千金藤碱中的微量生物碱杂质

纯度达99.5%的千金藤碱经氧柱层析反复分离纯化,得到其中的微量杂质成分,通过波谱鉴定为(+)-千金藤碱2′--βN-氧化物(1)。

喷雾干燥法制备盐酸千金藤碱微囊

目的采用喷雾干燥法制备盐酸千金藤碱微囊。方法以包封率为考察指标,对喷雾干燥工艺参数进行正交法设计,并考察Eudragit S100用量、微囊芯材比对微囊性能的影响。结果最佳工艺条件为Eudragit S100质量分数4%;芯材比1∶4;进风口温度140℃;进样体积流量6 mL/min;喷雾压强0.2 MPa;制得的微囊形态较好,包封率较高。结论喷雾干燥法制备盐酸千金藤碱微囊,工艺稳定可行,可连续操作。

千金藤碱通过MAPK/ERK信号通路对鼻咽癌大鼠的防治作用及对Survivin、XIAP、Bcl-2表达的影响

目的探讨千金藤碱通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对鼻咽癌大鼠的防治作用及对存活素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响。方法采用皮下注射二亚硝基哌嗪(DNP)建立鼻咽癌大鼠模型,随机分为模型组、千金藤碱组、激活剂组、抑制剂组,另设对照组。检测鼻腔灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;HE染色观察鼻黏膜病理变化;TUNEL法观察鼻黏膜细胞凋亡情况;Western blotting检测鼻黏膜中ERK、p-ERK、Survivin、XIAP、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果千金藤碱组、激活剂组和抑制剂组大鼠鼻黏膜组织病理学变化较模型组明显好转,但激活剂组改善较差;与模型组比较,千金藤碱组、激活剂组和抑制剂组大鼠体质量及鼻黏膜Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达升高,IL-1β、IL-18水平和细胞凋亡率及p-ERK1/2、Bax蛋白表达降低(P<0.05);与千金藤碱组比较,激活剂组大鼠体质量及鼻黏膜Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达降低,鼻腔灌注液中IL-1β、IL-18水平和鼻黏膜细胞凋亡率及p-ERK1/2、Bax蛋白表达升高,抑制剂组大鼠体质量及鼻黏膜Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达升高,而相应的IL-1β、IL-18水平和细胞凋亡率及p-ERK1/2、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论千金藤碱对鼻咽癌大鼠具有一定防治作用,可能通过抑制MAPK/ERK通路发挥作用。

盐酸千金藤碱对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的治疗作用

目的观察盐酸千金藤碱(CEH)对化疗所致小鼠白细胞减少的治疗作用。方法①CEH对环磷酰胺(CTX)所致小鼠白细胞(WBS)减少的影响健康昆明种小鼠50只,随机分为5组,即正常对照组、CTX模型对照组、CEH小剂量组、中剂量组、大剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用剂量为75mg/(kg.d)的CTX小鼠腹腔注射,1次/d,连续3d,造成动物外周血WBC减少,于第2d开始腹腔注射生理盐水和不同剂量的CEH5mg/(kg.d)、10mg/(kg.d)、20mg/(kg.d),1次/d,连续5d。分别于用CTX前和用CTX后第3d、第5d自小鼠尾静脉采血计数外周血WBC。②CEH对CTX所致荷瘤小鼠WBC减少的影响健康昆明种小鼠50只,先接种H22实体瘤后24h,随机分为5组,即生理盐水对照组、CTX小剂量组(10mg/(kg.d))、CTX大剂量组(20mg/(kg.d))、CTX小剂量与CEH小剂量(10mg/(kg.d))合用组、CTX大剂量与CEH大剂量合用组,每组10只,进行腹腔注射,1次/d,连续8d,于第9d自各组小鼠尾静脉采血计数外周血WBC。结果①CEH对CTX所致小鼠WBC减少的影响试验中,在用CTX后第3d、第5d外周血WBC计数CEH小、中、大剂量组与单用CTX组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。②CEH对CTX所致荷瘤小鼠WBC减少的影响试验中,CTX与CEH合用组与单用CTX组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CEH具有明显的治疗由CTX所致白细胞减少的作用。

利用人源Caco-2细胞单层模型研究罂粟碱、N-甲基四氢罂粟碱和头花千金藤碱在人肠道的吸收

研究罂粟碱(papaverine,PAP)、N-甲基四氢罂粟碱(laudanosine,LAU)和头花千金藤碱(cepharanthine,CEP)在人小肠的吸收。利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究PAP、LAU和CEP由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用HPLC-UV对上述3个生物碱进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数,并与易吸收性对照药普萘洛尔和难吸收性对照药阿替洛尔进行比较。PAP、LAU和CEP由AP侧到BL侧的表观渗透系数(Papp)分别为(3.524±0.223)×10-5、(2.821±0.050)×10-5和(6.524±0.052)×10-5cm·s-1;由BL侧到AP侧的Papp分别为(5.095±0.508)×10-5、(2.646±0.146)×10-5和(5.495±0.036)×10-5cm.s-1,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔基本一致。PAP、LAU和CEP的PappA→B/PappB→A分别为0.69、1.07和1.19;PAP外流是摄取的1.45倍。PAP、LAU和CEP可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,属于良好吸收的药物。在三者的吸收转运过程中,油/水分配系数起着关键性的作用。PAP在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。

盐酸千金藤碱逆转肝癌多药耐药性与P-gpATP酶活性的关系研究

目的观察盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochlo-ride,CH)联合FAP对肝癌多药耐药性的逆转作用及其机制。方法 MTT法检测CH和维拉帕米对耐药细胞的无毒剂量;MTT法检测H22/FAP肝癌细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数;生命延长率评价CH联合FAP的药效;定磷法检测P-gp ATP酶活性。结果细胞毒性检测结果提示,CH和VER剂量分别为1.0、0.15 g.L-1时,对H22/FAP细胞的抑制率<10%;MTT检测显示,H22/FAP瘤细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数分别为27.75、10.20、11.20;生命延长率结果显示CH 10、5 mg.kg-1联合FAP组能有效延长小鼠生存时间;动力学分析提示CH能够提高ATP酶活性,Vmax值约为184 nmol.min-1.mg-1,与阳性对照药维拉帕米相近。结论 CH联合FAP能够逆转肝癌多药耐药性,其机制之一可能为CH能够提高P-gpATP酶活性,抑制P-gp外排功能。

千金藤碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长和转移以及对血红素加氧酶-1和表皮生长因子受体基因表达的影响

目的探讨千金藤碱抑制肺癌细胞A549生长、迁移和侵袭的作用以及对血红素加氧酶-1(heme oxy-genase-1,HO-1)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因表达的影响。方法甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测千金藤碱对肺癌细胞的细胞毒性,观察其对A549细胞生长的抑制作用,并用倒置显微镜观察千金藤碱处理不同时间内A549细胞的形态变化;Transwell和侵袭实验检测A549细胞迁移和侵袭能力;RT-PCR和Western blot法分别检测A549细胞内HO-1和EGFR基因的mRNA和蛋白表达水平。结果千金藤碱能够抑制肺癌细胞A549细胞的生长,细胞活力随着作用浓度的增加和时间的延长明显降低;10g/ml千金藤碱处理24h后,A549细胞发生体积变小、皱缩变圆和染色体固缩等现象;与对照组相比,千金藤碱(>5.0g/ml)可使穿过隔膜和穿过基质胶的A549细胞数明显减少(P<0.05)。10.0g/ml千金藤碱明显降低A549细胞中HO-1和EGFR基因的mR-NA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论千金藤碱可抑制肺癌细胞的增殖,降低A549细胞的迁移和侵袭能力,下调A549细胞的HO-1和EGFR基因的表达水平,且作用效果具有一定的时间和浓度依赖性。

千金藤碱对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的逆转作用和对HO-1和NQO1表达的影响

目的:探讨千金藤碱(Cepharanthine,CEP)逆转人结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性以及对HO-1和NQO1表达的影响。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞亚系LoVo/5-FU;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测千金藤碱和化疗药物对结肠癌细胞的细胞毒性;RT-PCR和Western blot技术检测NQO1和HO-1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:LoVo/5-FU细胞对包括5-FU在内的4种化疗药物产生耐药性,其中对5-FU耐药性最高,是LoVo细胞的18.82倍;千金藤碱对LoVo和LoVo/5-FU细胞增殖均有抑制作用,其浓度超过20-25μg mL-1时最为明显,但是对2种细胞的抑制效果无明显差别(P>0.05);千金藤碱(2.5-10.0μg mL-1)可降低LoVo/5-FU细胞5-FU的IC50值(P<0.05-0.01),在此浓度范围内,IC50值降低的程度与剂量成正相关;LoVo/5-FU细胞中HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平明显高于LoVo细胞(P<0.05-0.01),10.0μg mL-1千金藤碱与5-FU联合处理后,LoVo/5-FU细胞中两个基因的表达水平明显降低(P<0.05-0.01)。结论:千金藤碱可抑制结肠癌细胞增殖,增加结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-FU的敏感性,原因可能与其抑制结肠癌细胞中HO-1和NQO1的表达水平有关。

千金藤碱抗炎免疫与抗肿瘤药理学研究进展

千金藤碱具有多种药理学功效,对千金藤碱抗炎免疫及抗肿瘤的药理学作用和机制研究进行总结综述,为其研究开发与临床应用提供参考依据。

左旋千金藤碱对大鼠旋转模型的作用

大鼠脑内单侧黑质注射6羟基多巴胺(6OHDA)后,受损侧纹状体DA及其代谢物二羟苯乙酸和高香草酸含量分别下降88.4%,81.0%和60.1%。5HT与对侧相比略有增加(+13%),5羟吲哚醋酸无显著差异,提示6OHDA选择性地损毁了单侧黑质—纹状体DA神经通路。皮下注射阿朴吗啡(APO)后能诱发损伤大鼠向健侧方向旋转。阿朴啡类生物碱(1-STP)(10mg/kg)能拮抗APO的上述旋转作用,增大剂量(15mg/kg)作用增强,呈剂量—效应依赖关系。结果提示1-STP具有突触后DA受体阻滞作用。

盐酸千金藤碱对人牙髓干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的:初步探究盐酸千金藤碱(CH)对人牙髓干细胞(DPSC)增殖和成骨分化能力的影响。方法:体外分离培养鉴定人DPSC,MTT法检测0.0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L CH处理24、48和72 h对DPSC增殖能力的影响,Western blot检测DPSC中骨钙素(OCN)和核心结合因子(RUNX2)的表达。结果:DPSC细胞为典型的间充质干细胞形态,表达间充质干细胞表面标记物CD44且有成骨分化能力。2.5和5.0μmol/L CH可促进DPSC的增殖且使DPSC中OCN及RUNX2蛋白的表达水平升高(P<0.05)。结论:CH可促进人DPSC的增殖和成骨分化的能力。

左旋千金藤碱的中枢抑制作用

左旋千金藤碱(l-STP)具有明显的中枢抑制作用,显著减少小鼠自发活动,对戊巴比妥钠有明显协同作用,增加小鼠对缺氧的耐受能力。l-STP还能对抗阿朴吗啡诱发的大鼠定向行为。实验观察未见僵住症状。结果提示,l-STP具有多巴胺受体阻断作用,并且可能为其镇静作用的机制之一。

盐酸千金藤碱对HepG2.2.15细胞HBX/NF-κB通路的影响

目的探讨盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)对Hep G2.2.15细胞HBX/NF-κB信号通路的影响。方法选用不同浓度的CH(2.5,5,10μmol/L)干预稳定表达野生型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的HepG2.2.15细胞后,采用RT-PCR和ELISA法分别检测细胞内X基因mRNA和X蛋白表达变化;采用AnnexinⅤ-FITC/PI法检测细胞的凋亡率,Western blot法检测细胞内NF-κB信号通路成员P65和IκBα蛋白表达。结果与未经CH处理的HepG2.2.15细胞(对照组)相比,CH各剂量组明显抑制细胞内X基因mRNA和X蛋白的表达(P<0.05)。CH干预细胞48 h能够浓度依赖性地诱导Hep G2.2.15细胞凋亡,2.5,5,10μmol/L CH处理细胞后,HepG2.2.15细胞平均凋亡率分别为(11.9±1.21)%,(19.8±2.32)%,(29.3±1.27)%。CH处理组细胞内IκBα蛋白的表达水平明显高于对照组,且P65蛋白的表达水平明显下调(P均<0.05)。结论 CH能够抑制HBX/NF-κB信号通路的活性,并具有促进HepG2.2.15细胞凋亡的作用。

千金藤碱治疗尘肺

目的 :观察千金藤碱治疗尘肺的疗效。方法 :82例尘肺病人 (煤工尘肺 39例 ,矽肺 31例 ,其他尘肺 12例 )应用千金藤碱 ,2 4 0mg·d- 1,po ,分 3次服 ,每周服 6d ,1a为一个疗程 ,共用 1～ 4疗程。结果 :临床及X线胸片评定有效率分别为 88%和85% ,对 0 +和I +I+尘肺优于Ⅲ +Ⅲ +尘肺 (P <0 .0 5)。不良反应轻微。结论 :千金藤碱治疗尘肺安全、有效。

盐酸千金藤碱逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药性的作用及其机制

目的研究盐酸千金藤碱(CH)对人乳腺上皮细胞癌耐药细胞株MCF-7/阿霉素(ADR)多药耐药性的体外逆转作用,并探讨其逆转机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CH对多药耐药肿瘤细胞MCF-7/ADR的耐药逆转活性;免疫组织化学法检测细胞内谷胱甘肽硫转移酶π(GST-π)的表达;通过对超螺旋PBR322 DNA的解旋能力检测拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的活性。结果 CH在无细胞毒浓度下具有逆转MCF-7/ADR细胞耐药性的作用,逆转倍数为13.5倍,但对敏感株MCF-7细胞的抗癌药物敏感性基本无影响。CH4μmol/L使MCF-7/ADR细胞中过度表达的GST-π的表达水平下降及DNA TopoⅡ的催化活性提高,但对敏感株MCF-7细胞无影响。结论 CH具有逆转多药耐药性的作用,其机制可能与降低GST-π的表达及提高DNA TopoⅡ的活性有关。

盐酸千金藤碱对鼻咽癌模型大鼠中IL-1β、IL-18、IL-12以及ICAM-1表达影响

目的:观察盐酸千金藤碱对鼻咽癌模型大鼠中IL-1β、IL-18、IL-12以及ICAM-1的表达影响。方法:将42只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、盐酸千金藤碱组各14只,正常对照组正常饲养,模型对照组以及盐酸千金藤碱组采用诱癌剂腋部皮下注射法以建立鼻咽癌的动物模型,给予诱癌剂二亚硝基哌嗪(DNP)15 mg/kg腋部皮下注射,每3 d注射1次,连续注射28次,同时给予促癌剂佛波醇酯(TPA)100 mg/kg,每周测量大鼠体质量以调整药物用量。盐酸千金藤碱组于模型建立后给予盐酸千金藤碱15 g·kg^(-1)·d^(-1)灌药,每日1次;其余两组给予蒸馏水灌药,剂量与使用频率和盐酸千金藤碱组相同至实验结束,各组均治疗3个月。比较各组大鼠情况、外周血和鼻腔冲洗液的IL-1β及IL-18、癌症组织中IL-12以及ICAM-1的表达情况。结果:实验过程中正常对照组无大鼠死亡,模型对照组大鼠8只死亡,死亡发生率为57.14%;盐酸千金藤碱组1只死亡,死亡发生率为7.14%。治疗后,与正常对照组相比,盐酸千金藤碱组、模型对照组白介素12平均灰度值较低(P<0.05),外周血和鼻腔冲洗液的白介素1β以及白介素18水平、细胞间黏附分子平均灰度值较高(P<0.05);与模型对照组相比,盐酸千金藤碱组白介素12平均灰度值较高(P<0.05),外周血和鼻腔冲洗液的白介素1β以及白介素18水平、细胞间黏附分子平均灰度值较低(P<0.05)。结论:盐酸千金藤碱具有良好的治疗鼻咽癌的效果,可能与下调癌症组织大鼠中ICAM-1的表达、外周血和鼻腔冲洗液的IL-1β及IL-18,上调IL-12表达有关,有望为临床治疗方面提供新的干预方法。

盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用。方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响。结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64μmol.L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49μmol.L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25μmol.L-1,TI值分别为2.93,2.41。结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用。

盐酸千金藤碱抑制肝癌肾脏、睾丸转移及其分子机制

目的通过裸鼠肝原位移植荧光人肝癌细胞,观察肝癌细胞肾脏、睾丸转移情况,并探讨盐酸千金藤碱抑制肝癌细胞转移及其分子机制。方法采用慢病毒转染构建稳定表达荧光素酶基因的人肝癌细胞SMCC-7721-Luc。BALB/c裸鼠皮下接种SMCC-7721-Luc细胞,待肿瘤长至100 mm3左右,取皮下瘤植入裸鼠肝脏包膜,建立裸鼠原位肝癌模型。裸鼠腹腔注射盐酸千金藤碱,用小动物活体成像系统观察肝原位肿瘤肾脏、睾丸转移情况。给药21 d后,解剖取肿瘤组织,Western blot检测相关蛋白表达,同时取肝脏、肾脏、睾丸等组织,用10%中性甲醛固定,进行病理分析。结果构建的SMCC-7721-Luc细胞能稳定表达Luc基因,裸鼠肝原位接种该细胞后产生较强、稳定的荧光。活体成像系统显示盐酸千金藤碱能抑制裸鼠原位肝癌向肾脏、睾丸转移,与其降低MMP-7和N-cadherin蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。结论盐酸千金藤碱通过调控MMP-7、N-cadherin和E-cadherin蛋白抑制原位肝癌向肾脏、睾丸转移。

盐酸千金藤碱对急性肝损伤小鼠保护作用的研究

目的:探讨盐酸千金藤碱(CH)对急性肝损伤小鼠的保护作用及其机制。方法:建立四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖(D-GalN)致急性肝损伤小鼠模型,设CH大、中、小剂量组,阳性对照组(阿拓莫兰),空白对照组和模型对照组。观察CH对小鼠血清转氨酶、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、肝组织氧化指标及肝脏病理学的影响。结果:CH可明显降低CCl4和D-GalN所致肝损伤小鼠的血清转氨酶活性,增强肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性,减少丙二醛(MDA)和NO的含量,降低NOS活性;并缩小肝脏坏死范围。结论:CH对CCl4和D-GalN所致肝损伤有良好的肝保护作用,其机制可能是提高SOD活性、清除自由基,降低NO含量,减少其对细胞和组织的损伤。

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。