靶向性半乳糖化聚乙二醇-聚乙烯亚胺纳米载体介导siRNA质粒对肝癌细胞BEL-7402的转染效率检测

目的检测靶向性半乳糖化聚乙二醇-聚乙烯亚胺(Gal-PEG-PEI)纳米载体介导siRNA质粒(psiRNA)对肝癌细胞BEL-7402的转染效率。方法纳米粒径仪测定Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米粒的粒径和zeta电位;以Gal-PEG-PEI/psiRNA为研究组,以聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEI)/psiRNA、Lipofectamine2000和裸psiRNA转染为对照组,转染BEL-7402细胞,48h后用流式细胞仪测定各组的转染效率。转染前加入1mg半乳糖观察各组的半乳糖竞争拮抗结果。结果 Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径随氨基与磷酸基比例(N/P)的增大而减小,最小粒径为81.1nm;Gal-PEG-PEI载体的转染效率为(24.34±2.55)%,与Lipofectamine2000组的转染效率(22.88±1.22)%比较差别无统计学意义(P>0.05),但明显高于PEG-PEI的转染效率(12.91±0.36)%及裸psiRNA的转染效率(0.73±0.08)%,差别有统计学意义(P<0.01);加入竞争拮抗剂半乳糖后Gal-PEG-PEI介导的转染效率由(24.34±2.55)%下降至(5.85±1.83)%,差别有统计学意义(P<0.01)。结论 Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米粒对肝癌细胞BEL-7402有较高的转染效率,具有良好的肝细胞靶向性。

半乳糖化壳聚糖-低分子聚乙烯亚胺/DNA复合物的肝靶向性研究(英文)

目的：研究半乳糖化壳聚糖-低分子聚乙烯亚胺（galactosylated chitosan-graft-polyethyleneimine,GC-PEI）/DNA复合物在体内外的肝靶向性。方法：GC-PEI与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescentprotein,EGFP）质粒（pEGFP-Cl）在0.01 mol/L PBS,150 mmol/L NaCl,5%葡萄糖溶液中自组装成3种不同溶媒介导的GC-PEI/DNA复合物,检测复合物粒径大小与形态,Zeta电位以及结合和保护DNA的能力;并进一步测定GC-PEI聚合物的毒性,研究复合物的肝靶向转染效率。结果：在GC-PEI与DNA质量比为1∶1-2.5∶1时,GC-PEI聚合物能有效地结合和保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解。复合物粒子呈规则的球形,有明显的核壳结构。GC-PEI聚合物在检测细胞中未显示出明显毒性;动物体内急性毒性实验显示：通过尾静脉注射50-300μg的GC-PEI聚合物入小鼠后,实验小鼠2周内无急性毒性反应和死亡发生。荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEI/DNA复合物在肝细胞系（QSG7701/core,L02）中的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）表达明显高于非肝细胞系（SGC-7901,HBE）细胞。体内实验表明转染48 h后,小鼠肝组织在荧光显微镜下可以检测到明显的绿色荧光,而其他主要脏器未见明显荧光。结论：GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因或DNA导入肝细胞,具有良好的肝靶向性。

Gal-PEG-PEI/psiRNA肝靶向性纳米基因载体对人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率检测

目的:检测半乳糖-聚乙二醇-聚乙烯亚胺/小干扰RNA质粒(Gal-PEG-PEI/psiRNA)肝靶向性纳米基因载体对人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率。方法:合成Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物,采用纳米粒径仪测定复合物的粒径和zeta电位,用不同Gal-PEG-PEI氨基与psiRNA磷酸基比例(N/P)的Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物转染L-02细胞,以Lipofectamine2000、非靶向性载体PEG-PEI/psiRNA和裸psiRNA转染为对照组,48 h后用流式细胞仪测定转染效率。转染前加入1 mg半乳糖观察其半乳糖竞争拮抗结果。结果:Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米复合物的粒径随N/P增大而减小,N/P≥1/15时达最小粒径,约为80 nm。Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体的转染率为(20.4±0.9)%,明显高于非肝靶向性载体PEG-PEI/psiRNA(P<0.01)及裸psiRNA(P<0.01),但低于Lipofectamine 2000(P<0.05);加入竞争性拮抗剂半乳糖后Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体的转染率下降至(4.8±2.1)%,PEG-PEI/psiRNA介导的转染率则不受影响。结论:Gal-PEG-PEI/psiRNA纳米基因载体可明显提高人胎肝细胞系L-02细胞的转染效率,且具有良好的肝细胞靶向性。

猪红细胞的体外双修饰及异源输血试验

为探讨表面抗原修饰后猪红细胞异源输血的可行性,采用α-半乳糖苷酶和单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)对猪红细胞进行双修饰后,体外检测红细胞的渗透脆性,并进行配血试验和犬输血试验。观察输血前后犬的各项临床指标变化,并对其进行血常规和尿常规的连续检测分析。结果表明,修饰红细胞渗透脆性降低,体外配血未出现凝集反应。输血后亦未引起明显的临床异常反应,血常规及尿常规正常。说明猪红细胞体外双修饰后进行首次异源输血具有可行性,可作为动物通用血源用于临床。