白尿、混合性蛋白尿和溢出性蛋白尿。结论:普通AGE能很好地判断肾小管性蛋白尿,较好地判断大部分肾小球性蛋白尿和混合性蛋白尿,很好地判断溢出性蛋白尿。

羚羊角及伪品的凝胶电泳鉴别

目的 对羚羊角及伪品山羊角、绵羊角、黄羊角、藏羚羊角进行凝胶电泳鉴别研究。方法 应用连续解离系统的十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (简称 SDS- PAGE)对羚羊角及伪品进行了电泳图谱的比较。结果 电泳图谱 ,各样品间具有不同的蛋白质成分 ,并可依此差异进行鉴别。结论 本方法具有重现性好、操作简便且经济的特点 。

不同产地山羊角凝胶电泳指纹图谱及其混伪品鉴别研究

目的:研究建立不同产地山羊角药材的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的指纹图谱以及与混伪品的鉴别方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对山羊角及其伪品的蛋白成分进行分析比较。结果:不同产地山羊角电泳图谱相似,有5个共有带峰,可作为山羊角的专属条带。结论:该方法简单易行、灵敏度高,可为山羊角的产地鉴别及与伪品的鉴别提供参考。

几种动物类中药材SDS-PAGE的电泳鉴别

目的 :建立几种动物类中药的电泳鉴别方法。方法 :利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术 ,对 3种蜂王浆、牛血清蛋白、金钱白花蛇[2 ] 、乌梢蛇、鹿蹄筋、炮制前后的蝎子[3 ] 进行鉴别分析。结果 :结果表明 3种蜂王浆间 ,炮制前后的蝎子间的电泳图谱存在显著差异 ;金钱白花蛇、乌梢蛇、鹿蹄筋也有各自的谱带。结论 :电泳鉴别可为动物类中药的鉴别提供一项可靠的 。

七种水蛭组织细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

采用垂直平板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对我国7种常见水蛭的组织细胞可溶性蛋白成分进行电泳图谱特性分析。结果表明,7种水蛭组织细胞中可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱中多数条带相同,但也存在差异。其中日本医蛭(Hirudo nipponia Whitman)蛋白条带最多,达28个,并且吸血蛭类的蛋白条数要明显大于非吸血蛭类,而3种不同地理分布的菲牛蛭(Hirudi-naria manillensis Lesson)间表达蛋白图谱无明显差异。该研究为在分子水平分析我国水蛭不同种类、同种不同地理分布及不同食性间的差异积累了新的生物学数据,对其分类和药材鉴别提供了参考依据。

二硫苏糖醇和β-巯基乙醇在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应

目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品和未还原蛋白样品间隔上样进行电泳,通过观察未还原样品的电泳条带来判断是否受到邻近泳道还原剂的扩散影响。结果:还原剂DTT或2-ME可扩散到邻近泳道,使未还原蛋白样品发生部分还原,扩散效应的强弱与还原剂的含量成正相关。结论:SDS-PAGE电泳过程中DTT和2-ME均存在扩散效应,在同一块凝胶上同时分离还原蛋白和未还原蛋白时,至少应该在2个泳道间设置一空白泳道,以规避扩散效应。

中药壁虎及其伪品蜥蜴的凝胶电泳鉴别

目的 目前中药壁虎以假充真现象较多 ,为了探求更便捷 ,准确的壁虎与伪品蜥蜴的鉴定方法 ,以探讨其古方中分部位用药的相关实验依据。方法 利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 (SDS -PAGE) ,观察壁虎及其伪品蜥蜴的电泳迁移率 ,并且对比其躯干 ,头 ,足及尾部等部位蛋白电泳区带的差异。结果 经实验鉴别 ,壁虎与蜥蜴的电泳图谱差异显著 ,各有其特有谱带 ;而且同一样品的不同部位之间谱带亦有区别。结论 SDS -PAGE图谱可以做为壁虎及其伪品蜥蜴的有效鉴别依据 。

枣树叶片蛋白质提取及SDS-PAGE单向电泳条件优化

[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P_(388)的抑制作用

目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 +G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 。

不同产地半夏及其混淆品的SDS-PAGE电泳鉴别

目的建立不同产地半夏与其混淆品的蛋白质电泳鉴别方法。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对不同产地半夏与其混淆品(英山滴水珠、本院药园掌叶半夏、蛇山半夏、钟祥半夏、钟祥掌叶半夏及戟叶犁头尖)进行鉴别分析。结果不同产地的半夏具有相似的电泳图谱,但半夏与其混淆品图谱之间具有显著性差异。结论SDS-PAGE电泳鉴别可以对不同产地的半夏进行初步鉴别,并可鉴别半夏及其混淆品的特征,方法简便、可靠。