十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定饮料中红豆含量

目的建立十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)法定量分析植物蛋白饮料中红豆成分含量的方法。方法从8个主要蛋白条带中选取一个蛋白条带作为定量标记蛋白,配制红豆标准品进行SDS-PAGE实验,用Image J软件测量特征蛋白条带的灰度面积值,得到特征蛋白条带灰度面积与红豆含量关系的标准曲线。最后以市售红豆饮料为实际样品,检验该方法对于复杂样品的实用性。结果红豆含量在3~8 g/100 mL范围内,特征蛋白条带灰度面积与红豆含量呈良好的线性关系(r~2=0.9944)。向市售样品中添加2 g/100 mL标品,得到加标回收率为99.2%,相对标准偏差为1.68%(n=3)。结论该方法为红豆饮料中红豆含量的检测提供了一个可行的手段。日后,该方法可推广应用于其他以蛋白为标志物的饮料成分的定量测定。

癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析非变性蛋白质分子量的适用性鉴定

目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相关性。结果:5种标准分子量蛋白质的四级结构完整,log Mr与x线性相关性较低;但其中的α-牛乳白蛋白、鸡蛋清白蛋白、牛血清白蛋白的log Mr与x线性相关性较好,相关系数平方值(R2)>0.94。结论:SDecS-PAGE可用于测定有限种类的非变性蛋白质的分子量。

二氟沙星光敏损伤溶菌酶的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

本文采用稳态光照的方法研究了二氟沙星药物对溶菌酶生物大分子的光敏损伤。研究发现,在315~375 nm波长的光照射下,二氟沙星药物能够光敏损伤溶菌酶类大分子物质。通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析光照产物发现,生物大分子的光敏损伤途径和损伤产物与二氟沙星药物的浓度、光照时间、光照气氛等条件密切相关。其他条件相同时,二氟沙星浓度越高,光照时间越长,光照对溶菌酶的损伤越严重;三种不同气氛(氮气、空气、氧气)条件下,氧气气氛对溶菌酶的损伤最严重。通过对不同气氛条件下损伤机理的研究发现,在氮气气氛条件下为Ⅰ型光敏损伤机制,在有氧气氛条件下是I型和Ⅱ型反应协同作用的结果,并以Ⅱ型反应为主。

连续酸-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳制备人和兔中性粒细胞防御素各组分

目的 :建立和应用连续酸 -尿素 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (CAU- PAGE)纯化人和兔中性粒细胞防御素组分(HNP- 1～ 3和 RNP- 1～ 5 )。 方法 :从人外周血或兔人工无菌性腹水中分离中性粒细胞 ,用 5 %冰醋酸直接提取 ,经 CAU- PA GE洗脱 ,获取纯化的 HNP- 1～ 3或 RNP- 1～ 5组分。以聚丙烯酰胺凝胶过滤作为参比方法。 结果 :1次洗脱电泳可从 5× 10 8个细胞中获得纯化的 HNP组分约 1.5 0 mg或 RNP组分 2 .5 0 mg,并保持天然的生物活性。 结论 :CAU- PAGE是一种较简便、快速。

应用分子内杂交—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测已知α-地中海贫血点突变

目的:建立一种简便且特异性高,可用于检测已知α-地中海贫血点突变的DNA分析方法。方法:用巢式PCR方法扩增α2-珠蛋白基因,然后用分子内杂交—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测两种已知的α-地中海贫血点突变,即,密码子125(CTG→CCG)和终止密码子(TAA→CAA)。结果:这两种已知的α-地中海贫血点突变均被分子内杂交—聚丙烯酰胺凝胶电泳检出。结论:分子内杂交—聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种较为简便、特异性高的DNA分析方法,可用于已知α-地中海贫血点突变的检测。

聚丙烯酰胺凝胶电泳-化学发光成像技术检测血清中的蛋白与药物的结合

血清蛋白分析是临床检验的一项重要的任务，血清中各种蛋白的指认和分析对于疾病的治疗和药物的研究具有重要的意义。药物在人血清中的分布和药物与血清蛋白的结合程度，使得药物的最大作用强度、作用幅度以及作用时间不同，最终导致了药效的不同。SAL（Salbutamo）是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂，临床用于治疗哮喘等疾病，对心脏有刺激作用，久用会导致严重的心率失常，甚至猝死。

不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究

目的建立不同产地桔梗药材的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)指纹图谱鉴别方法。方法蛋白质(Pro)、过氧化物酶同工酶(POD)、酯酶同工酶(EST)PAGE指纹图谱分析。结果不同产地桔梗的Pro-PAGE图谱差异极小;POD-PAGE与EST-PAGE图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异,分别具有各自的鉴别谱带。结论POD-PAGE与EST-PAGE指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法。

聚丙烯酰胺凝胶电泳及其在食品检测中的应用

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷数量来进行分离。文中就其原理及在食品检测方面的应用做一简要概述。

两种染色方法对聚丙烯酰胺凝胶电泳回收蛋白的影响

以牛血清白蛋白(BSA)为材料进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别采用考马斯亮蓝(CBB)G-250染色和咪唑-Zn反染,用电洗脱仪回收。它们的灵敏度分别为500ng和5ng;蛋白质回收率分别为37.9％和74.4％。

薏苡仁蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的:比较酸沉前后蛋白种类的差异,获取薏苡仁蛋白分子量的信息。方法:采用碱溶酸沉法制备薏苡仁蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白,标准曲线法计算分子量信息。结果:得到了6种薏苡仁水溶性蛋白条带,确定了其分子量分别是91.598,77.169,39.839,28.977,23.822,16.100 k Da,对比了薏苡仁蛋白酸沉前后的变化,即酸沉后缺失了23.822 k Da和16.1 k Da两个条带。结论:该方法得到的谱图清晰,重现性好,对薏苡仁蛋白分离与分析的研究有着重要的指导意义。

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定壳斗科植物种质资源

通过对5个壳斗科植物盐溶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析,为壳斗科植物的种质资源鉴定提供科学依据。以栗属(板栗、锥栗、茅栗)和栎属(麻栎)5个壳斗科植物为试验材料,分别提取种子内盐溶蛋白,并进行PAGE电泳检测。结果表明,茅栗(Castanea seguinii Dode)的盐溶蛋白种类最丰富,有19条,而麻栎(Quercus acutissima Carr)最少,有11条。对每条谱带进行相似性比较,发现茅栗与板栗(Castanea mollissima Bl)的相似程度最高,其次是锥栗[Castanea henr-yi(Skan)Rehd.et.Wils]和麻栎,再次是茅栗与锥栗,而板栗与麻栎的差异性最大。从而推断出它们之间进化关系:麻栎→锥栗→茅栗→板栗。表明利用SDS-PAGE技术可用于鉴定壳斗科植物之间的进化关系和亲缘关系。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。

利用种子蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定玉米种子纯度的研究

利用种子贮存蛋白SDS-PAGE技术,对2份玉米母本种子的蛋白质进行电泳分析,结果表明,它们的母本种子蛋白质电泳图谱差异明显,特征谱带稳定。种子蛋白电泳鉴定与田间小区种植鉴定结果之间纯度达97%以上,该技术可作为玉米杂交种和自交系种子纯度鉴定的一种手段。

聚丙烯酰胺凝胶电泳中超微量蛋白的考马斯亮兰——银染色检测法

本文介绍一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中超微量蛋白质检测的银染色新方法,它使蛋白质的最小检出量达到1ng。

双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析促癌剂TPA诱导NIH3T3细胞表达变化的蛋白质

[目的]寻找并鉴定在TPA处理后小鼠成纤维细胞NIH3T3中表达发生变化的蛋白质,为阐明TPA在诱导细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。[方法]用TPA刺激NIH3T3细胞,分别提取实验组和对照组的NIH3T3细胞的总蛋白质,通过聚丙烯酰胺凝胶双向电泳,硝酸银染色后用软件分析寻找差异表达的蛋白质,并对差异蛋白质进行质谱鉴定。[结果]软件分析显示TPA处理后的NIH3T3细胞中有明显的差异表达蛋白质,质谱鉴定表明TPA处理后,表达上调的蛋白质有线粒体基质蛋白P1前体、微管蛋白beta-5链;TPA处理后明显表达下调的蛋白质有galectin-1、N-myc下游调节基因1蛋白。[结论]TPA刺激NIH3T3细胞后可以下调生长抑制基因的表达,同时上调与细胞增生相关基因的表达。因此,促癌剂TPA可能对NIH3T3细胞有促进增生的作用。

双向电泳技术分离燕窝水溶性蛋白

为研究燕窝功效成分以及建立燕窝真伪检测和质量分级体系,采用双向电泳技术分离了燕窝水溶性蛋白。以印度尼西亚苏门答腊岛毛燕为材料,从提取溶剂、提取条件、水化上样缓冲液和分离胶体积分数4个方面对燕窝蛋白双向电泳技术进行优化。结果表明:以超纯水作为提取溶剂,60℃静置提取6h,以8mol/L尿素、4g/100mL CHAPS、65mmol/L DTT、0.2%(体积分数)Bio-Lyte 4/6 Ampholyte、0.1%Bio-Lyte 5/8 Ampholyte、0.001g/100mL溴酚蓝组成的溶液作为水化上样缓冲液,采用8%的分离胶体积分数可获得高分离度、高重复性的燕窝蛋白双向电泳图谱。同时,采用4个不同的燕窝样品对所建立的方法进行验证,证实了方法的可靠性。

花生叶片蛋白质双向电泳的方法与优化

以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。

小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法

以普通小麦叶片为实验材料 ,在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化 ,在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。

鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的SDS-PAGE凝胶电泳比较研究

目的:探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法:运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC-T6增殖的影响。结果:炮制后的醋鳖甲所含成分增多,一级谱带相对分子质量降低,导致小分子肽类物质产生;生鳖甲和醋鳖甲均具有抗肝纤维化的作用,但醋鳖甲的药效优于生鳖甲。结论:鳖甲炮制前后活性部位明显差异,为临床选择用药及进一步活性成分研究提供依据。