全缘千里光碱脂质体包封率测定方法的研究

目的建立全缘千里光碱(integerrimine,INT)脂质体包封率测定方法。方法尝试以葡聚糖凝胶柱分离法与离心沉淀-离心超滤法测定INT脂质体的包封率,考察了第一种方法中游离药物柱回收率、游离药物和脂质体的分离度,考察了第二种方法中超滤膜对游离药物的吸附、滤出液中有无脂质体以及稀释对包封率测定结果的影响,并以第二种方法测定了空白脂质体与药物水溶液混合制得脂质体的包封率。结果葡聚糖凝胶柱分离法不能实现药物与脂质体的完全分离,超滤膜对INT溶液浓度基本无影响,离心沉淀可实现脂质体与外水相两部分质量的准确分离。离心-超滤法测定中样品稀释1倍使脂质体包封率降低约50%。结论葡聚糖凝胶柱分离法不适于INT脂质体的包封率测定,离心-超滤法可高效、准确、方便地测定INT脂质体包封率;INT与脂质双分子层有一定的亲和力,但在其中的滞留性较差。

不同基质对全缘千里光碱凝胶剂体外释放和透皮特性的影响

目的 :通过体外释放和透皮实验 ,优选全缘千里光碱凝胶剂基质 ,为制备全缘千里光碱透皮给药抗肿瘤的新制剂提供参考。方法 :利用溶出仪建立体外释放实验 ,体外透皮采用改良的Franz扩散池法 ,并通过RP HPLC法测定释放液和接收液中全缘千里光碱的含量。结果 :全缘千里光碱三种基质的凝胶体外释放符合Higuchi方程 ,释放速率CMC Na凝胶 >HPMC凝胶 >Carbopol凝胶。体外透皮符合零级动力学过程 ,稳态透皮速率HPMC凝胶 >CMC Na凝胶 >Carbopol凝胶。结论 :凝胶剂作为全缘千里光碱透皮吸收新剂型是可行的 ,首选HPMC作为凝胶基质 ,不宜选择Carbopol作基质。

全缘千里光碱脂质体凝胶剂的HPLC测定

建立了HPLC法测定全缘千里光碱脂质体凝胶剂的含量。采用C_(18)柱,流动相为水-乙腈(70：30,pH 8．6),检测波K213nm。全缘千里光碱在20～180μg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为96．9%,RSD为1．2%。

倒千里光碱处理SD大鼠永生化肝细胞同种脾内移植增殖实验研究

目的探讨倒千里光碱(Retrorsine, Rts)处理对SD大鼠永生化肝细胞同种脾内移植增殖效率的影响。方法SV40 T抗原转染法制备永生化肝细胞。成熟SD大鼠24只,随机分为A、B、C 3组,A组为Rts处理SD大鼠永生化肝细胞移植组;B组为Rts处理SD大鼠正常肝细胞移植组;C组为正常SD大鼠永生化肝细胞移植组。A、B两组SD大鼠分2次腹腔注射Rts,间隔2周,第2次注射Rts 4周后备用。20%肝叶切除后,3组SD大鼠分别行永生化肝细胞移植或肝细胞移植,常规病理切片检查脾内移植永生化肝细胞增殖效率,免疫组化检测脾脏内移植永生化肝细胞白蛋白表达,透射电镜检测移植永生化肝细胞形态。结果病理检查显示,肝细胞移植后3周内,3组SD大鼠脾脏内均可见移植肝细胞;免疫组化结果显示,3组SD大鼠脾脏实质内均可见散在棕黄色白蛋白颗粒,A组大鼠脾脏内肝细胞面数密度与B组比较无显著差异,但与C组有显著差异;透射电镜检测结果显示,脾内移植永生化肝细胞具有正常肝细胞的超微结构。结论脾内移植永生化肝细胞具有正常肝细胞的形态、结构及白蛋白表达功能;Rts可促进永生化肝细胞SD大鼠脾脏内移植的增殖效率。

全缘千里光碱脂质体及其凝胶剂的体外释药比较研究

目的阐明全缘千里光碱脂质体及其凝胶剂的体外释放特性并探讨释放机制。方法制备全缘千里光碱脂质体、脂质体凝胶剂与普通凝胶剂,凝胶均以Carbopol为基质。以透析法测定它们的体外药物释放度,并以相似因子法比较释放曲线的相似性,以Ritgar-Peppas方程拟合释放曲线。结果脂质体凝胶剂与普通凝胶剂的释放行为基本一致,它们的药物释放速率均比脂质体快,脂质体(0.6 g样品量)的药物释放速率比脂质体(1.0 g样品量)快;脂质体凝胶剂(1.0 g样品量)、普通凝胶剂(1.0 g样品量)、脂质体(0.6 g样品量)、脂质体(1.0 g样品量)的释放曲线按Ritgar-Peppas方程拟合后释放参数n值分别为0.63、0.68、0.39与0.44。结论将脂质体分散于Carbopol凝胶中对脂质体中全缘千里光碱释放有促进作用。推测凝胶剂中游离药物释放速率不高于脂质体凝胶剂中药物由脂质体释放到凝胶基质的速率。在透析法测定释放度的条件下,凝胶剂(含脂质体凝胶剂)与单纯脂质体释药机制有差异,前者可能倾向于溶蚀机制释药,后者倾向于扩散机制释药。

全胚胎培养方法研究千里光碱对小鼠胚胎发育的影响

采用小鼠全胚胎培养模型,将8.5d小鼠胚胎在含有千里光碱的即刻离心血清中培养48h(千里光碱的终浓度分别为100、50、25和12.5μg.mL-1),观察千里光碱对胚胎生长发育(卵黄囊直径、颅臀长、头长和体节数)和组织器官形态分化(卵黄囊循环、尿囊、翻转、心、脑、尾神经管、视听嗅系统、腮弓、颌突和肢芽)的影响。结果显示,随千里光碱浓度的增加,胚胎的生长发育和组织器官形态分化受到的影响越来越严重,其中卵黄囊循环、心、视系统、嗅系统、下颌突和后肢芽的影响最为明显。这表明千里光碱对体外培养的小鼠胚胎有明显的毒性作用,说明妊娠期暴露于该化合物中会对胎儿具有潜在的毒性。

倒千里光碱对肝大部分切除小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

背景:目前大多数应用倒千里光碱造成肝损伤模型都是以大鼠为实验对象,有研究报道倒千里光碱并不能抑制小鼠肝细胞增殖,也有报道倒千里光碱对小鼠的肝细胞具有增殖抑制作用。目的:观察单纯肝脏大部分切除及其联合应用倒千里光碱致小白鼠对肝损伤后再生修复的影响。方法:40只C57BL/6J小鼠随机数字表法分为2组,每组20只。倒千里光碱/肝脏部分切除组:腹腔注射倒千里光碱溶液70mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后肝脏2/3切除。肝脏部分切除组:腹腔注射生理盐水70mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后行肝脏2/3切除。观察术后14d肝脏大体结构恢复情况;苏木精-伊红染色观察术后第3,7天肝细胞损伤情况;BrdU染色观察术后第3天成熟肝细胞增殖情况;CK19和C-kit免疫组织化学方法观察术后第3,7,14天肝脏卵圆细胞增生情况。结果与结论:肝脏部分切除组14d肝大体结构基本恢复正常,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝脏大小没有明显的恢复。苏木精-伊红染色可见倒千里光碱/肝脏部分切除组明显的肝细胞变性改变;BrdU染色肝脏部分切除组术后第3天有明显肝细胞增殖,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝细胞增殖很少。CK19和C-kit免疫组织化学结果显示倒千里光碱/肝脏部分切除组术后第3天开始肝脏主要通过肝卵圆细胞增生并逐渐向肝细胞和小胆管分化,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。提示倒千里光碱可抑制小鼠肝脏损伤后肝细胞增殖再生。建立倒千里光碱/肝脏部分切除小鼠模型可诱导肝脏卵圆干细胞增生。

全缘千里光碱体外透皮特性的研究

目的研究全缘千里光碱的体外透皮特性,为全缘千里光碱的抗肿瘤制剂设计提供依据。方法采用V-C扩散池,以裸鼠皮肤为渗透屏障,渗透系数为指标,采用RP-HPLC法测定全缘千里光碱,考察氮酮、4%聚山梨酯-80、8%丙二醇的影响。结果以水为释放介质,pH6.8PBS为接收液,其渗透系数为1.184×10-2cm/h。2%氮酮、8%丙二醇对它的增渗比分别为2.8、1.5,而聚山梨酯-80却表现出阻碍作用。结论全缘千里光碱适合制备成经皮给药抗肿瘤的新制剂,并可据此实验优化其透皮给药新制剂的处方。

千里光碱普通凝胶剂和脂质体凝胶剂透皮特性的比较研究

目的 :比较研究千里光碱普通凝胶剂 (GG)和脂质体凝胶剂 (LG)的离体和在体的透皮及皮肤滞留特性 ,为研制千里光碱LG提供依据。方法 :离体改进的Franz扩散池法。结果 :LG和GG经离体完整皮肤和去角质层皮肤药物渗透系数没有显著差别 ;而经完整皮肤时药物在皮肤的滞留量LG为GG的 3 2倍 ,但皮肤去角质层后 ,LG为GG的 0 198倍。结论 :脂质体促进千里光碱在皮肤角质层内滞留 ,而不显著改变其皮肤透过量 。

HPLC法测定一点红中克氏千里光碱的含量

目的：建立高效液相色谱法测定一点红中克氏千里光碱含量的方法。方法：用Kromasil RP-C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相为乙腈-水-磷酸-三乙胺（15∶85∶0.1∶0.4），检测波长为220 nm。结果：克氏千里光碱在10.04～200.80μg· mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝0.9998），平均加样回收率为96.34％，RSD为1.80％（n＝6）。结论：此法快速、简便，专属性好，可用于一点红药材中克氏千里光碱的限量检查，为2015年版《中国药典》拟增订药材一点红的质量控制奠定基础。

千里光碱脂质体对黑色素瘤B16细胞周期和超微结构的影响

目的观察千里光碱脂质体对黑色素瘤B16细胞周期和超微结构的影响。方法采用流式细胞仪和电子显微镜观察黑色素瘤B16细胞周期和超微结构的变化。结果千里光碱可以阻滞细胞周期,抑制肿瘤细胞DNA合成,促进细胞凋亡,改善黑色素瘤细胞的超微结构。结论千里光碱可能是通过阻滞细胞周期,促进细胞凋亡来改变肿瘤细胞超微结构,而发挥抑制肿瘤的作用。

千里光总碱和千里光碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响

目的探索千里光总碱和千里光碱对体外培养的小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察千里光总碱和千里光碱对小鼠黑色素瘤B16F10株的影响。结果千里光总碱和千里光碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤B16F10株的增殖。结论千里光总碱和千里光碱可以抑制体外培养的小鼠黑色素瘤细胞的增殖。

UPLC-DAD法测定款冬花中克氏千里光碱的含量

目的:建立UPLC-DAD法测定款冬花中克氏千里光碱的含量。方法:采用沃特世CORTECS UPLC C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.6μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85);检测波长220 nm;柱温:30℃;进样量:1μL。结果:克氏千里光碱在2.048~81.82μg·mL^(-1)浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r=1.0000);平均加样回收率分别为89.46%,RSD分别为2.80%;10批样品中克氏千里光碱的含量为0.00236~0.00534%。结论:该方法简便、快速,可用于款冬花中克氏千里光碱的含量测定。

千里光碱脂质体凝胶剂对紫外线照射动物的影响

目的观察千里光碱对紫外线照射动物的影响。方法采用紫外线照射造模,对比小鼠照射前后的变化。结果千里光脂质体凝胶剂可以减轻紫外光照射引起的皮肤炎症和溃疡。结论千里光碱脂质体凝胶剂对紫外线照射所致的小鼠皮肤炎症和溃疡具有抗炎、抗溃疡的作用。

HPLC-ESI-ITMS法分析蜜炙前后款冬花中毒性成分克氏千里光碱的变化

目的建立款冬花中毒性成分克氏千里光碱的含有量测定方法,考察蜜炙对其影响。方法采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术进行定量分析,比较蜜炙前后款冬花中克氏千里光碱的含有量。结果所建立的含有量测定方法经方法学验证,并成功应用于款冬花及其蜜炙品中克氏千里光碱含有量的测定;款冬花蜜炙后,克氏千里光碱含有量显著降低。结论该方法简便快速、准确灵敏,可用于款冬花的质量控制的完善提供参考;蜜炙对款冬花可能具有一定的减毒作用。

倒千里光碱的反应性代谢产物与RNA形成双分子嘌呤共价结合物

目的研究吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PAs)中倒千里光碱(retrorsine,RTS)的反应性代谢产物在体外和体内与RNA的相互作用。方法通过液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析合成反应、肝微粒体孵育和给药RTS的小鼠中腺苷和鸟苷与RTS的反应性代谢产物形成的加合物。结果在体外合成反应液,肝脏微粒体孵育液和给药RTS的小鼠肝脏组织中检测到了RTS的反应性代谢产物与腺苷和鸟苷形成的双分子嘌呤加合物,体内观察到的所有加合物的生成量呈剂量依赖性,并在给药后2 h达到峰值。结论首次发现RTS的反应性代谢产物与RNA反应形成RNA双分子加合物,可能是RTS导致肝毒性的重要原因之一。

全缘千里光碱脂质体及其凝胶剂的皮肤渗透研究与机制探讨

目的阐明全缘千里光碱(integerrimine,INT)脂质体及其凝胶剂的离体皮肤渗透与滞留特性,探讨该制剂皮肤应用的作用机制。方法制备INT脂质体、脂质体凝胶剂与普通凝胶剂;建立离体皮肤渗透接收液与皮肤中药物含量测定的HPLC方法;采用Franz扩散池法测定各种制剂与不同理化参数脂质体的药物离体皮肤渗透与滞留,并通过比较测定结果探讨制剂的作用机制。结果成功制备并表征3种制剂。渗透接收液与皮肤中INT含量测定的HPLC法准确、精密。3种制剂的药物皮肤透过量均较小;应用12 h后皮肤滞留量:优化脂质体>脂质体凝胶剂>普通凝胶剂(2.59∶1.75∶1,P<0.01),在角质层下皮肤滞留量:优化脂质体>脂质体凝胶剂>普通凝胶剂(2.54∶1.72∶1,P<0.01),而角质层药物滞留量占全皮约为60%,且制剂间无显著性差异。包封率高的脂质体具有较高的角质层药物滞留。结论脂质体通过与皮肤的相互作用可促进INT进入皮肤,是有毒药物皮肤局部作用的良好载体,而凝胶基质减小脂质体促进药物进入皮肤。

款冬花碱制前后毒性成分克氏千里光碱含量变化及初步风险评估

目的:利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法比较款冬花碱制前后毒性成分克氏千里光碱(SK)含量的变化,确定炮制减毒工艺条件,并根据测定结果进行初步的风险评估。方法:在前期研究基础上优化UPLC-MS/MS分析方法,并建立款冬花炮制减毒工艺,通过单因素实验结合正交实验设计,以SK含量为评价指标,分别对碱水用量、加热温度及加热时间进行考察,筛选出最佳炮制工艺,并与传统蜜炙法对比。结果:SK浓度在1.00~503.04 ng·mL^(-1)范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r>0.999);平均加样回收率为93.8%,RSD为3.0%;碱处理工艺为:水浴加热80℃,反应时长120 min、加5%碳酸钠溶液体积比(反应液与碱液)为2∶1时,16批款冬花SK水解率均达到90%以上,4批蜜款冬花SK含量下降率为40%左右。结论:与生品相比,该方法处理后的16批款冬花SK含量呈显著降低趋势,且炮制前的16批款冬花药材均为风险等级,通过此炮制方法,5批转为无风险等级,11批转为低风险等级。虽然蜜炙法也能降低SK的含量,但与该碱制法相比,4批蜜款冬花仍属于风险等级药材,这为款冬花的安全用药提供了可行性指导依据。

LC-MS^n鉴定肝毒性吡咯里西啶类生物碱千里光碱大鼠体内代谢产物

目的研究肝毒性吡咯里西啶类生物碱千里光碱的大鼠体内代谢。方法 SD大鼠口服千里光碱,收集胆汁、尿液及粪便样本,采用液相色谱-多级质谱联用对代谢产物进行研究,推导其体内代谢模式。结果正负离子下共检测到38种代谢产物,主要为千里光碱及其代谢物的氮氧化物,羟化产物,水解产物,以及硫酸结合物,葡萄糖醛酸结合物和谷胱甘肽结合物。另外,尿液、胆汁与粪便中检测到的代谢物有一定差异,胆汁和尿液中代谢产物较多。结论千里光碱在大鼠体内代谢广泛,形成多种代谢产物。