我国省级采供血机构全血及红细胞成分血库存管理的回顾性研究

目的对2014~2021年我国省级采供血机构全血及红细胞成分血库存管理状况进行分析探讨。方法采用回顾性分析方法,收集2014~2021年我国省级采供血机构全血及红细胞成分血库存管理相关数据并进行统计学分析。结果每天全血及红细胞成分血平均库存量为2777.0(1762.5,4240.0)U呈逐年递增趋势;发放时红细胞成分血的平均天数为10.2(8.1,14.0)天呈波动递增趋势;从经济分区的角度看,每千人口全血发放量东北地区最高[0.0288(0.0188,0.0457)U],每千人口红细胞成分血发放量中部地区最高[16.77(13.39,18.92)U];报告的红细胞成分血过期量的数据中47个(52.2%)数据为0U。结论我国省级采供血机构在全血及红细胞成分血库存管理方面存在差异,管理水平有待进一步提升。

造血千细胞可逆转复发-缓解型多发性硬化患者的神经性残疾

研究结果显示：自体非清髓造血干细胞移植是安全的，其效果稳定，在一部分病例中甚至可逆转复发-缓解型多发性硬化（RRMS）患者的神经性残疾。该研究包括21例多发性硬化患者，11例女性和10例男性，均已对至少6个月的干扰素β治疗失去反应，患者平均年龄为33岁（20-53岁），没有严重的残疾。

国内26家地市级血站红细胞成分血库存管理现状的探讨

目的了解我国地市级中心血站(简称血站)红细胞成分血库存管理现状。方法收集2017-2021年我国26家血站合格红细胞成分血入库量、红细胞成分血日平均库存量、每千人口红细胞成分血发放量以及红细胞成分血发放时平均保存天数等红细胞成分血库存发放相关数据,并进行统计比对分析。结果2017~2021年期间25家血站合格红细胞成分血入库量年平均实现正增长,年平均增长中位数为5.90%;11家红细胞成分血日平均库存量年度同比波动在–30%~30%之间,14家年度同比>30%或<–30%;20家每千人口红细胞成分血发放量的年平均增长率为正值,年平均增长率中位数为5.09%。26家红细胞成分血发放时平均保存天数在7.11~17.66天之间,总体平均天数为12.52天。2017~2019年期间有8家血站、2020年有13家、2021年有9家发生红细胞成分血过期事件。结论近年我国血站红细胞成分血入库发放量呈整体上升趋势,且能保证供应的红细胞成分血相对新鲜和应对突发事件的库存,但日平均库存量呈波动状态和红细胞成分血过期事件提示精准库存管理还有完善的空间。

当归对缺氧鼠胚模型神经干细胞增殖的影响

目的探讨当归注射液对宫内缺氧胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响。方法将孕19天孕鼠经尾静脉注入当归注射液,用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,将鼠胚大脑组织作神经巢蛋白免疫组化染色后,进行图像分析。结果缺氧组鼠胚Nestin免疫组化反应较对照组增强,阳性细胞增多(P<0.05);而当归组鼠胚较缺氧组减弱,阳性细胞减少(P<0.05)。结论缺氧可刺激神经干细胞进入增殖状态;当归注射液对宫内缺氧大鼠神经干细胞可能具有保护作用;采用低张性缺氧方法制造胚胎宫内缺氧模型。

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。

骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达

目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对肝星状细胞(HSCs)RhoA信号因子及其细胞周期调控因子P27表达的影响,探讨MSCs调控HSCs细胞周期G1/S转换机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠MSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分3组:空白对照组、阴性对照组、MSCs实验组.用WST-8法对HSCs增殖率进行测定;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测MSCs与HSCs共培养后HSCs内RhoA,P27mRNA和蛋白的表达.结果:(1)HSCs与MSCs共培养24h后,HSCs表现明显增殖抑制(P<0.01),且呈现时间依赖性.MSCs实验组与空白对照组、阴性对照组比较均有显著性差异(均P<0.01).(2)共培养12h后,MSCs可阻滞HSCs由G0/G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与空白对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).(3)共培养12h后,MSCs实验组RhoA mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(P<0.05,P<0.01),随时间的延长呈递减趋势;共培养后,MSCs实验组P27 mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均无统计学差异.(4)共培养12h后,MSCs实验组RhoA蛋白表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递减趋势;共培养12h后,MSCs实验组P27蛋白与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递增趋势.(5)相关性分析显示:RhoA与P27mRNA的表达无明显相关(r=-0.105);RhoA与P27蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01).结论:MSCs抑制HSCs增殖的机制可能是通过RhoA-P27通路调控HSCs细胞周期改变;RhoA活性的下调可能是引起HSCs内P27蛋白表达增加的原因.

牛膝含药血清对体外培养人间充质干细胞增殖与分化的影响

目的研究牛膝对体外培养人间充质干细胞的增殖与分化的影响及其可能的分子机制。方法制备牛膝含药血清,分离与扩增人间充质干细胞,MTT法检测牛膝含药血清对体外培养的间充质干细胞增殖作用的影响,检测碱性磷酸酶与骨钙素以反映细胞分化水平的改变,RT-PCR检测成骨相关转录因子的表达。结果间充质干细胞的增殖速度加快,并能上调转录因子Msx2的表达,而碱性磷酸酶与骨钙素的表达没有变化。结论牛膝在体外有促进人间充质干细胞细胞增殖的作用,而不影响其分化。

Flk-1^+间充质干细胞和SP细胞参与肠道损伤修复的比较

目的比较骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞生物学特征及参与肠道放射性损伤修复的潜能及机制。方法流式细胞仪分析免疫表型;在肠道放射性损伤小鼠模型中,观察移植细胞的分布、分化及各组受体鼠照射后组织病理学改变及长期纤维化情况。结果这两个干细胞亚群的免疫学表型存在很大的差异;在肠道放射性损伤模型中均能够快速归巢到损伤的肠道局部,参与肠道上皮细胞的损伤修复,减轻照射后引起的纤维化胶原沉积。SP细胞移植后主要分布在肠道上皮,而Flk-1+间充质干细胞除了分布在肠道上皮外,还参与肠道间质的修复。结论骨髓来源Flk-1+间充质干细胞和肠道上皮来源的SP细胞都能有效的参与肠道放射性损伤修复,但修复机制上有差异。

共培养法神经细胞诱导骨髓间充质干细胞向神经元的分化

背景：目前神经细胞是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用还未见报道。目的：拟在体外建立入骨髓间充质干细胞和神经细胞的共培养体系，观察共培养条件下神经细胞对骨髓间充质干细胞分化为神经元的影响。设计、时间及地点：分组对照，体外细胞学实验，于2006—12／2007—12在山东省青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料：骨髓间充质干细胞来源于青岛大学医学院附属医院行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓血，神经细胞取材于分娩过程中窒息死亡的新生儿脑组织，传至第3代用于实验。用于细胞共培养的Transwell双层培养皿为Corning Costar公司产品，培养体系孔径小于3.0μm．细胞不会迁徙通过．但上、下层培养液可互通融合。方法：共培养组将神经细胞按1×10^6密度接种于Transwell双层培养皿的底层，上层接种骨髓间充质干细胞，加入LG-DMEM培养基,培养4-5d。对照组上、下层均接种骨髓间充质干细胞。主要观察指标：观察骨髓间充质干细胞的形态变化，免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞中神经元特异性标志物的表达。结果：共培养组骨髓间充质干细胞生长伸展，呈放射状突起．并可相互连接。神经元特异性烯醇化酶阳性率为（32．7±11．5）％．表现神经元细胞的特性。对照组骨髓间充质干细胞形状扁而宽，未形成神经样形态结构，神经元特异性烯醇化酶呈阴性。结论：神经细胞生长过程中提供的微环境对骨髓间充质干细胞分化为神经元具有诱导促进作用。

达兰猪精原干细胞的分离、纯化和初步鉴定

对达兰仔猪睾丸精原细胞及精原干细胞进行了体外分离、纯化和初步鉴定。对8d达兰仔猪的睾丸实质组织，采用Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶和胰酶组合消化法分离精细管细胞，制备单细胞悬液，用Percoll不连续密度（11％、19％、27％、35％和43％）梯度法纯化精原细胞；对纯化后的细胞培养12h，细胞贴壁后进行碱性磷酸酶（AKP）染色鉴定，初步确定精原千细胞及其比例。结果表明：所获精细管细胞悬液中活细胞和死细胞所占的比率分别为92．65％和7．35％，平均每克睾丸可获得4．17×10^7个细胞；精原细胞主要分布于19％～27％的Percoll梯度带中，经纯化后其纯度为47．62％，精原千细胞占该带细胞的比例为5．52％。因此，采用组合酶消化，结合Percoll不连续密度梯度离心法分离的达兰仔猪的精原细胞不但能够满足体外培养的需要，还可以做为精原千细胞移植的研究材料。

脉冲磁场对应激大鼠海马神经干细胞增殖的影响

建立大鼠束缚应激模型及脉冲磁场环境,观察应激大鼠在脉冲磁场环境中海马神经干细胞数及增殖变化.实验设对照、应激、磁场、应激磁场4个组,应用免疫组织化学法观察和计算各组海马巢蛋白(Nestin)和溴化脱氧核糖尿嘧啶(BrdU)的阳性细胞数.研究结果显示,Nestin在各组海马CA1和CA2区表达,BrdU在海马齿状回表达.实验各组Nestin和BrdU的阳性细胞比对照组明显增加,应激磁场组增加更显著,而磁场组和应激磁场组则无明显差异.这表明应激能引起大鼠海马神经干细胞内源性增殖,脉冲磁场能显著提高应激大鼠海马神经干细胞的增殖反应,提示在应激脑损伤的基础上,脉冲磁场作为外源性物理因素能刺激神经干细胞增殖,并可能修复受损神经元.

骨髓间充质干细胞的研究进展

近年来．干细胞研究已成为生物学和医学的热点。其中造血干细胞（hemopoietic stem cell）是研究最深入的一类，并且已经应用于临床．在治疗血液系统疾病方面取得了很大成就。除了造血千细胞以外．骨髓中还存在着另外一类间充质干细胞（mesenchymal stem cell．MSC）．是骨髓基质细胞（ marrow stromal cell）的重要组成成分．骨髓MSC不但能与其他细胞一起支持造血干细胞造血．

干细胞研究的问题与对策

干细胞的研究就是探索有关单个细胞增生、分化,甚至发展为一个生物有机体,在成熟的机体内健康的细胞替换衰老和受损伤的细胞规律和机制的研究.干细胞的研究已深入到了医学的各个方面.本文结合近年的文献,对干细胞研究过程中,随着新的发现而来的一系列问题:干细胞的定义、干细胞的来源、干细胞的不同类型、干细胞进行医学方面的治疗潜力、干细胞应用于临床疾病的治疗必须解决的问题和需要克服的障碍等几个方面的问题和进展作一综述.

益气温阳活血方对心肌梗死患者骨髓干细胞动员作用和心功能的影响

目的观察益气温阳活血方对心肌梗死患者骨髓干细胞的动员作用及心功能的影响。方法60例急性心肌梗死患者按数字表法随机分为治疗组和对照组,每组30例,两组患者均给予标准治疗:低分子肝素钙0.4 mL皮下注射,每12 h 1次,连用7天,阿司匹林肠溶片0.1 g,每日1次,培哚普利片4 mg,每日1次,阿托伐他汀钙10 mg,每日1次,如无禁忌症则连续使用,治疗组加服益气温阳活血方(人参10 g黄芪15 g制附子5 g毛冬青30 g益母草10 g)每天1剂,水煎服200 mL,早晚各100 mL,连用10天,观察两组患者外周血CD_(34)^+细胞数量变化情况,在发病3周末QRS记分法预测心肌梗死面积,超声心动图检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室收缩末期容积指数(left ventricular end-systolic volume index,LVESVI)、左室舒张末期容积指数(left ventricular end-diastolic volume index,LVEDVI)以及室壁运动积分指数(wall motion score index,WMSI)等指标。结果治疗组第5天和第10天,外周血CD_(34)^+细胞(分别为48.26±5.74和34.18±6.70),明显高于入院即刻(20.33±6.01),也高于同时刻对照组(分别为22.45±5.31和19.89±5.93),差异有统计学意义(P<0.01)。第21天,治疗组QRS积分(2.68±0.41)和梗死面积(22.54±2.49)%比对照组[分别为3.96±0.34;(29.38±2.59)%]为低,LVEF(0.59±0.07)比对照组(0.50±0.07)显著升高,治疗组LVESVI(27.47±7.86)、LVEDVI(68.92±11.52)和WMSI(2.10±0.11)与对照组(分别为36.71±8.85;78.46±13.16;2.98±0.12)比较,差异有统计学意义(P<0.01)结论益气温阳活血方具有良好的干细胞动员作用,可以减少心肌梗死面积,改善心功能。

人胚胎原生殖细胞中胚胎干细胞的分离培养

目的 :探讨人胚胎原生殖细胞分离培养的条件及在体内、外的分化能力 .方法 :从 5～ 9wk人胚胎生殖嵴中消化分离原生殖细胞 (PGC) ,将其置于饲养层上培养 ,采用大鼠心肌细胞条件培养基 (RH CM ) ,改变了常规使用添加白血病抑制因子 (LIF)的培养液 .结果 :成功地完成了对PGC的第 4代培养 ;经过培养形成的克隆以及克隆的生长方式基本符合胚胎干细胞 (ES)的特性 :AP染色呈阳性 ;体外分化实验显示此细胞具有发育多能性 ;悬浮培养时能够自然分化成类胚体(EB) .结论 :离散生殖嵴和增殖的PGC克隆的时机和方法是影响建系的关键 ;PMEF和HEF对人PGC克隆的影响无显著差异 ;添加RH

hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞的表达及生物学效应的观察

目的:观察人骨形态发生蛋白-2(humanbonemorphogeneticprotein-2,hBMP-2)基因转染兔骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)后的表达及表达产物对BMSCs增殖和向成骨细胞分化的影响。方法:利用腺病毒表达载体Adeno-XTM将hBMP-2基因转染兔BMSCs,用免疫组化染色。检测细胞内BMP-2的表达。然后通过MTT法分析其对细胞增殖的影响,并分别通过体外检测Ⅰ型胶原合成和表达情况、碱性磷酸酶染色和钙结节VonKossa染色,观察腺病毒介导hBMP-2基因转染兔BMSCs的成骨分化能力。结果:转基因细胞6周时仍能表达外源性基因。基因表达产物hBMP-2能明显促进BMSCs的增殖以及I型胶原的合成,转染后第14天碱性磷酸酶染色多数细胞为阳性,第21天出现钙结节。结论:hBMP-2基因转染BMSCs后可获得稳定表达,且基因表达产物能促进BMSCs增殖,并诱导其向成骨细胞分化。

人脐血间充质干细胞抑制心肌细胞凋亡的作用与安全性

目的探讨人脐带血来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)诱导后的安全性及其与人心肌细胞共培养下的抗凋亡作用。方法在知情同意的原则下,取得10位供者分娩时的脐带血。脐带血来源的MSCs经5-氮杂胞苷处理后向心肌细胞诱导分化。观察诱导分化的MSCs端粒酶活性,G带显带技术下的染色体组型,裸鼠体内诱导肿瘤形成,RT-PCR以及共培养下对心肌细胞凋亡的抑制作用。结果脐带血来源的MSCs可在体外经5-氮杂胞苷诱导分化为心肌细胞,诱导后的细胞具有端粒酶活性,未观察到异常的染色体组型。p53、cyclinA、Cdk2、β-肌动蛋白、c-fos、h-TERT和c-myc在5-氮杂胞苷处理前后的MSCs中表达相似。注射到裸鼠体内未见肿瘤形成。脐带血来源的MSCs对人心肌细胞凋亡有明显的抑制作用。结论脐带血来源的MSCs是一种安全有效的移植治疗的细胞来源,共培养下能抑制人心肌细胞的凋亡。

小鼠胚胎干细胞体外分步诱导为肝细胞的实验研究

目的:探索小鼠胚胎干细胞(ES)体外分步诱导为肝细胞的培养方法.方法:在小鼠胚胎成纤维细胞MEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子(LIF),然后分阶段加入含acid-FGF、肝细胞生长因子(HGF)、致瘤素(OSM)、胰岛素、微量硒酸等诱导因子.采用免疫组化方法检测白蛋白(Albumin)、细胞角蛋白CK18,用硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶(ALP).结果:ES细胞克隆ALP染色阳性,未分化.培养4d后,形成拟胚体.在分步加入诱导因子24d后,ES细胞分化出的细胞形态比较单一,类似上皮样细胞.诱导分化的细胞可见白蛋白、CK18阳性细胞.

骨髓间充质干细胞治疗感音神经性聋的基础研究进展

多种因素引起的内耳毛细胞及与之相连螺旋神经元的受损死亡,产生感音神经性聋。在目前有关治疗的研究中,能否通过细胞移植方法在所需部位定向产生内耳细胞,成为近年来研究热点。本文从骨髓间充质干细胞的生物学特性及在内耳感音神经性聋治疗中的基础研究方面做一综述。

胚胎干细胞来源的树突状细胞骨髓瘤疫苗抗瘤功能的观察

目的:探讨胚胎干细胞(ESC)来源的树突状细胞(DCs)骨髓瘤融合疫苗的抗肿瘤功能。方法:1)对骨髓瘤疫苗进行安全性检测,并观察其体外针对SP2/0的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应;2)融合疫苗的免疫保护实验和免疫治疗实验。结果:1)接种裸鼠未见致瘤情况初步证实该疫苗安全可靠,体外特异性CTL杀伤实验表明该融合疫苗具有较强的杀伤活性。2)ESC-DCs融合疫苗免疫组和BMC-DCs融合疫苗免疫组小鼠受到SP2/0攻击后,连续观察60d未见肿瘤形成。3)ESC-DCs融合疫苗治疗组小鼠中位生存时间为47d,BMC-DCs融合疫苗治疗组小鼠中位生存时间为46d,而PBS组小鼠中位生存时间仅为21d。结论:ESC-DCs与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合制备得到的融合疫苗具有较强的抗肿瘤功能,与BMC-DCs来源的同类疫苗相比具有相似的生物学特性及功能性。