α-半乳糖基神经酰胺静脉注射对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的通过采用静脉注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer),观察其对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞(iNKT)频率及亚群的影响。方法研究时间2021年11月至2022年2月,选取C57BL/6J健康小鼠,采用随机数字表法分为观察组和对照组,观察组静脉注射α-GalCer,对照组静脉注射生理盐水,在注射后的第2、4、6、8、10天取小鼠肝脏,采用流式细胞术检测小鼠肝脏的iNKT细胞及亚群变化情况;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血血清中白细胞介素-4(IL-4),干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-17A(IL-17A)的表达水平。结果与对照组相比,静脉注射α-GalCer可引起肝脏iNKT细胞频率及亚群频率变化,且差异有统计学意义(P<0.05)。观察组肝脏iNKT细胞频率明显升高,但随时间呈逐渐降低趋势,自第6天恢复至与正常水平相当[观察组第2、4、6、8、10天分别为(20.87±2.15)%、(5.61±0.51)%、(2.65±0.26)%、(2.62±0.64)%、(2.51±0.11)%,对照组分别为(2.72±0.19)%、(2.72±0.19)%、(2.93±0.24)%、(3.06±0.45)%、(3.14±0.35)%];注射α-GalCer后,iNKT1亚群频率低于对照组,于第10天恢复至正常水平[观察组第2、4、6、8、10天分别为(1.04±0.37)%、(0.48±0.12)%、(1.99±1.04)%、(0.60±0.11)%、(3.25±0.53)%,对照组分别为(3.68±1.02)%、(2.74±0.21)%、(2.81±0.33)%、(2.93±0.29)%、(3.12±0.11)%];iNKT2亚群频率高于对照组,后逐渐降低[观察组第2、4、6、8、10天分别为(75.13±3.48)%、(33.83±9.08)%、(17.20±5.37)%、(12.00±1.99)%、(6.26±1.28)%,对照组分别为(38.03±1.70)%、(40.13±3.20)%、(40.16±3.15)%、(38.03±1.70)%、(36.37±1.18)%];iNKT1亚群频率总体上低于iNKT2亚群;iNKT17亚群频率低于对照组,第4天亚群频率最高,后又降至正常水平以下;与对照组相比,血清中IL-4水平在注射第2天无明显变化(P>0.05),注射后第6天,IL-4水平明显降低(P<0.05);IFN-γ水平自注射α-GalCer后明显升高,第6天又降低(P<0.05),IL-17A水平均低于正常水平(P<0.05)。结论静脉注射α-GalCer可诱导小鼠肝脏iNKT细胞的增殖,影响其亚群的分化。

腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的探讨腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞(iNKT)、细胞亚群及外周血细胞因子的影响,从而为治疗相关肺部疾病提供基础研究数据。方法60只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为α-GalCer干预组和正常对照组,每组30只,选择不同时间点观察干预组与对照组小鼠肺iNKT细胞、亚群及外周血细胞因子的变化。结果组间比较发现,与对照组(3.49±0.25)%相比,腹腔注射α-GalCer可引起肺脏iNKT细胞频率及亚群的变化,差异有统计学意义(P<0.05)。α-GalCer干预组肺iNKT细胞频率前2 d(6.56±0.05)%明显升高而后[d6(2.56±0.08)%、d8(2.64±0.14)%、d10(2.37±0.24)%]降低(P<0.05)。iNKT 1细胞频率低于对照组且呈降低的趋势(P<0.05)。iNKT 2细胞频率高于对照组在第4天肺部iNKT2细胞频率达到峰值,随后降低(P<0.05)。iNKT 17细胞频率略高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),与第2天相比,第4、6、8、10天iNKT17细胞频率均显著升高(P<0.05)。组间比较发现,干预组与对照组外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,α-GalCer干预组在不同时间点IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,与第2天相比,IFN-γ、IL-4水平于第6天、第8天均降低(P<0.05);IL-17A水平于第6天降低(P<0.05)。α-GalCer干预组的IFN-γ水平与对照组相比均有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);除第8天外,α-GalCer干预组的IL-4水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);第2天、第8天α-GalCer干预组的IL-17A水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔注射α-GalCer对小鼠肺组织iNKT细胞和亚群有不同的激活效应;iNKT细胞激活后,会由脉管系统迁入间质;腹腔注射α-GalCer可诱导血清细胞因子的变化,提示α-GalCer注射可影响机体免疫功能。

骨髓基质细胞和神经干细胞体外共培养的实验研究

目的:研究神经干细胞(NSCs)和骨髓基质细胞(MSCs)共培养时对各自分化的影响。方法:将2种细胞按接种数目分为5组,A组为NSCs∶MSCs=105∶0;B组为NSCs∶MSCs=105∶104;C组为NSCs∶MSCs=105∶105;D组为NSCs∶MSCs=104∶105;E组为NSCs∶MSCs=0∶105。培养7d后分别进行5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)、半乳糖神经酰胺(GalC)免疫细胞化学双染色。结果:随着MSCs比例的提高,各组BrdU和NSE或MAP2的双阳性细胞表达差异有统计学意义(P<0.05),且B、C及D组分别与A组比较差异亦有统计学意义(均P<0.01);随NSCs比例的增高,B、C、D组NSE、MAP2和GFAP双阳性MSCs表达逐渐增高(均P<0.01)。结论:MSCs可以促进NSCs分化为神经元,而且在NSCs诱导下部分MSCs可以转化为神经元和星形细胞。

淋巴瘤患者外周血TCRVα24^+Vβ11^+自然杀伤T细胞体外活化特性研究

目的:研究淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T(NKT)细胞的数量以及体外活化后的功能状态,与正常人外周血NKT细胞的数量及功能状态进行比较。方法:制备30例淋巴瘤患者和30例年龄及性别匹配的正常对照外周血单个核细胞(PBMNCs),以流式细胞术(FACS)检测TCRVα24+Vβ11+NKT细胞数量,以α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)及白细胞介素-2(IL-2)从PBMNCs中扩增活化NKT细胞,采用细胞内细胞因子流式细胞术检测手段,测定NKT细胞中胞内白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)阳性细胞的比例。结果:淋巴瘤患者与正常对照PBMNCs中TCRVα24+Vβ11+NKT细胞的细胞比率分别为0.17%±0.10%、0.28%±0.18%(P<0.05)。PBMNCs培养体系中加入α-Galcer及IL-2,将NKT细胞扩增活化7d后,淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞的扩增倍数分别为101.37±44.61、129.66±56.31(P<0.05)。扩增活化后,淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞中胞内细胞因子IFN-γ阳性细胞的比例分别为41.96%±15.06%、52.48%±18.85%(P<0.05);TNF-α阳性细胞的比例分别为46.30%±16.03%、71.37%±17.28%(P<0.05);IL-4阳性细胞的比例分别为36.19%±11.74%、33.12%±12.95%(P>0.05)。不同病理分型及分期的淋巴瘤患者之间上述各指标无显著差异。结论:淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+NKT细胞数量较正常对照明显减少,经α-Galcer扩增活化后扩增倍数较正常对照降低,分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α的功能较正常降低,此数量及功能的降低与淋巴瘤的分型及分期无关。但其仍保持有对α-Galcer刺激后的扩增活化反应能力。