国际儿科学杂志儿科学报·增刊——人类N-乙酰半乳糖胺4-硫酸酯酶重组体在黏多糖病Ⅵ型（马-拉二综合征）患者替代疗法中的药物代谢动力学模式：一项Ⅰ／Ⅱ期研究

目的：黏多糖病Ⅵ型（马-拉二综合征）是由于N-乙酰半乳糖胺4-硫酸酯酶（ASB）缺乏引起的溶酶体贮积病。人类ASB重组体酶（rhASB）替代疗法在随机、双盲、双剂量【0．2mg／（kg·周）、1．0mg／（kg·周）、Ⅰ／Ⅱ期研究（n=7）】后，继续进行开放标记的单剂量[1．0mg／（kg·周）】拓展研究。作者报道了小ASB的药物代谢动力学模式和对抗体产生的影响。方法：在用药后1周、2周、12周、24周、83周、84周和96周，分别进行药物代谢动力学分析。按逐渐增量的模式持续静脉给药4h以上。测定血浆ASB和rhASB抗体浓度以及尿液中氨基葡聚糖的浓度。结果：高剂量组的血浆浓度一时间曲线下面积（AUC0-t）从1—2周开始增加，到12周和24周时保持不变。高、低剂量组之间的平均AUC0-t存在很大差异。83周、84周和96周时的药物代谢动力学结果与24周时相似。6例患者产生了rhASB抗体。1例患者rhASB和ASB抗体水平都很高，另1例患者rhAsB抗体水平很高，ASB浓度却难以检出。

代谢标记小分子探针6-炔基-2-乙酰氨基半乳糖的合成

以乙酰氨基半乳糖为起始原料,经过叔丁基二甲基硅基对糖环的6位选择性保护,随后将1,3,4进行甲氧甲基保护,选择性脱除6位保护基,经Dess-Martin氧化、Bestmann′s试剂和酸性条件下去保护后得到目标化合物,并通过单晶衍射确定了中间体7的结构;本文为6-炔基-2-乙酰氨基半乳糖的合成提供了有效的制备方法,为后续相关生物学研究提供了基础。

N-乙酰半乳糖胺修饰的肝靶向香豆素-6脂质体制备及评价

目的:本研究采用酶促法构建N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine,Gal NAc)修饰的脂质体作为荧光标记物-香豆素-6的载体,对其修饰的脂质体理化性质进行评价。方法:采用酶催化法偶联合成Gal NAc-C8-Chol,利用MS,NMR对其结构进行表征,并以此作为导向性材料,采用薄膜分散-挤出法制备载香豆素-6的Gal NAc修饰肝靶向脂质体(NGAL-LP),并对脂质体的包封率、粒径、Zeta电位、体外释放度及RCA120体外结合效率等性质进行了考察。结果:合成的Gal NAc-C8-Chol经MS,NMR鉴定为目标产物。与普通香豆素-6脂质体(LP)相比,本研究所制备的主动肝靶向脂质体(NGAL-LP)的粒径、Zeta电位、包封率、体外释放等理化性质无显著差异,包封率≥98%,平均粒径为(86.74±1.7)nm,平均Zeta电位为(-51.47±0.9)m V。体外释放结果表明,36 h内香豆素-6脂质体在PBS和血浆中的累积释放率<8%。RCA120凝集实验表明,只有Gal NAc-C8-Chol修饰的脂质体可经RCA120诱导产生凝集效应。结论:采用酶促法成功构建了Gal NAc修饰的香豆素-6肝靶向脂质体,以期望显著提高体内肝肿瘤的靶向治疗效果。

子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中多肽N-乙酰半乳糖胺转移酶-3和N-乙酰半乳糖胺转移酶-6的表达水平及临床意义

目的探讨子宫内膜异位症(EMS)患者子宫内膜组织中多肽N-乙酰半乳糖胺转移酶-3 (Gal NAc-T3)和N-乙酰半乳糖胺转移酶-6 (Gal NAc-T6)的表达水平及临床意义,为临床治疗提供参考依据。方法选择2016年1月-2018年1月在十堰市妇幼保健院进行手术且术后病理证实为EMS的58例患者,保留患者异位内膜和在位内膜组织,同时保留同时期进行腹腔镜手术且术后病理证实子宫内膜正常的35例患者正常内膜组织作为对照组。分别检测异位内膜组织、在位内膜组织及正常内膜组织中Gal NAc-T3、Gal NAc-T6 m RNA和蛋白表达水平,分析EMS不同分期患者异位内膜中Gal NAc-T3、Gal NAc-T6表达水平及其相关性。结果异位内膜组织中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6 m RNA相对表达量显著低于在位内膜组织和正常内膜组织,差异有统计学意义(P<0. 05);异位内膜组织中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6蛋白表达水平显著低于在位内膜组织,差异有统计学意义(P<0. 05),在位内膜组织中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6蛋白表达水平显著低于正常内膜组织,差异有统计学意义(P<0. 05);Ⅰ～Ⅱ期EMS患者异位内膜组织中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6 m RNA和蛋白表达水平均显著高于Ⅲ～Ⅳ期EMS患者(P<0. 05);EMD患者异位内膜组织中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6表达水平呈显著正相关关系(r=0. 662,P=0. 003)。结论 EMS患者异位子宫内膜中Gal NAc-T3和Gal NAc-T6表达水平显著降低,且呈显著正相关,可能与病情恶化有关。

Morquio A综合征的诊断研究——Ⅰ.荧光底物的首次合成及应用

本文报道首次合成了用于检测溶酶体半乳糖-G-硫酸酯酶(Gal-6S)活性的荧光底物,简化了Morquio A综合征的诊断和产前诊断程序。首次应用这一方法进行疾病诊断获得了成功。

GALNS蛋白在肝细胞癌中的临床意义及体外生物学功能

目的 探讨N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸盐硫酸酯酶(N-acetylgalactosamine-6-sulfatase, GALNS)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的临床意义及体外生物学功能。方法 采用回顾性队列研究,对2008年1月至2014年12月间在陆军军医大学第一附属医院收治的72例肝癌患者的肿瘤组织与癌旁组织,根据免疫组织化学染色(immunohistochemical staining, IHC)结果和临床病理资料,分析GALNS在肝细胞癌中的临床意义;通过细胞迁移及增殖实验检测GALNS在肝癌细胞中的体外生物学功能。观察指标:(1)肝癌组织和癌旁组织的GALNS表达情况以及其与临床病理特征的关系;(2)GALNS对肝癌患者生存分析及危险因素分析;(3)下调GALNS对肝癌细胞增殖与迁移的影响。结果 (1)肝癌组织中GALNS蛋白高表达和低表达分别为32例和40例,GALNS高表达与肿瘤长径、TNM分期、肝内转移有关,差异均有统计学意义(χ^(2)=20.649,14.849,5.667,P<0.05);(2)收集陆军军医大学第一附属医院2008年至2014年间的72例患者,GALNS蛋白低表达和高表达肝癌患者,术后1、3、5年生存率分别为87.50%、42.50%、40.00%和37.50%、12.50%、3.13%。GALNS低表达组的生存率优于高表达组,两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=9.268,P<0.05);(3)GALNS(HR=2.502,95%CI:1.369~4.572,P=0.003)、远处转移(HR=1.908,95%CI:1.018~3.573,P=0.044)、血管侵犯(HR=2.361,95%CI:1.267~4.398,P=0.007)和病理分期(HR=2.223,95%CI:1.185~4.171,P=0.013)是肝细胞癌的独立危险因素;(4)下调GALNS可显著抑制肝癌细胞增殖与转移(P<0.05)。结论 GALNS在肝癌组织中高表达,是影响肝癌患者预后的独立危险因素,下调GALNS可抑制肝癌细胞的增殖与迁移。

罕见黏多糖贮积症ⅣA型致病基因GALNS突变谱和骨骼表型

目的分析罕见黏多糖贮积症ⅣA型(mucopolysaccharidosis typeⅣA,MPSⅣA)家系患者的临床特点,行致病基因突变研究,探讨MPSⅣA患者骨骼表型与基因突变谱的特点。方法纳入以步态异常、骨骼畸形为主要表现的3个家系4例患者,评估患者临床表现、骨转换生化指标、骨密度、骨影像学及MPS相关酶学指标。采用全外显子测序技术检测致病基因突变。复习文献,总结我国大样本MPSⅣA患者表型及基因型特点。结果MPSⅣA型主要表型包括身材矮小(74.0%)、关节松弛(53.0%)、鸡胸(39.0%)、漏斗胸(36.0%)、膝内翻/外翻畸形(17.0%)。影像学以椎体扁平及前端鸟嘴样突出(51.0%)、脊柱后凸(30.0%)、脊柱侧弯(29.0%)、肋骨飘带征(28.0%)、股骨头变形(10.0%)为主要特点。75.5%患者有尿黏多糖定性阳性,90.7%患者血N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(N acetylgalactosamine-6-sulfatase,GALNS)活性降低。本研究首次检出GALNS基因的5种新突变(p.Y190C、p.E192G、p.R259Y、p.A400P、c.898+2T>A),影响GALNS蛋白的折叠、分子间相互作用及合成,致GALNS合成减少,使得多组织中糖胺聚糖堆积。我国大样本MPSⅣA患者GALNS基因以错义及无义突变最常见,其中c.953T>G、c.706C>G、c.374C>T、c.1097T>C为高频突变。结论MPSⅣA是GALNS突变引起的罕见常染色体隐性遗传性溶酶体病。中国MPSⅣA患者以身材矮小、多部位骨骼畸形为主要表型,GALNS基因以错义及无义突变最常见,本研究首次发现GALNS的5种新突变,扩展了对MPSⅣA表型和致病基因突变谱的认识。

黏多糖贮积症ⅣA型患者GALNS基因突变的研究进展

黏多糖贮积症ⅣA型是一种由N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)缺乏引起的常染色体隐性遗传病。基因突变导致GALNS缺陷使6-硫酸软骨素和硫酸角蛋白两种黏多糖在溶酶体内聚集,引起溶酶体功能障碍并破坏细胞功能。对疾病的早期准确诊断是优化患者管理的关键,可以显著提高患者生活质量,延长生存时间。然而,黏多糖贮积症ⅣA型患者的临床特征与其他疾病重叠,GALNS突变多种多样,且临床表型各有不同,因此黏多糖贮积症ⅣA型患者的早期诊断十分困难。本文通过综述GALNS突变类型和频率、常见突变位点地理分布、基因型与临床表型关系,旨在为黏多糖贮积症ⅣA型的早期诊治提供参考。

一例黏多糖贮积症ⅣA型患儿的临床特点及GALNS基因突变分析

目的分析1例黏多糖贮积病ⅣA型患儿的GALNS基因突变，探讨其分子发病机制。方法测定1例黏多糖贮积病ⅣA型的女性患儿白细胞MPS相关酶的活性，对GALNS基因进行突变分析。结果患儿主要表现为矮小、多发骨骼畸形、智力正常、听力减退，半乳糖胺-6-硫酸盐硫酸酯酶活性降低；测序结果显示患儿携带GALNS基因c．1094G〉T（P．Gly365Val）／c．938C〉T（P．Thr313Met）复合杂合突变；患儿父亲携带c．1094G〉T（p．Gty365Val）杂合突变，母亲携带C．938C〉T（p．Thr313Met）杂合突变，患儿的c．1094G〉T（p．Gly365Val）与C．938C〉T（P．Thr313Met）突变分别源自父母。其中c．1094G〉T为未报道过的新突变。结论GALNS基因c．1094G〉T（p．Gly365Val）／C．938C〉T（p．Thr313Met）突变可能为这例黏多糖贮积病ⅣA型患儿的致病原因。

黏多糖贮积症ⅣA重型2家系患儿的诊治及其同胞的产前诊断

目的分析黏多糖贮积症ⅣA(MPSⅣA)重型家系患者的临床特点及诊治过程,探讨MPSⅣA重型的治疗方法。方法选取郑州大学附属儿童医院2021年8月至2022年4月收治的2例MPSⅣA重型患儿作为研究对象。回顾性分析以身材矮小、骨骼畸形为主要表现的2个家系患儿的临床表现、生化指标、骨影像学结果等,取外周血白细胞进行溶酶体酶活性和基因分析,并对家系2母亲第2次妊娠18周时羊水细胞基因分析进行产前诊断。分别对2家系患儿进行异基因造血干细胞移植。结果两家系患儿均有生长迟缓、关节松弛、鸡胸、膝外翻等MPSⅣA严重表型临床表现。影像学以骨质密度减低、尺桡骨呈"V"样改变、脊柱生理弯曲异常为主要特点。两家系患儿均有呼吸系统、骨骼系统受累,视神经可疑受累。患者外周血白细胞溶酶体酶活性分析均显示N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)活性显著降低,符合MPSⅣA型。GALNS基因分析显示,家系1患儿存在c.1019G>A(p.G340D)和c.706C>G(p.H236D)(错义)2个突变,家系2患儿存在c.425A>G(p.H142R)和c.463G>A(p.G155R)(错义)2个突变,均来自父母双方。2家系均为未报道过的新突变家系。家系2患儿母亲羊水细胞GALNS基因仅存在c.463G>A突变,明确胎儿为携带者,来自母亲,未患与先证者相同的疾病。2家系患儿均接受了异基因造血干细胞移植,全供体嵌合,无严重移植并发症,GALNS活性位于正常范围,日常生活活动评分较移植前升高。结论MPSⅣA重型是GALNS突变引起的罕见的常染色体隐性遗传性疾病,诊断困难,预后不良,早期识别、早期诊断、有效治疗可改善患者长期生活质量。异基因造血干细胞移植是治疗重型MPSⅣA的有效方法。

治疗儿童黏多糖贮积症IVA型新药elosulfasealfa

elosulfasealfa(商品名:Vimizim)是2014年2月由美国食品药品监督管理局(FDA)正式批准上市的首个治疗儿童黏多糖贮积症IVA型(mucopolysaccharidosis IVA,MPS IVA)的药物,作为内源性N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶的补充,它能显著改善患者的肌肉强度、关节功能和心肺功能等,提高患者6 min内行走距离,改善患者的生存质量。现对其作用机制、药效学、药动学、临床研究及安全性等作一综述。