HPLC法测定不同防风炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

目的建立防风不同炮制品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法并进行比较。方法采用高效液相色谱法(HPLC),使用Hitachi Lachrom-C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水溶液(40:60)作为流动相,设定检测波长为254 nm、柱温为30℃、流速为1.0 m L/min,进样量3μL。同时,采用快速水分测定仪测定不同炮制品的水分含量。结果升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在14.75~118.00μg/mL和24.00~192.00μg/mL范围内有良好的线性关系。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷精密度的相对标准偏差(RSD)分别为0.68%、1.13%,重现性的RSD分别为0.64%、1.74%,平均回收率分别为100.80%,95.65%。防风炮制后升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量均有不同程度的下降,虽然微波炮制炒防风的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量要低于传统炮制品,但是微波炮制品含量整体高于传统炮制品,炮制后水分含量明显降低,微波炮制品水分含量整体略高于传统炮制品。结论HPLC法快捷、简便、准确、重复性好,可用于防风不同炮制品的质量控制;防风的微波炮制品有效成分含量较高,水分含量略低。

Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法优化赪桐中类叶升麻苷纯化工艺及其稳定性分析

为优化赪桐中类叶升麻苷的纯化工艺,并分析其稳定性,试验对8种不同型号的大孔树脂进行吸附-解吸能力比较,筛选出最优的大孔树脂型号;采用Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法,考察上样液浓度、上样液流速、洗脱液浓度等因素水平,优化赪桐中类叶升麻苷的纯化工艺。通过高效液相测定纯化物在不同温度、光照、pH、抗氧化剂等环境条件下类叶升麻苷的含量。结果表明:赪桐中类叶升麻苷最佳纯化工艺条件为ADS-7型号大孔吸附树脂、上样液浓度9.0 mg/mL、上样液流速3.0 m L/min、洗脱液浓度58%,验证试验中的类叶升麻苷回收率可达到76.04%,与所建模型预测接近;稳定性试验表明,温度越高、光照时间越久、pH越高、类叶升麻苷的稳定性越差。同时,添加抗氧化剂可以明显增强其稳定性。故纯化后的类叶升麻苷应在低温、避光、酸性环境中贮藏和使用,且可通过添加不同种抗氧化剂延长其使用期限。采用Plackett-Burman结合Box-Behnken响应面法优化赪桐中类叶升麻苷纯化工艺稳定可行,可为后续抗奶牛乳房炎中草药型饲料添加剂产品的研发及产品稳定性使用提供理论依据。

类叶升麻苷大鼠安全性评价

目的通过单次给药和重复给药毒性试验,初步评价类叶升麻苷的安全性,为深入全面开展其安全性评价奠定了基础。方法单次给药毒性试验,SD大鼠随机分为溶媒对照组和给药组(5000 mg·kg^(-1)),经口单次给药,观察并记录14 d内大鼠一般临床症状、死亡情况、体重;对主要脏器进行肉眼观察。重复给药毒性试验,SD大鼠随机分为溶媒对照组,类叶升麻苷低(100 mg·kg^(-1))、中(500 mg·kg^(-1))、高(2000 mg·kg^(-1))剂量组,每组30只,连续给药28 d,恢复28 d,观察并检测一般临床症状、体重、摄食量、尿常规等相关指标。结果单次给药毒性试验中各动物无死亡、无异常、与溶媒对照组相比,体重差异无统计学意义(P>0.05),脏器组织无肉眼可见病变。重复给药毒性试验中,与溶媒对照组相比,大鼠体重、摄食量、凝血指标、脏器湿重及系数差异无统计学意义(P>0.05);对血液学、肝功能和肾功能无毒理学影响,高剂量组脏器组织未见明显给药相关组织病理学改变;高剂量组雌性动物尿常规中出现白细胞、酮体阳性检出率偏高(P<0.05或P<0.01),存在可逆性。结论单次给药毒性试验中,类叶升麻苷单次给药最大耐受剂量(MTD)>5000 mg·kg^(-1),重复给药毒性试验中,类叶升麻苷无明显毒性反应剂量(NOAEL)为500 mg·kg^(-1)。

类叶升麻苷对东莨菪碱所致记忆获得性障碍的改善作用

目的 观察类叶升麻苷对小鼠学习记忆能力的影响。方法 用东莨菪碱致小鼠记忆获得性障碍模型 ,以行为学实验 (跳台法、水迷路法 )、大脑皮层和纹状体乙酰胆碱酯酶活性和M受体的最大结合力为指标观察类叶升麻苷的作用。结果 在东莨菪碱致小鼠记忆障碍模型中 ,类叶升麻苷可延长跳台实验的平台停留期 ,并显著减少错误次数 ;在水迷路实验中可提高正确反应百分率 ;并能拮抗东莨菪碱所引起的大脑皮层乙酰胆碱酯酶的增高及皮层、纹状体M受体最大结合力的降低。结论 类叶升麻苷对东莨菪碱所引起的小鼠学习记忆能力障碍有改善作用 。

高速逆流色谱分离纯化防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷

建立了高速逆流色谱分离制备防风中有效成分升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的方法。防风根的粉末经甲醇浸泡提取和减压蒸馏,得粗提浸膏。以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶7∶9为溶剂,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0mL/min。从316mg防风粗提物中一步分离得到13.9mg升麻素苷和25mg5-O-甲基维斯阿米醇苷,纯度分别为98.1%和99.2%。采用ESI-MS,1H NMR和13C NMR对目标化合物的结构进行了鉴定。

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法:建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法,将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组,并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用,用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果:升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖,与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50,100,200 mg.L-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50,100,200 mg.L-1)均使G1/G0期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论:升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。

升麻苷H-1对脑缺血大鼠纹状体氨基酸类神经递质含量的影响

目的:研究脑缺血大鼠脑纹状体区域细胞外液中氨基酸类神经递质的表达变化,以探讨升麻苷H-1神经保护作用的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组。用线栓法造成右侧大脑中动脉闭塞(MCAO),建立局灶脑缺血模型,假手术组和脑缺血组分别给予生理盐水腹腔注射,升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,每天1次,连续7 d。采用脑微透析技术在大鼠脑纹状体区域内进行微透析活体采样,将微透析液注入高效液相-电化学检测器,检测样品中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组的兴奋性氨基酸Glu和Asp在脑缺血后2 h浓度升高(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h显著降低(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h没有显著降低(P>0.05)。与假手术组相比,脑缺血组的抑制性氨基酸神经递质GABA和Gly在脑缺血后3 h浓度降低(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h显著升高(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,GABA和Gly在脑缺血后3 h没有显著升高。结论:升麻苷H-1可以抑制脑缺血时兴奋性氨基酸的过度释放,并增加抑制性氨基酸的浓度。升麻苷H-1不仅能透过血脑屏障,同时可调节脑缺血兴奋性氨基酸神经递质的功能紊乱,可能对缺血脑组织神经元有一定的保护作用。

类叶升麻苷对肾阳虚小鼠补肾壮阳作用的研究

腹腔注射氢化可的松建立小鼠肾阳虚模型,类叶升麻苷[40、20 mg·(kg·d)^(-1)]连续灌胃14 d。测定阴茎勃起潜伏期、性器官脏器系数、精子数量,光学显微镜观察睾丸形态结构。研究管花肉苁蓉化学成分类叶升麻苷对肾阳虚小鼠的补肾壮阳作用。结果表明:与模型组比较,类叶升麻苷(40 mg·kg^(-1))可极显著缩短阴茎勃起潜伏期(P<0.01),增加精子数量(P<0.01),显著提高性器官脏器系数,改善睾丸形态结构。低剂量类叶升麻苷亦可缩短勃起潜伏期(P<0.01),增加精于数量(P<0.05),提高性器官脏器系数(P<0.05),改善睾丸形态结构。证明类叶升麻苷对肾阳虚小鼠具有补肾壮阳作用。

HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(5μm,150 mm×4.6 mm id)柱,甲醇-水流动相体系梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.7 ml/min,柱温25℃,进样量5μl。结果成功建立了防风中4种主要成分的HPLC含量测定方法,且方法学考察结果良好。结论该方法简便可行,定量准确,可用于防风中4种主要成分的质量控制。

类叶升麻苷在大鼠体内的药代动力学及组织分布研究

目的研究类叶升麻苷(acteoside)在大鼠体内的药代动力学及组织分布特征。方法大鼠灌胃给予300 mg·kg-1的类叶升麻苷后,采用HPLC检测各时间点血浆和组织器官药物浓度,并用DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果大鼠灌胃给药后,药时曲线符合二室开放模型,主要药动参数分布半衰期T12α、消除半衰期T12β、曲线下面积AUC、血浆清除率CL分别为:2.37 h、2.916 h、1.031μg·L-1·h、306.241 L·h-1。结论类叶升麻苷体内吸收符合一级动力学,主要分布在肠、肺脏、脾脏组织中,在所研究的组织中未见特殊蓄积现象。

HPLC测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量

目的:建立测定辛夷鼻炎丸(辛夷、薄荷、紫苏叶、甘草等)中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的高效液相色谱方法。方法:以Sunfire C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相采用甲醇(A)-水(B)梯度洗脱:0～20 min,72%B;20～50 min,72%～50%B。升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的检测波长为254 nm,流速为0.9 mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL。结果:用梯度洗脱得到了较好的分离效果,升麻素苷在0.020 16～0.806 4μg之间线性关系良好,r=0.999 9;5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.020 96～0.838 4μg之间线性关系良好,r=0.999 9。结论:该方法专属性强,准确度高,可用于辛夷鼻炎丸中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定。

HPLC测定胃肠康胶囊中芍药苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷及升麻苷的含量

目的：建立胃肠康胶囊（白芍、木香、防风等）的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法在同一色谱条件（色谱柱：phenomenex Luna 5μ C18（2）100A，流动相：乙腈-水梯度洗脱，流速：0．8mL／min，柱温：30℃）下对制剂中芍药苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、橙皮苷、升麻苷进行定量测定。结果：木香烃内酯在0．102～2．04μg范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率101.43％，RSD=0．87％；去氢木香内酯在0．0991～1．982μg范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率100．46％，RSD=1．34％；芍药苷在0．15～3．0μg范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率100．14％，RSD=1．19％；橙皮苷在0．948～1．896μg范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率101．09％，RSD=1．72％；升麻苷在0．0932～1．864μg范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率99．98％，RSD=1．14％。结论：所建立的方法可在同一色谱条件下检测出5个成分，可用于该制剂的质量控制。

HPLC测定五虎散中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量

由当归、红花、防风、天南星、白芷配伍而成的五虎散是一种具有活血散瘀,消肿止痛等功效的中成药,用于跌打损伤,瘀血肿痛的治疗[1].

类叶升麻苷对MPTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用

目的研究类叶升麻苷在MPTP诱导的C57小鼠的帕金森病(PD)模型中的神经保护作用及机制。方法通过自主活动实验和滚筒实验研究动物的行为表现,通过高效液相电化学检测方法观察脑纹状体多巴胺的变化,通过脑黑质酪氨酸羟化酶(tyroxinehydroxylase,TH)免疫组化染色观察多巴胺能神经元的损伤程度。并对黑质纹状体进行α-突触核蛋白(α-synuclein)的免疫印迹分析以探讨药物作用机制。结果①经MPTP诱导的C57小鼠,其自主活动次数、滚筒运动潜伏期均低于对照组(P<0·01);纹状体多巴胺含量明显降低(P<0·01);多巴胺能神经元数量明显减少;黑质纹状体α-synuclein蛋白水平下降。②经类叶升麻苷(10、30mg·kg-1)预处理后能明显改善MPTP诱导的C57小鼠的行为学表现,增加脑内多巴胺递质的含量,增加多巴胺能神经元的数量,增加黑质纹状体α-synuclein蛋白水平。结论类叶升麻苷具有神经保护作用,能对抗MPTP诱导的C57小鼠PD模型中的神经损伤。其机制可能与上调α-synuclein蛋白水平有关。

兴安升麻总苷抗肿瘤药效研究

目的观察升麻总苷对小鼠移植性肿瘤和人肿瘤细胞裸鼠移植瘤的体内抗肿瘤作用,以及体外对人肿瘤细胞株的抑瘤活性,并对其抑瘤机制进行初步探讨。方法MTT法检测体外升麻总苷对人肿瘤细胞的增殖抑制作用;体内实验观察其对小鼠S180和裸鼠体内移植人肺腺癌A549的抑制作用;同时采用流式细胞仪和肿瘤病理切片对接种的A549肿瘤细胞凋亡进行观察。结果升麻总苷对A549、HepG2、HL60、Eca-109、MDA-MB231肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为20.3、27.1、21.2、23.4和32.7μg/mL。小鼠口服升麻总苷100mg/kg和200mg/kg可明显抑制S180移植瘤(抑瘤率分别为42.8%和54.6%)和裸鼠移植人肺腺癌A549的生长(T/C值分别为58.1%和52.2%),肿瘤组织病理切片和流式细胞仪对A549肿瘤细胞凋亡的检测显示,升麻提取物可诱导体内肿瘤细胞凋亡。结论升麻体内体外均具有抗肿瘤活性,其体内抑制肿瘤生长可能与诱导细胞凋亡相关。

中药升麻的化学成分 Ⅲ.升麻苷C和升麻苷D的化学结构

从中药升麻的地道药材之一兴安升麻[Cimicifuga dahurica(Turcz)Maxim.l的根茎中分得两个新的环菠萝蜜烷型三萜双糖苷,分别命名为升麻苷C(cimiside C,l)和升麻苷D(cimiside D,2).它们的结构经IR,MS,~1H和^(13)C NMR,~1H-~1H COSY,~1H-~1H TOCSY,^(13)C—~1H COSY,^(13)C—~1H COLOC及DEPT测定,确定为(23R,24R)-24-异乙酰氧基-shengmanol—3—O—β—D—吡喃木糖—15—O—β—D—吡哺葡萄糖苷和(23R,24R)-24-异乙酰氧基-shengmanol—3—O—β—D—吡喃来苏糖—15—O—β—D—吡喃葡萄糖苷.

反相高效液相色谱法测定升麻药材中升麻苷H-1的含量

建立升麻药材中升麻苷H-1含量测定的反相高效液相色谱分析方法。使用H&E XP ODS-A色谱柱(4.6 mm×250 mm5,μm),流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.4),流速为1 mL/min,柱温为26℃,检测波长203nm。测得升麻苷H-1线性范围为0.95～28.5μg/mL(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.35%(RSD=2.79%),不同来源批次升麻药材含量测定结果表明,升麻药材中升麻苷H-1含量为0.53%～1.09%,综合分析批样品含量测定结果,建议升麻药材中含升麻苷H-1应不低于0.4%。本方法简便、准确、重复性好、专属性强,可作为升麻药材质量控制方法。

类叶升麻苷抗鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤机制的研究

目的研究类叶升麻苷抗鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞损伤,对帕金森病相关蛋白Parkin、α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)表达的影响,探讨类叶升麻苷抗细胞损伤的分子机制。方法化学比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测Parkin、α-Syn的表达,免疫荧光法检测SH-SY5Y细胞α-Syn分布。结果①类叶升麻苷(10,20或40mg.L-1)可明显降低鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放;②0.5μmol.L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48h能引起Parkin蛋白的明显降解及α-Syn蛋白二聚体增加;③预先用类叶升麻苷(10,20或40mg.L-1)处理细胞,能够有效减少鱼藤酮诱导的Parkin蛋白的降解,呈浓度依赖性;并能够抑制鱼藤酮诱导的α-Syn蛋白二聚体增加及α-Syn阳性细胞数增加。结论类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用,其作用机制可能与减少Parkin蛋白的降解和抑制α-Syn蛋白的二聚体形成有关。

类叶升麻苷对大鼠原代肝细胞免疫性肝损伤的保护作用

目的观察类叶升麻苷对大鼠原代肝细胞免疫性肝损伤的保护作用。方法采用卡介苗(BCG)联合脂多糖(LPS)建立大鼠原代肝细胞免疫性损伤模型,测定并比较各组肝细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性和一氧化氮(NO)在不同培养时间点(3,6,12和24h)的含量。结果与模型组相比较,类叶升麻苷在不同时间点均能明显降低ALT、AST和NO水平(P<0.01),且呈剂量依赖关系。结论类叶升麻苷对卡介苗联合脂多糖诱导的大鼠原代肝细胞免疫性肝损伤具有保护作用。

类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的探讨类叶升麻苷对鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,以荧光染料Hoechst33342染色分析细胞核的形态学变化,用流式细胞仪定量分析细胞凋亡峰,以2,′7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)为标记探针检测细胞内活性氧的产生。结果①0.5μmol.L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48 h能引起细胞存活率的显著下降;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达47.39%;大部分细胞胞体皱缩,突起缩短消失或断裂;染色质皱缩、浓缩、断裂及形成凋亡小体;细胞内活性氧水平上升。②预先用盐生肉苁蓉提取物类叶升麻苷(10,20或40 mg.L-1)处理细胞6 h,可提高细胞存活率;明显改善鱼藤酮引起的细胞形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25.87%,23.97%,10.45%;以DCFH-DA为标记探针检测到20 mg.L-1类叶升麻苷可明显抑制鱼藤酮引起的细胞内活性氧产生。结论类叶升麻苷能抑制鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平有关。