快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。

石墨:个性十足的“工业黑金”

石墨,这种平凡的黑色物质,其功能与应用方式随着人类社会发展而不断演变,从书写工具,到工业制造的重要原料,再到电子与能源领域的广泛应用,石墨见证了人类文明进步和科技创新,展现出巨大的发展前景与应用潜力,是当今世界高新技术发展不可或缺的非金属材料,也是重要的战略性矿产资源。作为名副其实的“工业黑金”,石墨是如何形成的,又为何具有如此之多的功能与应用呢?

三疣梭子蟹十足目虹彩病毒1 SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据DIV1的MCP和ATPase基因序列,设计并筛选出引物,以制备的DIV1阳性质粒标准品为模板构建标准曲线,建立DIV1的SYBR Green I qPCR方法,并对该方法进行临床初步应用。结果显示,建立的qPCR方法阈值循环数(cycle threshold value,Ct)与标准品拷贝数的对数线性关系良好,标准曲线相关系数(R^(2))为0.999;对DIV1阳性的虾蟹核酸样本能够进行特异性扩增,但对传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)和白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)阳性核酸样本均无扩增;最低检测限为9.77 copies/μL;Ct值的组内和组间变异系数均小于1%。运用该方法对70份疑似感染DIV1的虾蟹类样本进行DIV1检测,该方法阳性率为48.57%,与套式PCR检测方法的阳性率一致;利用建立的方法对DIV1阳性三疣梭子蟹的血淋巴、肝胰腺及心脏等组织进行定量检测分析,结果显示各组织中均存在DIV1,其中血淋巴中DIV1平均拷贝数最高。研究表明,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于对DIV1的快速、定量检测,对十足目虹彩病毒病的诊断和防控具有重要意义。

虾十足目虹彩病毒1、肝肠胞虫及传染性早熟病毒多重Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立检测十足目虹彩病毒1(DIV1)、肝肠胞虫(EHP)、传染性早熟病毒(IPV)的多重Taq Man荧光定量PCR检测方法,本研究根据DIV1 MCP基因、EHP SSU基因与IPV polyprotein A基因设计特异性引物和Taq Man探针,经各反应条件的优化建立了同时检测DIV1、EHP及IPV的多重Taq Man荧光定量PCR方法。利用该方法检测DIV1、EHP、IPV、白斑综合征病毒、致急性肝胰腺坏死弧菌、传染性皮下及造血器官坏死病毒、虾偷死病毒、传染性肌肉坏死病毒、桃拉病毒、黄头病毒1型等主要虾类病毒,结果显示,该方法仅能扩增出DIV1、EHP和IPV,与其他主要虾类病原均无交叉反应,特异性较强。对10倍倍比稀释后等浓度等体积混合的DIV1、EHP和IPV质粒标准品混合物的检测结果显示,该方法对3种病原的质粒标准品的检测限均为1.67×10^(1)拷贝/μL,各病毒单一荧光定量PCR方法的检测限均为1.67×10~0拷贝/μL,多重Taq Man荧光定量PCR方法的灵敏度虽略低于单一荧光定量PCR方法,但是可以同时检测3种病原,检测效率高。选取3个浓度的pDIV1、pEHP、pIPV(5×10^(5)拷贝/μL、5×10^(4)拷贝/μL、5×10^(3)拷贝/μL)等浓度等体积混合的质粒标准品为模板,进行组内和组间重复性试验,结果显示组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%,该方法重复性较好。利用该方法与DIV1、EHP、IPV单一荧光定量PCR方法同时检测105份虾苗和亲虾样品,结果显示,本研究建立的多重Taq Man荧光定量PCR方法对DIV1的检出率为21.9%(23/105),对EHP的检出率为14.3%(15/105),对IPV的检出率为45.7%(48/105),3种病原混合感染率为1.9%(2/105),与DIV1、EHP、IPV各单一荧光定量PCR方法的检测结果均一致,阳性样品的符合率达100%。本研究建立的DIV1、EHP、IPV多重Taq Man荧光定量PCR方法为临床同时检测该3种病原提供了特异、敏感、高效的技术手段。

中级汉语水平留学生“十足”一词的习得与偏误分析

根据“十足”所处的句法环境,可以归纳出六种表现形式:“N+十足”“V+得+十足”“A+十足”“十足+(的)+N”“十足+(地)+V”和“十足+A”。通过诱发测试和阅读判断测试,不难发现,汉语母语者和中级汉语水平的留学生,对于这六种表现形式有不同的使用倾向和可接受程度。留学生在使用上述格式时,还存在与“充足/十分/充分”相混淆的问题。“十足”偏误产生的原因主要体现在四个方面:母语负迁移、目的语负迁移、学习策略和教材因素,在这一基础上,提出具有针对性的教学建议。

虾类十足目虹彩病毒1(DIV1)LAMP-HNB快检方法的建立

[目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。[结果]在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg^(2+)和250μmol/L HNB,65℃恒温条件下反应60 min最佳;DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL,稳定性和特异性较好,通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定,多种模板扩增试验均未发生假阳性情况,符合试验要求。[结论]该研究建立的LAMP-HNB可视化快速检测方法,适用于上述对虾DIV1的现场快速检测。

“龙”重登场!青龙山年味儿十足

祥龙纳福辞旧岁,聚力同行启新程。为喜迎甲辰龙年,传承北大荒文化,弘扬北大荒精神,北大荒农业股份有限公司青龙山分公司“赶”热闹,“寻”年味,开展2024系列新春主题活动,为广大员工群众精心送上一份又一份年味儿十足的“新春大礼包”!

南美白对虾十足目虹彩病毒病症及防控技术研究

南美白对虾是当前世界上产量最高,规模最大的养殖对虾,以其美味和广泛的适应性,已成为世界各地水产养殖业的重要品种。然而,随着养殖规模的扩大,一种名为十足目虹彩病毒的疾病在南美白对虾养殖中变得越来越普遍。这种病毒的感染会导致对虾生长停滞、免疫力下降,甚至死亡,给养殖业带来了巨大的经济损失。因此,深入了解十足目虹彩病毒病症,并研究有效的防控技术,对于南美白对虾养殖业的可持续发展至关重要。

十足目异尾次目线粒体基因组比较分析及重排研究进展

近年来,线粒体基因组被广泛应用于物种鉴定、群体遗传、系统演化及适应性进化等领域。十足目异尾次目是一类体型介于虾类和蟹类之间高度特化的甲壳动物,在海洋生物系统演化研究中具有十分重要的意义。然而,与短尾次目相比,人们对异尾次目线粒体基因组关注度明显不足;迄今为止对该类群线粒体基因组及基因重排现象仍缺乏系统全面的了解。本研究综述了异尾次目线粒体基因组的研究现状,并对GenBank数据库已公布的26种异尾次目线粒体基因组全序列进行了比较分析,总结了该类群线粒体基因组的基本特征。在此基础上,首次分析了该类群线粒体基因组常见的重排类型及可能的重排机制。比较发现异尾次目线粒体基因组均发生了重排,表现为15种不同重排类型;这些重排事件都可以用复制-随机丢失模型和线粒体内重组模型进行合理的解释。综述还对重排现象在异尾次目系统发育中的应用进行了探讨,以期为异尾次目线粒体基因组进化及系统发育研究提供科学依据。

罗氏沼虾十足目虹彩病毒病流行病学调查及预防控制试验

为探索罗氏沼虾十足目虹彩病毒病预防控制技术,笔者开展了其流行病学调查,并采用罗氏沼虾池塘套放鮰鱼预防十足目虹彩病毒病,取得了较好的效果。现将调查和试验情况报告如下。一、十足目虹彩病毒病流行病学调查扬州市罗氏沼虾十足目虹彩病毒病于2021年首次发现,此病从池塘发现数只病虾至发病高峰仅2~3周。

四种十足目甲壳动物遗传差异的RAPD分析

采用RAPD技术，对分类阶元不同的四种十足目甲壳动物：克氏原螯虾、汉水华溪蟹、日本绒螯蟹合浦亚种和中华绒螯蟹，进行了遗传多态性的研究。四个物种DNA库的扩增结果表明，随着亲缘关系由近变远，物种间的相似率依次减小，由56．1％下降到22．3％。用UPGMA方法作聚类分析构建出物种的系统树图，反映出四个物种对应的种、科间、科间以上遗传差异逐步增大，这与以形态标记为主的分类结果相一致。在同工酶分析难以揭示差异的两种绒螯蟹中，用RAPD分析观察到明显的种间差异。两种绒螯蟹个体的扩增图谱分析结果为，中华绒螯蟹个体间的平均相似率为56．9％，日本绒螯蟹合浦亚种个体间为661％，两种绒螯蟹个体间的平均相似率则为51.9％。日本绒螯蟹合浦亚种个体间的平均相似率显著高于中华绒螯蟹个体间的平均相似率，异种绒螯蟹个体间的平均相似率显著低于同种个体间的平均相似率．

十足类甲壳动物卵巢发育过程中脂肪的积累与肝胰腺脂肪的变化

十足类甲壳动物卵巢发育过程中脂肪的积累与肝胰腺脂肪的变化成永旭赖伟堵南山（华东师范大学生物系上海２０００６２）关键词甲壳动物十足目肝胰腺脂肪卵巢十足类甲壳动物卵巢发育时脂肪的积累与肝胰腺脂肪变化研究，是十足类甲壳动物生殖生物学中重要的课题之一，近些...

感染并殖吸虫囊蚴唐氏华南溪蟹新种(Huananpotamon tangi sp．nov)记述(十足目：溪蟹科)

目的本文记叙了采自福建省延平区和三元区的华南溪蟹属Huananpotamon一新种——唐氏华南溪蟹。除留模式标本及"平台"标本外,其他的均作寄生虫检查,模式标木存福建省疾病预防控制中心。孳生于海拔400-800m的小溪中。延平区和三元区两地新种蟹体内分别感染卫氏并殖吸虫二、三倍体型及斯氏并殖吸虫囊蚴,感染率为20.0%(2/10)和33.33%(7/21),平均每只蟹检出3.6个和4.3个囊蚴。本种与铲肢华南溪蟹近似,但后者第一腹肢末节呈铲形,而新种呈不等边三角形。

十足目染色体研究进展

十足目(Deoapoda)是甲壳纲中最大的一目,已知共包含10 000多种动物.十足目动物与人们生活关系密切,如各种对虾、龙虾和蟹等,不仅营养丰富,而且味道鲜美,是人们十分喜爱的佳肴,具有很高的经济价值.20世纪60年代以来,随着众多经济虾蟹类(如中国明对虾、罗氏沼虾、中华绒螯蟹)人工培育苗种的成功,其养殖业发展迅猛,特别是近年来特种水产养殖业的兴起,使虾蟹类的产量倍增.

十足目甲壳动物促雄性腺研究概述

YE Hai Hui\ LI Shao Jing\ WANG Gui Zhong (Department of Oceanography, Xiamen University\ Xiamen\ 361005,China)

十足目受精生物学研究概述

由于十足目精子的特殊结构———无鞭毛、不运动、核呈凝絮状、顶体结构复杂，且受精过程迅速，特别是精卵识别、顶体反应，常常在瞬间发生，加上卵子富含卵黄而不易制片，使其受精生物学研究与其它精子具鞭毛的动物相比报道较少。本文就十足目受精生物学的研究做一简要的...