佛波酯对人早幼粒白血病细胞系细胞分化和凋亡的诱导作用

目的 :探讨佛波酯 (TPA)对人早幼粒白血病细胞系 (HL - 6 0 )分化和凋亡的影响。方法 :利用TPA体外培养HL - 6 0细胞 ,依据形态学和细胞化学的变化 ,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等技术进行分析。结果 :7 2× 10 -6mol/L的TPA可使HL - 6 0细胞出现向单核 /巨噬细胞分化的形态特征 ,随培养时间延长 ,可见HL - 6 0细胞核固缩、染色体断裂、凋亡小体形成等细胞凋亡的形态学改变。TPA处理 2 4h可使酸性非特异酯酶 (α -NAE)的活性和四氮唑蓝 (NBT)还原能力显著增强 ,DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的“梯子”状带纹。TPA处理 0、2 4、4 8h凋亡细胞百分数分别为 (4 31± 1 2 3) %、(15 10± 1 31) %和 (2 3 2 0± 3 36 ) % ,在整个实验过程中细胞周期时相、Bcl-2蛋白含量无明显变化。结论 :TPA可诱导HL - 6 0细胞向单核 /巨噬样细胞分化与凋亡 ,且此凋亡过程可能与细胞周期时相、Bcl- 2蛋白无关。

佛波酯诱导THP-1细胞分化条件的优化及自噬模型的建立

目的 探讨佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导THP-1细胞（人类单核/巨噬细胞）分化的最优条件，建立相关自噬模型，为基于细胞自噬模型的研究奠定实验基础。 方法 采用PMA诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞；用表达融合蛋白pcDNA3.1-YFP-LC3质粒转染THP-1细胞，YFP为黄绿色荧光蛋白，以示踪自噬体的形成。采用倒置显微镜观察不同浓度（0、10、20、50、100、200 ng/ml）、不同时间（0、24、48、60 h）PMA分化细胞形态学变化；采用荧光显微镜示踪不同条件下LC3点聚集的增强；实时荧光定量聚合酶链式反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction ，RT-qPCR）检测自噬相关基因mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件进行统计分析。mRNA相对含量2-ΔΔCt用“x±s”表示。经比较Ct值法分析基因表达差异。Earle’s balanced salts solution（EBSS，又称饥饿培养基），诱导细胞自噬相关基因mRNA表达量变化的比较采用t检验分析，以P0.05为差异有统计学意义。 结果 PMA浓度为100 ng/ml、诱导时间为24～48 h时，THP-1细胞分化成巨噬细胞的形态学状态较理想。饥饿培养基EBSS处理分化的THP-1细胞，能增加自噬体YFP-LC3点聚集，其自噬相关基因LC3、Atg5、Atg7、Beclin1的mRNA表达水平显著增加 （2-ΔΔCt均值分别为1.35±0.16、1.18±0.39、1.44±0.12、1.08±0.09，t值分别为4.00、2.90、5.16、3.57，P值均＜0.05）。 结论 PMA在浓度为100 ng/ml、24～48 h时诱导THP-1分化为巨噬细胞状态较理想；成功构建了THP-1源性细胞自噬模型。

豆蔻酰佛波醇乙酯与γ-干扰素协同诱导肿瘤细胞B_(7-1)表达的临床研究

目的探讨豆蔻酰佛波醇乙酯（ＰＭＡ）和γ干扰素（γＩＦＮ）在卵巢癌及其他肿瘤治疗中的意义。方法用ＰＭＡ＋γＩＦＮ处理的卵巢癌细胞及其他肿瘤细胞用流式细胞仪检测免疫球蛋白超家族糖蛋白的共刺激分子Ｂ７－１、主要组织相容抗原（ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ）的表达情况。并采用５１铬（５１Ｃｒ）４小时释放试验及［３Ｈ］胸腺嘧啶渗入法了解Ｂ７－１的表达对细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性和对Ｔ淋巴细胞增殖的诱导情况。结果预先用ＰＭＡ处理，后用γＩＦＮ处理的肿瘤细胞，能诱导Ｂ７－１表达阳性的伯基特淋巴瘤细胞株或转染Ｂ７－１基因的卵巢粘液性囊腺癌细胞的Ｂ７－１表达增强，能诱导无Ｂ７－１、ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ表达的卵巢癌细胞株及其他肿瘤细胞株表达Ｂ７－１及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ，而单独用γＩＦＮ则不能诱导Ｂ７－１表达。ＰＭＡ和γＩＦＮ的这种协同效应能被蛋白激酶抑制剂１（５磺酰基）异喹啉２甲基哌嗪盐酸盐（Ｈ７）阻断。被诱导表达的Ｂ７－１能激活ＣＴＬ的杀伤活性，并能增强Ｔ淋巴细胞的增殖能力。结论γＩＦＮ诱导的Ｂ７－１的表达可能依赖于ＰＭＡ预先激活蛋白激酶Ｃ。诱导Ｂ７－１等的表达对治疗肿瘤有一定的价值。

PMA联合钙离子载体诱导K562细胞向树突状细胞分化

目的探讨卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)联合钙离子载体(CI)诱导K562细胞向树突状细胞(DC)分化的作用。方法对数生长期的K562细胞在含PMA和CI的培养液中培养96h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞表型,用MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖的能力。结果PMA联合CI组细胞形态发生明显变化,表面出现许多细小的突起,细胞表面CD83、CD86、CD80、CD40、HLA-DR和CD1a表达上调,并且可以刺激淋巴细胞的增殖反应。结论PMA联合CI可以有效地使K562细胞向DC分化。