TPA增强As_2O_3诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的观察12-氧-十四烷酰醇-13-乙酸酯(TPA)和三氧化二砷(As2O3)联合应用对白血病细胞凋亡有无协同作用,并初步探讨其诱导凋亡的机制,为As2O3和TPA联合用于白血病的治疗提供理论依据。方法采用不同浓度的As2O3联合TPA作用于人白血病细胞系HL-60,用MTT法检测细胞增殖,用TUNEL法检测细胞凋亡,分析不同浓度的As2O3联合TPA对HL-60细胞增殖和凋亡的影响。c-jun氨基末端激酶(JNK)检测法检测JNK活性。结果TPA联合2.0×10-6mol/L的As2O3对HL-60细胞增殖抑制作用明显增强,抑制程度大于单用As2O3组(P<0.05)。2.0×10-6mol/L As2O3组诱导HL-60细胞发生凋亡的比率高于对照组,而TPA联合2.0×10-6mol/LAs2O3组引起的细胞凋亡率高于单用As2O3组(P均<0.05)。TPA和As2O3均能激活JNK,且二者有协同作用。结论TPA增强As2O3抑制HL-60细胞增殖和促进凋亡的作用,以上体外实验结果为TPA和As2O3联合用药治疗难治/复发性白血病提供了理论依据。

TPA联合伊马替尼治疗伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病急变期患者的临床疗效

目的观察12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)联合伊马替尼治疗伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病(CML)急变期患者的临床疗效。方法选择常规剂量伊马替尼耐药的CML急性期患者12例,应用TPA联合伊马替尼治疗,观察其血液学缓解率、细胞遗传学缓解率和长期生存率。结果12例患者中11例可进行临床疗效评价,其中完全血液学缓解率36.36%(4/11),部分血液学缓解率36.36%(4/11),总的血液学缓解率达72.72%(8/11);完全细胞遗传学缓解率18.18%(2/11),部分细胞遗传学缓解率45.45%(5/11),总的细胞遗传学缓解率达63.64%(7/11)。结论TPA联合伊马替尼治疗常规剂量伊马替尼耐药的CML急变期患者是可行的。

12-氧-十四烷酰佛波醇-13-癸酰酯对小鼠肠道急性放射损伤的保护作用及机制研究

目的研究12-氧-十四烷酰佛波醇-13-癸酰酯(TPD)对小鼠肠道急性放射损伤的保护作用及其机制。方法将20只6~8周雌性BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、TPD组(25、50、100μg/kg),10 Gy60Coγ射线全身照射造成小鼠急性肠道放射损伤模型,TPD组照射前经尾静脉连续给药3 d,观察小鼠照射后20 d的生存时间,并用相同方法测定照射后3.5 d隐窝数量。大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)给予1 nmol/L TPD作用12 h后经10 Gy60Coγ射线照射,应用CCK-8法检测照射后0、1、2、3、4 d细胞增殖情况。结果对照组小鼠平均存活4.2 d,最佳给药组(100μg/kg)平均存活时间为10 d;对照组和最佳给药组平均隐窝数量分别为(11.0±1.3)个、(35.1±1.9)个;连续测定4 d IEC-6增殖活性,给药组平均D值明显高于对照组。结论 TPD对小鼠肠道急性放射损伤有保护作用,其保护作用机制可能是通过促进小肠隐窝上皮细胞增殖、增加小肠隐窝数量来实现。

不同分化状态的SH-SY5Y细胞对MPP^+的敏感性

目的比较不同分化状态的SH-SY5Y细胞对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)的敏感性。方法未分化的、单纯全反式维甲酸(AT-RA)分化的和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)序贯分化(ATRA/TPA)的SH-SY5Y细胞分别用不同浓度的MPP+(0.05、0.1、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L)处理24、48和72 h;应用MTT比色法检测不同浓度MPP+处理后在24、48和72 h各组细胞的活力;应用台盼蓝除外法计数活细胞检测1.0 mmol/L MPP+处理后48 h各组细胞的死亡率。结果三组SH-SY5Y细胞对MPP+的敏感性不同,其中ATRA与TPA序贯分化细胞的敏感性最强,未分化的细胞其次,而单纯ATRA分化的细胞敏感性最弱。结论不同分化状态的SH-SY5Y细胞对MPP+敏感性不同,ATRA与TPA序贯分化的细胞可能更适合于神经毒性和实验性帕金森病(PD)的研究。

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。

TPA对原代白血病细胞的诱导分化作用

目的:探讨TPA对原代白血病细胞的生长抑制和诱导分化作用。方法:取28例白血病患者原代白血病细胞,分别应用TPA、RA和TPA联合RA进行药物干预培养,用MTT比色法测定各组细胞活力,并观察细胞形态学和组织化学变化。结果:干预培养的原代白血病细胞均出现不同程度的生长抑制。TPA组和TPA+RA组的28例白血病细胞均在12 h^48 h后出现聚集现象。23例ANLL细胞中TPA组19例出现细胞贴壁和胞质丝状突起,TPA+RA组22例出现细胞贴壁和丝状突起。TPA组和TPA+RA组的NAE活性增强。5例ALL均出现细胞聚集反应,NAE染色阴性。结论:TPA可以抑制体外原代急性白血病细胞的生长和增生,并有促使其向单核巨噬细胞分化作用,联合应用RA其抑制效果更明显。

应用两种方法诱导SH-SY5Y细胞分化的研究

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)处理和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)序贯处理(ATRA/TPA)对人类神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞增殖抑制和形态分化的影响。方法:应用10μM ATRA处理6天和10μM ATRA处理3天继以80 nMTPA处理3天这两种方法使SH-SY5Y细胞分化;用倒置光学显微镜动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化;并用MTT比色法比较两种分化方法对SH-SY5Y细胞的体外抗增殖作用。结果:ATRA处理和ATRA与TPA序贯处理对SH-SY5Y细胞都有抗增值和诱导细胞分化作用,细胞形态发生明显的变化,分化成神经元表型,前者主要表现为两端带有长突起的纺锤体样细胞形态,而后者主要是由细胞体延伸出多个突起的多边形的细胞。ATRA分化6天的细胞的存活率下降为78.7%±2.0%。当去除ATRA后,继续培养1天的细胞存活率上升为89%±0.2%,而继续培养2天的细胞存活率为86.3%±1.4%;ATRA与TPA序贯分化6天细胞存活率下降为75.9±0.4%。当去除TPA后,继续培养一天的细胞存活率为75.5±0.7%,继续培养2天的细胞存活率为74.9±1.0%。结论:维甲酸(ATRA)处理和ATRA与十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)序贯处理(ATRA/TPA)均能明显诱导SH-SY5Y细胞分化。这两种分化细胞为神经科学的研究提供了优良的体外培养模型细胞,尤其是ATRA与TPA序贯处理能获得分化完全而稳定的神经元样细胞。