十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定饮料中红豆含量

目的建立十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)法定量分析植物蛋白饮料中红豆成分含量的方法。方法从8个主要蛋白条带中选取一个蛋白条带作为定量标记蛋白,配制红豆标准品进行SDS-PAGE实验,用Image J软件测量特征蛋白条带的灰度面积值,得到特征蛋白条带灰度面积与红豆含量关系的标准曲线。最后以市售红豆饮料为实际样品,检验该方法对于复杂样品的实用性。结果红豆含量在3~8 g/100 mL范围内,特征蛋白条带灰度面积与红豆含量呈良好的线性关系(r~2=0.9944)。向市售样品中添加2 g/100 mL标品,得到加标回收率为99.2%,相对标准偏差为1.68%(n=3)。结论该方法为红豆饮料中红豆含量的检测提供了一个可行的手段。日后,该方法可推广应用于其他以蛋白为标志物的饮料成分的定量测定。

聚丙烯酰胺凝胶电泳及其在食品检测中的应用

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷数量来进行分离。文中就其原理及在食品检测方面的应用做一简要概述。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。

银屑病患者指甲和鳞屑的蛋白质SDS-电泳图谱和转谷氨酰胺酶活性探讨

目的:探讨银屑病患者指甲和鳞屑蛋白质十二烷基硫酸钠(SDS)-电泳图谱和转谷氨酰胺(transglutaminase1,TGase1)酶的活性。方法:各取5例银屑病患者的指甲和鳞屑与5例健康人的指甲和鳞屑,分别提取蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。应用辣根过氧化物酶(HRP)-单丹酰尸胺结合物对鳞屑铺片标本检测TGase 1酶活性。结果:健康人指甲和鳞屑的SDS-PAGE图谱皆呈现4条主带:63 ku、54 ku、48 ku及38 ku,银屑病患者指甲及鳞屑的SDS-PAGE图谱也呈现此4条主带,但多数主带扫描数值的水平较高,P<0.01。健康人的鳞屑铺片标本TGase 1酶活性呈现为棕黄色细颗粒定位于角质深层角质形成细胞(KC)的周缘;相比之下银屑病患者的TGase 1酶活性缺乏。结论:指甲及鳞屑的SDS-PAGE主带相似,前者图谱更清晰可能与其蛋白较稳定有关。银屑病患者比健康人的SDS-PAGE图谱主带表达水平升高,提示其KC可能呈增生状态,表达产物较多;患者TGase 1酶活性的缺如提示其表皮屏障功能有缺陷,可能与其参与代偿性增生有关。

乳及乳制品中乳铁蛋白含量的快速SDS-PAGE荧光检测方法

该研究采用新型的Chromeo P503(P503)染料替代考马斯亮蓝染色方法,以克服脱色染色步骤繁琐、耗时长(≥5 h)的不足,建立一种乳及乳制品中乳铁蛋白的快速简便十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)检测方法。P503染料标记蛋白产生强烈的红色荧光发射,在30 min内一步操作即可完成,并且进行脱铁处理后消除乳铁蛋白铁饱和度对于荧光信号的干扰,保证定量的准确性。根据凝胶成像图中78 ku蛋白条带是否存在及其灰度值的大小,实现乳铁蛋白的定性与定量检测。在优化的实验条件下,线性范围为15~75μg/mL,检出限为5.11μg/mL,加标回收率在75.79%~108.09%之间,表明该方法具有较高的灵敏度和准确性。SDS-PAGE和P503结合无需进行肝素亲和柱前处理,便可直接应用于乳及乳制品中乳铁蛋白快速简便的准确定量检测,P503染料标记还可以用于其它乳蛋白的SDS-PAGE快速低成本定量检测,从而为乳品质量控制和营养评价及加工工艺研究提供有力工具。

利用种子蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定玉米种子纯度的研究

利用种子贮存蛋白SDS-PAGE技术,对2份玉米母本种子的蛋白质进行电泳分析,结果表明,它们的母本种子蛋白质电泳图谱差异明显,特征谱带稳定。种子蛋白电泳鉴定与田间小区种植鉴定结果之间纯度达97%以上,该技术可作为玉米杂交种和自交系种子纯度鉴定的一种手段。

羚羊角及伪品的凝胶电泳鉴别

目的 对羚羊角及伪品山羊角、绵羊角、黄羊角、藏羚羊角进行凝胶电泳鉴别研究。方法 应用连续解离系统的十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (简称 SDS- PAGE)对羚羊角及伪品进行了电泳图谱的比较。结果 电泳图谱 ,各样品间具有不同的蛋白质成分 ,并可依此差异进行鉴别。结论 本方法具有重现性好、操作简便且经济的特点 。

几种动物类中药材SDS-PAGE的电泳鉴别

目的 :建立几种动物类中药的电泳鉴别方法。方法 :利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术 ,对 3种蜂王浆、牛血清蛋白、金钱白花蛇[2 ] 、乌梢蛇、鹿蹄筋、炮制前后的蝎子[3 ] 进行鉴别分析。结果 :结果表明 3种蜂王浆间 ,炮制前后的蝎子间的电泳图谱存在显著差异 ;金钱白花蛇、乌梢蛇、鹿蹄筋也有各自的谱带。结论 :电泳鉴别可为动物类中药的鉴别提供一项可靠的 。

七种水蛭组织细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳分析

采用垂直平板十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对我国7种常见水蛭的组织细胞可溶性蛋白成分进行电泳图谱特性分析。结果表明,7种水蛭组织细胞中可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱中多数条带相同,但也存在差异。其中日本医蛭(Hirudo nipponia Whitman)蛋白条带最多,达28个,并且吸血蛭类的蛋白条数要明显大于非吸血蛭类,而3种不同地理分布的菲牛蛭(Hirudi-naria manillensis Lesson)间表达蛋白图谱无明显差异。该研究为在分子水平分析我国水蛭不同种类、同种不同地理分布及不同食性间的差异积累了新的生物学数据,对其分类和药材鉴别提供了参考依据。

二硫苏糖醇和β-巯基乙醇在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应

目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品和未还原蛋白样品间隔上样进行电泳,通过观察未还原样品的电泳条带来判断是否受到邻近泳道还原剂的扩散影响。结果:还原剂DTT或2-ME可扩散到邻近泳道,使未还原蛋白样品发生部分还原,扩散效应的强弱与还原剂的含量成正相关。结论:SDS-PAGE电泳过程中DTT和2-ME均存在扩散效应,在同一块凝胶上同时分离还原蛋白和未还原蛋白时,至少应该在2个泳道间设置一空白泳道,以规避扩散效应。

不同产地半夏及其混淆品的SDS-PAGE电泳鉴别

目的建立不同产地半夏与其混淆品的蛋白质电泳鉴别方法。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对不同产地半夏与其混淆品(英山滴水珠、本院药园掌叶半夏、蛇山半夏、钟祥半夏、钟祥掌叶半夏及戟叶犁头尖)进行鉴别分析。结果不同产地的半夏具有相似的电泳图谱,但半夏与其混淆品图谱之间具有显著性差异。结论SDS-PAGE电泳鉴别可以对不同产地的半夏进行初步鉴别,并可鉴别半夏及其混淆品的特征,方法简便、可靠。

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P_(388)的抑制作用

目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 +G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 。

不同产地乌梅的SDS-PAGE的电泳鉴别

目的对炮制程度和产地不同的乌梅中蛋白成分进行电泳鉴别。方法利用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术对未经清洗的四川长兴乌梅,百顺乌梅标准炭,大邑净乌梅,大邑乌梅标准炭,净洗2次的大邑乌梅生品进行鉴别分析。结果不同产地乌梅的电泳图谱存在差异,各品种图谱基本相似。结论电泳鉴别可为中药不同产地药材蛋白质成分鉴别提供一项可靠的简便的检测方法。

大豆根瘤内生菌全细胞可溶性蛋白SDS-PAGE电泳图谱分析

以大豆根瘤内生细菌为试验材料,分别采用单次点样、重复点样、不同上样量对其进行全细胞可溶性蛋白质十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)图谱分析,根据标准蛋白质各条带相对迁移率估算待测蛋白质亚基的分子量范围,结合16S rDNA测序结果区分大豆根瘤内生菌间亲缘关系,便于后续研究。结果表明:单次点样,不同菌株间蛋白质条带有差异,说明彼此间亲缘关系不同。经16S rDNA序列分析,菌株44最相似属种为Bacillus horikoshii、菌株52最相似属种为Sinorhizobium fredii、菌株70最相似属种为Ochrobactrum intermed;重复点样,菌株7与53的蛋白质图谱相同,经16S rDNA测序分析,两者最相似属种均为Bacillus subtilis,且最相似菌株均为HRA69,说明两者属于同一种内生菌。菌株123与125蛋白质图谱相近,经16S rDNA测序比对,两者最相似属种均为Bacillus cereus;电泳结果显示,对同一菌株不同上样量不影响蛋白质图谱,16S rDNA测序结果表明同一菌株最相似属种始终不变,即不影响亲缘关系。

大豆特征蛋白的SDS-PAGE研究

大豆蛋白作为乳品中的主要掺假蛋白,对其进行鉴别并建立相应的检测和分析方法,对于健全乳制品安全监管体制,确保消费者的合法权益具有重要的意义。该文利用SDS-PAGE方法对12种不同来源大豆均质浆液中的可溶性蛋白进行分析,并与两种商品大豆蛋白进行比较。经SDS-PAGE电泳分析,这14种大豆蛋白主要包含相对分子质量（简称分子量）为1.90×10^4～8.50×10^4的9组蛋白。每组蛋白的分子量差异较小,相对差值不大于3.3%,而且蛋白条带的相对含量基本相同。发现大豆中蛋白分子量为4.97×10^4、4.17×10^4、3.57×10^4以及1.98×10^4的可溶性蛋白组分,可作为SDS-PAGE鉴别牛乳中掺杂大豆蛋白的特征识别标记,其中4.96×10^4和3.57×10^4的最低检出限可达0.2 g/L。使用光密度仪测定,在大豆浆液蛋白含量0.1～10 g/L范围,定量工作曲线的线性关系较好,R=0.998 1,应用于0.60～8.0 g/L范围测量,相对误差为0.63%～13.3%。

我国秋播麦区小麦Glu-1和Glu-3位点等位变异分析

用SDS-PAGE分析了251份我国秋播麦区主栽品种和高代品系的高分子量麦谷蛋白亚基和低分子量麦谷蛋白亚基构成。结果表明,Glu-A1位点有2、1和N3种等位变异,Glu-B1位点有9种等位变异,即17+18、14+15、7+8、7+8、7+9、13+16、6+8、20和7,Glu-D1位点有4种等位变异,即5+10、2+12、3+12和4+12,Glu-A3位点有5种等位变异,即GluA3d、GluA3b、GluA3c、GluA3a和CluA3e,Glu-B3位点有8种等位变异,即GluB3d、GluB3b、GluB3b’、GluB3a、GluB3h、GluB3f、GluB3g和GluB3j。品质较差的HMW-GSN、7+9、2+12和LMW-GS GIuA3a与GluB3j(1BL/1RS)在我国秋播麦区分布较广,频率分别为39.4％、45.0％、59.8％、37.1％和44.6％;优质HMW-GS 14+15和5+10,以及优质LMW-GS GluB3d和GluB3g的频率较低,分别为1.6％、24.7％、20.7％和0.8％。劣质HMW-GS和LMW-GS的频率较高是我国小麦面筋品质差的主要原因。

大豆7S蛋白-糖体系晚期糖基化终产物形成因素

目的:在大豆蛋白糖基化改性过程中会引发非酶糖基化反应,形成有害的晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs),为提高食品安全性,模拟糖基化加工条件,构建大豆7S蛋白-糖体系模型,考察影响该体系AGEs形成的因素并进行有效调控。方法:采用荧光光谱法(λ_(ex)/λ_(em)=340 nm/465 nm)检测糖种类、还原糖质量浓度、pH值、反应温度、抑制剂种类及其浓度对AGEs形成的影响,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征有害产物的形成及抑制效果。结果:糖种类为果糖、蛋白质与葡萄糖质量浓度配比1∶4、pH 9.2、反应温度121℃条件下产生荧光性AGEs的作用效果最强,4种黄酮类化合物槲皮素、染料木素、芦丁和木犀草素对荧光性AGEs的形成均可达到较好的抑制效果,且呈现良好的剂量-效应关系。结论:糖的种类与抑制剂种类对AGEs的形成有一定影响;降低还原糖质量浓度、降低pH值和降低反应温度,添加0.1 mmol/L大豆源染料木素可有效抑制大豆加工过程中有害产物AGEs的形成。

采用高效液相色谱-质谱考察家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质的多样性

家福捕鸟蛛（Selenocosmia jiafu）是一种生活在中国广西、云南等边远山区、中等个体、产毒量较大和毒性较强的蜘蛛新种。为了对家福捕鸟蛛粗毒成分进行初步探索,采用反相高效液相色谱、基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对粗毒多肽和蛋白质的多样性进行了分析。结果表明：家福捕鸟蛛粗毒经色谱分离后得到40多个色谱峰,经质谱鉴定得到238个多肽,且多肽的相对分子质量呈现出双峰分布,其中62.5%的多肽的相对分子质量分布在3 000-4 500之间,33.2%的多肽的相对分子质量分布在1 000-3 000之间。这种相对分子质量的分布模式不同于其他已经报道的蜘蛛粗毒中多肽的分布模式。电泳分析结果表明：除了相对分子质量在10 000以下的多肽分子,粗毒在50、72和90 kD附近有3条明显的条带,粗毒电泳条带经液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定,主要是一些血蓝蛋白、钾离子通道蛋白、钙蛋白酶等。说明家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质种类丰富。

植物乳杆菌在不同盐质量浓度下生长至对数期中期全蛋白SDS-PAGE分析

以耐盐植物乳杆菌FS5-5为研究对象,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术构建了菌株在Na Cl质量浓度分别为0、3、6、9 g/100 m L的培养基中生长至对数期中期的全蛋白表达图谱。通过比较分析,选取了6个差异蛋白质条带,并采用液相色谱-质谱/质谱联用对差异蛋白质条带进行质谱分析。结果表明:1号样品条带鉴定得到6种蛋白;2号样品条带鉴定得到11种蛋白;3号样品条带鉴定得到9种蛋白;4号样品条带鉴定得到4种蛋白;5号样品条带鉴定得到15种蛋白;6号样品条带鉴定得到15种蛋白。去除相同的蛋白,共有45种蛋白得到鉴定。这些蛋白大致可以分为4类:与蛋白质合成有关的蛋白25种;与代谢相关的蛋白10种;与核苷酸合成有关的蛋白8种;未知功能蛋白2种。可能由于这些蛋白的表达发生变化,才导致菌体中蛋白质合成、能量代谢、DNA复制能够正常进行,最终使植物乳杆菌FS5-5能够更好地在盐环境下生存下去。

豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析

为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western-blot）技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明：从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础.