十四酸甾醇酯调控Wnt/β-catenin信号通路促皮肤创面修复的研究

目的探讨十四酸甾醇酯(cholesterol myristate)对大鼠皮肤创面修复过程中Wnt/β-catenin通路的调控。方法十四酸甾醇酯作用于大鼠触须部皮肤创面,观察皮肤创面的修复情况,免疫荧光检测皮肤组织中Wnt/β-catenin通路蛋白的表达;体外分离培养SD乳鼠毛囊干细胞(Hair Follicle Stem Cells,HFSCs),免疫荧光检测细胞表面标志物CD34、CK15的表达,CCK-8法检测十四酸甾醇酯对HFSCs增殖的影响,RT-q PCR、Western-blot检测其对HFSCs中Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果术后7 d,十四酸甾醇酯组创面基本愈合,表皮细胞排列紧密,表皮与真皮层连接牢固,可见新生毛细血管;对照组表皮与真皮连接不牢固,表皮排列不规则,仍有炎症浸润。术后4 d,免疫荧光检测十四酸甾醇酯组修复皮肤中β-catenin、Lymphoid enhancing factor 1(LEF1)、cancer-myc(c-myc)、cyclin D1的表达均强于对照组。所培养的细胞表达HFSCs标志物CD34、CK15,十四酸甾醇酯对HFSCs有促增殖作用(P<0.01),且β-catenin、LEF1、c-myc、cyclin D1表达上调。结论十四酸甾醇酯通过激活HFSCs中的Wnt/β-catenin通路促皮肤修复。

龟板软膏调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路修复大鼠急性皮肤创面

背景:龟板散由龟板、黄连和冰片组成,是治疗皮肤疮疡的有效方剂。中药单体机制明确,龟板的有效单体十四酸甾醇酯可以激活并调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路。目的:探讨龟板软膏对大鼠急性皮肤创面的修复效果,以及其作用是否通过调控毛囊干细胞的Wnt/β-catenin信号通路实现。方法:取龟板散各组分中的有效单体十四酸甾醇酯(S8)、盐酸小檗碱及右旋龙脑制备龟板软膏。构建SD大鼠急性皮肤创面模型并随机分为3个药物组:龟板软膏组、S8组和空白对照组,连续给药10d。造模后连续3d注射BrdU(50mg/kg)标记增殖细胞。分别于修复第3,5,7及10天计算创面愈合率,苏木精-伊红染色和Masson染色观察创面病理学变化,Western blot法和免疫荧光检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、LEF1、C-myc及毛囊干细胞的表面标志物CD34和Integrinβ1的表达情况。实验方案经广州中医药大学动物实验伦理委员会批准,批准号为20190218001。结果与结论:①修复第5,7,10天,龟板软膏组的创面愈合率均高于其他组(P<0.05);②龟板软膏组新生表皮与真皮连接紧密,新生皮肤附属器较S8组和空白对照组多,胶原纤维致密,修复效果优于其他组;③龟板软膏组和S8组Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、LEF1、C-myc及毛囊干细胞的表面标志物CD34、Integrinβ1的阳性表达量均高于空白对照组,β-catenin、CD34和Integrinβ1的阳性表达均上调,LEF1和C-myc的表达呈先上调后下降变化,差异有统计学意义(P<0.05);④龟板软膏组中BrdU标记的增殖细胞数量较其他组多,且同时表达CD34阳性和LEF1阳性;⑤结果提示:龟板软膏可能通过调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,加快大鼠急性皮肤创面的修复,龟板软膏由S8、盐酸小檗碱及右旋龙脑3种有效单体组成,具有稳定性和安全性,其对急性皮肤创面的促愈合效果优于单一有效单体。