聚丙烯酰胺凝胶电泳及其在食品检测中的应用

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷数量来进行分离。文中就其原理及在食品检测方面的应用做一简要概述。

利用种子蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定玉米种子纯度的研究

利用种子贮存蛋白SDS-PAGE技术,对2份玉米母本种子的蛋白质进行电泳分析,结果表明,它们的母本种子蛋白质电泳图谱差异明显,特征谱带稳定。种子蛋白电泳鉴定与田间小区种植鉴定结果之间纯度达97%以上,该技术可作为玉米杂交种和自交系种子纯度鉴定的一种手段。

七种水蛭组织细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

采用垂直平板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对我国7种常见水蛭的组织细胞可溶性蛋白成分进行电泳图谱特性分析。结果表明,7种水蛭组织细胞中可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱中多数条带相同,但也存在差异。其中日本医蛭(Hirudo nipponia Whitman)蛋白条带最多,达28个,并且吸血蛭类的蛋白条数要明显大于非吸血蛭类,而3种不同地理分布的菲牛蛭(Hirudi-naria manillensis Lesson)间表达蛋白图谱无明显差异。该研究为在分子水平分析我国水蛭不同种类、同种不同地理分布及不同食性间的差异积累了新的生物学数据,对其分类和药材鉴别提供了参考依据。

用蛋白电泳和高效凝胶排阻色谱法分析还原脲变性蛋白溶菌酶稀释复性过程的集聚体

本文利用蛋白电泳和高效凝胶排阻层析法分析了还原脲变性蛋白溶菌酶稀释复性过程中的集聚体。当用复性液稀释复性还原脲变性蛋白溶菌酶时,会迅速产生可观量的沉淀。沉淀和上清液的不连续十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效凝胶排阻层析分析结果表明,还原脲变性蛋白溶菌酶在稀释复性过程中除了能够复性成天然态蛋白溶菌酶分子外,还会形成可溶的蛋白溶菌酶分子二聚体和三聚体,二聚体和三聚体主要是靠分子间二硫键的错配连接而成的;可溶的蛋白溶菌酶分子二聚体之间通过非共价键相互作用而形成集聚体沉淀,而可溶的三聚体溶菌酶分子则仍处于复性液上清液中。

非连续型垂直板SDS-PAGE电泳技术分析蛋白质的方法

电泳技术已广泛应用于蛋白质、核n酸等生物分子的分析检测,电泳技术的类型很多,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术是分析蛋白质的常用方法之一。文章主要对非连续型垂直板SDS-PAGE电泳技术在分析蛋白质的研究中所涉及的原理、影响电泳效果的主要因素进行综述。

应用SDS-PAGE技术分析重组蛋白的聚集性

应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术分析重组蛋白质的表达水平以及纯化的结果时,发现其结果可以判定重组蛋白质的聚集状况,对聚集产生的原因及意义进行了讨论。

氧化强度对肌原纤维蛋白结构及凝胶性能的影响

采用模拟氧化体系(10μmol/L FeCl3,100μmol/L抗坏血酸,0、0.5、1、3、5、10 mmol/L H2O2),研究不同氧化程度对猪肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)结构及凝胶性质的影响.结果表明:随H2O2浓度升高,蛋白羰基含量上升,总巯基含量、自由氨基含量及内源荧光强度下降,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明氧化诱导二硫键的形成引起蛋白质交联聚集加剧,进而导致蛋白表面疏水性和溶解度降低;当H2O2浓度小于1.0 mmol/L时,MP热诱导凝胶性能无明显变化,当H2O2浓度大于1.0 mmol/L时,热诱导凝胶蒸煮损失显著增强(P<0.05),凝胶强度明显降低(P<0.05),但凝胶白度无明显变化.总体来说,H2O2浓度越高蛋白氧化程度越严重,凝胶强度越低.

一种改良的薄层等电聚焦电泳新方法

目的介绍一种高效新颖的IFE方法。方法采用簿层等电聚焦电泳。结果该方法简便实用,并可节省昂贵试剂的用量。结论此方法可用于药物蛋白质成分的研究。

从草鱼鱼鳞萃取得到的胃酶溶解的胶原及其基本性质

用胃酶从草鱼鱼鳞中萃取胃酶溶解的胶原。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、傅里叶转变红外光谱（FT—IR）、氨基酸分析仪、圆二色性光谱（CD光谱）和差示扫描量热法（DSC）来表征胶原萃取物的基本性质。

高温焙炒芝麻蛋白结构功能特性研究

以200℃高温焙炒芝麻去除油脂后制备的芝麻蛋白为原料,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)、埃尔曼试剂(Ellman's reagent)比色、傅里叶变换红外光谱、8-苯胺基-1-萘磺酸铵(Ammonium 8-anilino-1-naphthalenesulfonate,ANS)荧光探针等方法研究了高温焙炒对芝麻蛋白结构功能特性的影响。结果表明,高温焙炒虽未改变芝麻蛋白基本亚基结构,但随着焙炒时间的延长,α-螺旋结构逐渐减少,无规则卷曲结构和β-折叠等无序结构明显增多,游离巯基含量显著增大,高分子区域条带渐趋显著,各亚基条带呈现扩散趋势;芝麻蛋白表面疏水性升高、溶解性显著降低;乳化性先降低后增加,而起泡性却呈现出先升高后降低的相反趋势。

SDS－PAGE研究丝素蛋白的组成

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究丝素蛋白的组成于同隐，蔡再生，黄伟达（复旦大学高分子科学研究所，生物化学系，上海，２００４３３）关键词丝素蛋白，亚基组成，聚丙烯酰胺凝胶，电泳由于丝素蛋白结构的复杂性及其易变性、水解等原因，致使研究结果往往互不相同。Ｔａｓｈｉｒｏ...

腰果蛋白的提取工艺条件优化

以腰果为原料,分析腰果仁的主要成分,比较研究不同提取方法对蛋白质提取率的影响;以料液比、提取液pH值、提取温度、提取时间为单因素,运用单因素和正交试验设计,优化腰果蛋白提取的最佳工艺条件。结果表明:腰果仁中粗脂肪含量最高,达44.13%,其他组分含量为:碳水化合物22.91%、蛋白质19.41%、水分3.07%、灰分2.45%;研究发现碱提法提取效果最佳,并确定其最佳工艺条件为料液比1∶40(g/mL)、提取液pH 9、提取温度35℃、提取时间1.5 h,此条件下获得的腰果蛋白提取率可达79.0%,腰果蛋白质的纯度为86.62%。腰果蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:腰果蛋白主要含有22、26.2 kD的亚基,其次是14.1、16 kD,少量亚基为67.5、88 kD。

刀额新对虾变应原的分离、鉴定与纯化

目的通过对我国常见的刀额新对虾变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化,以提供虾特异性变应原用于食物变态反应疾病的诊断和治疗。方法通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离刀额新对虾的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对刀额新对虾变应原进行初步纯化,通过疏水层析和凝胶过滤层析进一步对变应原纯化。结果刀额新对虾有17条蛋白带,其中主要条带有10条,68和36 kD为可与虾过敏性病人血清IgE结合的特异性变应原;通过各种层析方法纯化出刀额新对虾68 kD变应原,纯度为96%。结论对刀额新对虾变应原进行分离、鉴定和纯化,得到高纯度的68 kD刀额新对虾变应原,为临床虾变态反应疾病的诊断和治疗奠定基础。

玉米胚芽蛋白的分离及物化特性研究

采用碱溶酸沉法提取玉米胚芽分离蛋白,利用氨基酸分析和电泳分析胚芽蛋白的氨基酸组成和有效亚基组成。凝胶层析分离玉米胚芽蛋白组分,并对各组分进行热变性温度及圆二色谱分析。氨基酸分析结果表明,玉米胚芽蛋白中谷氨酸和赖氨酸含量较高,其它氨基酸含量较均衡。还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)图主要有九条谱带,其分子量依次为87.988、76.320、69.650、53.649、48.546、38.164、34.337、32.294和24.483 kDa。凝胶层析分离获得两个蛋白组分。差示扫描量热仪(DSC)分析表明分离所得两个组分的干粉变性温度分别为97.37℃和98.95℃,圆二色谱(CD)分析表明两个蛋白组分的二级结构主要为β-折叠和无规卷曲。

水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立

以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MAI-DI—TOF／TOF）分析，鉴定了31个水稻质膜相关蛋白。结果表明IEF／SDSPAGE双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白。进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤，以降低质膜组分的复杂程度，通过SDS-PAGE单向电泳分离和液相色谱串联质谱（LC-MS／MS）分析，鉴定了8个质膜蛋白。经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低，SDS-PAGE中的蛋白条带只包含1～2种蛋白，且主要为疏水性较强的穿膜蛋白，说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用，是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径。

生物解离大豆过程中形成的乳状液结构

以不同酶解时间(1、2、3 h)、不同酶添加量(1%、2%)生物解离大豆过程中形成的乳状液为研究对象,探究乳状液中乳滴聚集机制、结构特征及分子间相互作用。通过乳状液中蛋白水解度、显微镜观察、Zeta电位、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、荧光色谱等指标的测定发现:经过蛋白酶酶解,乳状液中蛋白水解度在7%左右;生物解离使乳状液蛋白被酶解成分子质量较小的肽段,乳状液油脂与蛋白之间的亲和力降低,乳滴出现聚集,Zeta电位绝对值减小;SDSPAGE条带上出现了由二硫键引起的大分子质量的蛋白聚集体;另外,乳状液荧光光谱中,乳状液相对于相同酶解条件下大豆分离蛋白荧光强度明显减弱,可能是由磷脂的存在、蛋白质-油脂之间的相互作用及蛋白质聚集体导致。

骨髓基质细胞源性神经活性物质的提取与纯化

目的 分离纯化骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)胞浆中神经营养蛋白,并验证其神经活性作用。 方法 自小鼠股骨分离培养MSCs,超声粉碎后离心并收集其上清液,超滤浓缩后收集大于10 ku浓缩蛋白液。Sephadex G- 10 0层析、高效液相色谱分析(high performance liquid chromatography,HPL C)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳(sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electropheresis,SDS- PAGE)等技术分离神经活性蛋白,培养脊髓运动神经元,通过MTT法及观察细胞形态来验证其神经活性作用。 结果 MSCs胞浆上清液经SephadexG- 10 0层析后发现, 峰对神经细胞生长有促进作用。对 峰行HPL C分析发现,A峰对神经细胞生长有明显促进作用。对A峰行SDS- PAGE分析,提示为单一蛋白带,分子量为13ku。 结论 MSCs胞浆中含有神经营养蛋白,其分子量为13ku。

DNA显示中三种染色方法的比较

目的 比较聚丙烯酰胺凝胶 -银染 (简称银染 )、SYBRGreenⅠ及溴化已锭 (EB)染色方法在定量聚合酶链反应 (Q -PCR)检测DNA的敏感性。方法 分别用聚丙烯酰胺凝胶 -银染、琼脂糖电泳 -SYBRGreenⅠ染色及EB染色方法检测相同条件下PCR产物 ,进行光密度定量分析及比较。结果 2 4个循环PCR检测DNA产物 :SYBRGreenⅠ染色与银染均见清晰带并可定量分析 ,而EB染色在 2 8个循环次数尚可清晰带型 ;SYBRGreenⅠ及EB染色历时 30min ,而银染则历时 4h～ 5h。结论 在检测DNA时 ,SYBRGreenⅠ染色敏感性同银染 ,但比EB强 ;而且比银染更简单、省时、经济。

综合化学实验:DNA 8-分支纳米结构的制备及表征

借助DNA分子良好的生物相容性和可编程性,科学家合成了各种各样的DNA纳米自组装结构,这些结构在分子检测、生物成像和药物运输等领域已经展现出极大的应用潜力,然而这一先进前沿研究领域在本科生教学实验中并未涉及。为了拓展学生的科研视野,激发学生科研兴趣,将DNA纳米技术的科研成果与PCR、紫外-可见分光光度计、聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶成像分析相融合,开展了DNA纳米自组装结构的教学实验。通过本实验使学生了解了DNA分支纳米结构的制备、表征和检测,不仅丰富了本科生实验教学项目的内容,培养了学生创新思维能力,提升了学生的科研水平,而且扩宽了学生的眼界、激发了学生进行前沿科学研究的热情,对培养复合型人才具有非常重要的意义。

人胃癌细胞免疫抑制因子的分离纯化

本实验采用Sephacryl S-100凝胶滤过层析和Rotofor cell制备型等电聚焦电泳等方法,对二株人胃癌细胞(SGC-7901和MKN45)培养液上清进行了逐级分离纯化。结果发现:两株胃癌细胞均可分泌免疫抑制因子,其中源于SGC-7901细胞的抑制因子得到了较为满意的纯化,测得其分子量为41kD,等电点为5.0;而MKN45细胞所产生的仅得到了部分纯化,其分子量在36～43kD之间,等电点为4.5～5.5。两株细胞产生的抑制因子均对强酸、强碱、加热(56℃)及胰蛋白酶敏感。本实验证实人胃癌细胞产生的免疫抑制因子其化学性质为可溶性蛋白质物质。