肺结核中DNA低甲基化趋势与TETs及TDG的相关性研究

目的明确肺结核病人DNA低甲基化状态与TETs、TDG之间的相关性。方法在前期研究结果的基础上,收集健康对照和活动性肺结核病人治疗前全血RNA,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,对参与DNA甲基化下调的DNA去甲基化酶,即十-十一染色体异位酶基因(TETs,包括TET1、TET2、TET3)及胸腺嘧啶糖基酶(TDG)进行定量检测。利用H37Rv裂解抗原以及5-氮杂胞嘧啶核苷(5azac)刺激物刺激人肺癌细胞系A549和人支气管上皮细胞Beas-2B两种细胞系,并收集刺激后不同时间点细胞DNA、RNA。利用甲基化敏感性限制性分析(MSRA)对所收集DNA样本进行分析;进一步利用Real-time PCR(RT-PCR)方法对细胞RNA样本进行检测。结果在肺结核病人组中,DNA去甲基化酶表达均显著升高(P<0.05)。H37Rv抗原、5azac导致DNA甲基化水平降低,且刺激时间越长甲基化降低越明显。且在刺激第4天A549细胞中H37Rv刺激组DNA去甲基化酶TET2、TET3上调,而在Beas-2B中为H37Rv刺激组DNA去甲基化酶TDG上调,与临床检测结果相符。结论在活动性肺结核病人中及体外细胞刺激实验H37Rv抗原刺激组中,DNA甲基化呈现低甲基化趋势;DNA去甲基化酶可能是参与其DNA低甲基化趋势的主要的酶。