补肾化瘀方对PCOS患者血清半乳糖凝集素-3、IL-6及CRP水平的影响

目的 探讨补肾化瘀方治疗肾虚血瘀型多囊卵巢综合征(PCOS)患者的临床疗效及可能的作用机制。方法 将2020年9月至2021年9月期间,首次就诊于浙江省中西医结合医院生殖医学科门诊的60例肾虚血瘀型PCOS患者按照随机数字表法分为对照组和治疗组,各30例。对照组给予二甲双胍治疗,治疗组给予补肾化瘀方治疗,两组均治疗3个月经周期。观察治疗前后中医证候积分、性激素、糖脂代谢相关指标及半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、白介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平的变化情况。结果 治疗前,两组患者性激素、糖代谢相关指标、脂代谢相关指标、炎症因子水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,治疗组PCOS患者排卵率较对照组高(76.83%比49.43%,P<0.01)。与治疗前相比,两组患者中医证候积分[(4.18±2.58)分比(12.50±2.17)分,(6.07±2.94)分比(11.97±2.44)分,P<0.01]、空腹血糖[(5.05±0.45)mmol/L比(5.27±0.70)mmol/L,(4.92±0.56)mmol/L比(5.44±0.37)mmol/L,P<0.05]、空腹胰岛素[(9.66±4.54)mU/L比(13.48±4.73)mU/L,(8.44±2.81)mU/L比(12.20±5.19)mU/L,P<0.05]及胰岛素抵抗指数[(2.18±1.05)比(3.17±1.24),(1.89±0.76)比(2.99±1.42),P<0.05]降低。与对照组比较,治疗组中医证候积分降低[(4.18±2.58)分比(6.07±2.94)分,P<0.05],黄体生成素[(10.12±1.72)mIU/mL比(12.54±2.56)mIU/mL,P<0.05]、黄体生成素/卵泡刺激素[(1.65±0.32)比(1.95±0.40),P<0.05]、睾酮[(0.47±0.12)ng/mL比(0.57±0.16)ng/mL,P<0.05]水平降低,三酰甘油[(1.31±0.62)mmol/L比(1.66±0.56)mmol/L,P<0.05]、总胆固醇[(3.91±0.98)mmol/L比(4.40±0.70)mmol/L,P<0.05]、低密度脂蛋白[(2.60±0.61)mmol/L比(3.05±0.79)mmol/L,P<0.05]水平降低,高密度脂蛋白水平升高[(1.41±0.17)mmol/L比(1.31±0.17)mmol/L,P<0.05]。与对照组比较,治疗组Galectin-3 [(8.71±1.67)ng/mL比(9.91±2.23)ng/mL,P<0.05]、IL-6 [(30.24±3.85)pg/mL比(32.62±4.97)pg/mL,P<0.05]、CRP[(2.80±0.91)mg/L比(3.32±0.64)mg/L,P<0.05]水平降低。结论 补肾化瘀方可有效缓解肾虚血瘀型PCOS临床症状,降低血清炎症指标Galectin-3、IL-6及CRP水平,改善糖脂代谢紊乱,调节性激素水平,促进排卵。

果糖-1,6-二磷酸锌对D-半乳糖和亚硝酸钠致衰老小鼠的作用

目的 :观察果糖 1,6二磷酸锌 (ZnFDP)对D 半乳糖 (D Gal)和亚硝酸钠 (NaNO2 )致衰老小鼠的作用。方法 :采用腹腔注射D Gal+NaNO2 的方法造模 ,通过水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力 ,生化法测脑内胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶 (SOD)含量 ,并进行脑组织冠状切片和HE染色。结果 :造模小鼠学习记忆能力下降 ,AchE水平上升 ,SOD水平下降 ,脑内可见明显病理改变。灌胃 3个剂量ZnFDP (14 2 ,2 84 ,5 6 8mg·kg-1·d-1)均可改善模型小鼠脑内AchE和SOD水平 ,高剂量可提高其学习记忆能力。结论 :ZnFDP可改善D Gal+NaNO2 致衰老小鼠的学习记忆能力 ,具有促智、延缓脑衰老的作用。

6-姜烯酚对D-半乳糖诱导C57BL/6小鼠衰老的保护作用

旨在探究6-姜烯酚对衰老小鼠氧化应激的影响。采用腹腔注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)建立衰老小鼠模型,同时用槲皮素,低、中、高剂量(按体质量计6、12、18 mg/kg)6-姜烯酚给小鼠灌胃。记录小鼠脏器与体质量比值;苏木精-伊红(Hematoxylin Eosin,HE)染色检测组织病理学变化;β-半乳糖苷酶(Senescence-Associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色法测定组织器官衰老情况;检测组织中总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。结果显示,与衰老模型组相比,中剂量组脏器系数升高最多(P<0.05)。病理组织切片显示,经6-姜烯酚干预后,小鼠心肌细胞坏死减少,肾小体形态趋于正常,生精小管萎缩情况得到改善,精子数量增多。SA-β-Gal染色结果显示,与衰老模型组相比,中剂量6-姜烯酚组小鼠各组织器官切片蓝染较轻,器官衰老程度有明显改善。与衰老模型组相比,不同浓度的6-姜烯酚组小鼠心脏、肾脏及睾丸中抗氧化酶活力升高、过氧化产物水平下降。其中,中剂量6-姜烯酚组的SOD和GSH-Px的活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。上述结果表明,6-姜烯酚改善衰老小鼠相关脏器的损伤与氧化应激有关。

果糖-1,6-二磷酸醛缩酶和丙糖磷酸异构酶共表达对蓝藻光合作用效率的影响

以转高等植物ALD和TPI基因的鱼腥藻 712 0为对象 ,研究了ALD和TPI两个酶表达量对细胞光合固碳效率的影响。考察了初始pH、NaHCO3浓度和CO2 浓度对转基因藻和野生藻生长、光合活性及无机碳亲和力的影响。结果表明 ,转基因藻在较高碳源浓度下 ,其生长速率和光合放氧活性比野生藻有显著的提高 ,并且可以比野生藻耐受更高的pH。在含有 2 %CO2 的空气中 ,转基因藻对外源无机碳的亲和力比野生藻提高了 4 0

抗瓜氨酸化葡萄糖-6-磷酸异构酶多肽抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义

目的：检测类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者血清中抗瓜氨酸化葡萄糖-6-磷酸异构酶（citrullinated glucose-6-phosphate isomerase,C-GPI）70～88肽抗体（抗C-GPI70- 88抗体）和抗C-GPI435～453肽抗体（抗CGPI435～453抗体）的水平,同时检测其原型多肽抗体水平,评价抗C-GPI多肽抗体在RA诊断中的价值。方法：应用酶联免疫吸附法检测191例RA患者、129例其他风湿免疫疾病患者和74例健康对照组血清中抗C-GPI70- 88抗体、抗C-GPI435～453抗体、抗GPI70～88抗体和抗GPI435～453抗体的水平,并收集RA患者临床和实验室检查数据,分析抗CGPI多肽抗体在RA诊断中的价值以及与临床和实验室指标的相关性。结果：（1）RA组抗C-GPI70～88抗体和抗CGPI435～453抗体的滴度（68.71±4.20和51.78±3.13）显著高于疾病对照组和健康对照组（P〈0.05）,而抗GPI70-88抗体和抗GPI435～453抗体的滴度在各组中差异无统计学意义。（2）抗C-GPI70- 88抗体在RA诊断中的敏感性为41.88%,特异性为84.50%;抗C-GPI435～453抗体在RA诊断中的敏感性为46.05%,特异性为86.05%;联合检测两种抗瓜氨酸化多肽抗体的敏感性为50.79%,特异性为86.05%。（3）抗C-GPI70～88抗体和抗C-GPI435～453抗体在类风湿因子、抗角蛋白抗体、抗环瓜氨酸肽抗体均阴性的RA患者中的阳性率分别为35.00%和45.00%。（4）RA患者抗C-GPI70～88抗体和抗C-GPI435～453抗体阳性组和阴性组之间临床和实验室指标差异无统计学意义。结论：RA患者体内可以检测到抗C-GPI多肽抗体,C-GPI可能参与了RA的发病,对于血清阴性的RA患者有较好的诊断价值。

葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义

目的了解葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎患者中的诊断意义。方法应用ELISA方法检测血清和关节液中的GPI浓度。结果46例RA患者血清中GPI浓度为(0.996±0.574)μg/ml,6例RA患者关节液中GPI浓度为(1.012±0.358)μg/ml,28例SLE患者血清中GPI浓度为(0.083±0.056)μg/ml,9例MCTD患者血清中GPI浓度为(0.052±0.038)μg/ml,7例SS患者GPI浓度为(0.055±0.041)μg/ml,30例献血员血清中GPI浓度为(0.064±0.042)μg/ml,12例非RA患者关节液中GPI浓度为(0.059±0.036)μg/ml,RA组血清中GPI浓度显著高于SLE组,SS组,MCTD组和正常对照组(P<0.05),RA组中关节液GPI浓度显著高于非RA关节液组(P<0.05),GPI抗原对RA检测的敏感性为84.8%(39/46),特异性为98.6%(73/74)。结论检测GPI抗原可能成为RA患者的一个新的诊断指标。

葡萄糖-6-磷酸异构酶水平测定与类风湿关节炎早期诊断

目的:探索葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)水平测定对于日常门诊中类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)早期诊断的意义,及其与RA疾病活动度的相关性。方法:选择2010年至2012年北京大学人民医院风湿免疫科门诊中有多关节肿痛表现的关节炎患者1 051例,选取健康人90例作为对照,ELISA法检测其血清GPI水平,根据临床特点及辅助检查,符合类风湿关节炎分类标准的RA患者525例,其余患者包括骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者134例、血清阴性脊柱关节病(seronegative spine joint disease,Sp A)患者104例、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者31例、原发性干燥综合征(primary Sjgren syndrome,p SS)患者24例、痛风(gout arthritis,GA)患者22例、其他结缔组织病(包括风湿性多肌痛、皮肌炎、系统性硬化症、成人Still病等)患者46例、其他疾病(包括骨质疏松、股骨头坏死、骨髓炎、外伤所致骨和关节疾病、幼年类风湿关节炎、肿瘤等)患者165例。评估GPI的诊断价值,分析GPI阳性与阴性组RA患者在临床特点、疾病活动性、严重程度及炎性指标的差别。结果:RA患者中血清GPI的阳性率达55.4%(而其他自身免疫病为14.3%,健康对照组为7.78%,P<0.001),相较于OA及Sp A患者RA患者组滴度显著升高,差异具有统计学意义(P<0.001)。单独应用GPI诊断RA的最佳界值为0.39 mg/L,敏感性54.2%,特异性87.3%。RF阴性患者中GPI阳性率为36.1%;抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体阴性患者中GPI阳性率34.2%;RF和抗CCP抗体双阴性患者中GPI阳性率为24.1%。GPI水平与ESR、RF、抗CCP抗体及HRF-IgG滴度呈正相关(P<0.05)。结论:GPI在RA患者中有较高的敏感性,抗CCP抗体和/或RF阴性患者中GPI阳性对RA有一定的诊断意义,GPI滴度与RA的疾病活动度可能有关。

血清葡萄糖-6-磷酸异构酶与自身免疫性疾病相关性研究

目的探讨血清葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)水平与各种自身免疫性疾病(AID)的关系。方法比较正常对照和各种AID确诊病例的血清GPI浓度,分析GPI在各种AID中的检测价值。结果类风湿性关节炎(RA)组的GPI浓度和阳性率都显著高于其他AID组和正常对照组(P<0.001),系统性红斑狼疮(SLE)组、干燥综合征(SS)组、多发性肌炎(PM)组、进行性系统性硬皮病(SSC)组和强直性脊柱炎(AS)组GPI的阳性率均在25%以下,显著低于RA组的阳性率(71.0%)。结论在各种AID中,RA组血清中GPI升高最明显。血清GPI检测可作为RA的诊断指标。如果GPI和类风湿因子(RF)联合检测,将对RA的诊断具有较高价值。

苹果L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶cDNA克隆及其表达

【目的】了解苹果果实L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)基因的特性,探索苹果GPP基因表达特性及其与抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)水平的关系。【方法】通过RT-PCR从苹果果实中克隆GPP全长cDNA,分析其序列特征,进行原核表达,制备GPP特异抗体,分析GPP mRNA及其蛋白表达水平与苹果不同组织AsA的关系。【结果】从‘嘎啦’苹果果实中克隆的GPP cDNA(GenBank登录号为FJ752240)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为813 bp,编码270个氨基酸残基,预测分子量为29 kD,该基因与其它植物报道的GPP基因具有较高的相似性,但与肌醇-1-磷酸磷酸酶基因差异较大。构建的pET-32a(+)-GPP载体在大肠杆菌BL21(E.coli BL21)中异源表达后,获得主要以包涵体存在约50 kD的融合蛋白GPP-His(His约21 kD)。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GPP发生特异反应。对苹果可溶性蛋白杂交显示,苹果体内GPP蛋白约33 kD。在苹果不同组织中,GPP mRNA与蛋白质的相对表达水平与AsA含量存在明显的一致性。【结论】以单体形式存在的苹果GPP蛋白具有翻译后修饰特性,且该基因的表达在苹果AsA合成调控中可能起重要作用。

抗环瓜氨酸肽抗体、葡萄糖6-磷酸异构酶及类风湿因子的检测及对类风湿关节炎的诊断价值

目的为寻找敏感性高、特异性强的诊断类风湿关节炎(RA)的实验指标,选择抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、葡萄糖6-磷酸异构酶(GPI)和类风湿因子(RF)并探讨对RA的诊断价值。方法抗CCP抗体和GPI试验采用酶联免疫吸附(ELISA)法,RF用胶乳凝集法,检测了125例RA患者(RA组)、56例其他风湿性疾病患者(对照组)和36例健康体检者(正常组)血清中上述3者的浓度。结果抗CCP抗体、GPI及RF,在RA组分别是:(83.6±45.9)RU/ml、(2.8±2.3)μg/ml和(320.4±208.6)IU/ml;在对照组分别是:(36.2±15.3)RU/ml、(0.19±0.06)μg/ml和(36.3±12.5)IU/ml;在正常组分别是:(19.2±8.6)RU/ml、(0.16±0.08)μg/ml和(19.2±6.5)IU/ml。在RA组中,3者的敏感度分别是64.8%、73.6%和69.6%,特异性分别是92.0%、72.8%和74.4%。结论 RA患者血清抗CCP抗体、GPI和RF显著高于其他疾病患者(P<0.01)。抗CCP抗体和GPI有可能成为诊断RA的新指标、RA的血清标志物,对提高诊断RA的敏感性和特异性,具有良好的临床研究和推广价值。

血清、关节液中葡萄糖6-磷酸异构酶抗原浓度测定对诊断类风湿关节炎的意义

目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(GPI)抗原升高对诊断类风湿关节炎(RA)的意义。方法采用ELISA方法检测158例RA患者(活动期86例,非活动期72例)、96例其他风湿病患者和30例健康对照者血清中GPI抗原的浓度,RA患者同时还检测类风湿因子(RF)、关节疼痛及肿胀数、血沉(ESR)以及X线分级等临床指标;同时配对检测30例RA患者血清及关节液中GPI抗原浓度。结果①RA组GPI浓度明显高于风湿性疾病组和健康对照组;②RA患者关节液GPI浓度明显高于血清,两者呈高度正相关;RA患者GPI抗原浓度与压痛关节数、肿胀关节数及ESR等活动指标呈正相关,与病程、晨僵时间、X线分级、功能分级没有相关性。结论 RA患者血清GPI抗原具有良好的敏感性和特异性,可作为RA诊断的一种新指标;关节液中GPI抗原浓度明显高于血清浓度;GPI浓度与RA病情活动有一定相关性,动态定量检测GPI抗原有助于RA病情评估及疗效评价。

葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导的DBA/1小鼠类风湿性关节炎模型的建立

目的:利用葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)单一肽段及混合多肽片段免疫DBA/1小鼠,建立类风湿性关节炎(RA)模型,分析其主要评价指标及特点,为探讨RA的免疫机制及治疗提供新的理想动物模型。方法:h GPI325-339、h GPI469-483多肽片段和h GPI325-339单一肽段分别与完全弗氏佐剂充分乳化后,于小鼠尾根部皮下注射进行造模,并从体重变化、足踝关节症状评分、足踝关节病理改变、外周血及脾组织CD4+T细胞的表达、外周血i NKT细胞比例以及血清TNF-α和IL-6水平等方面进行模型鉴定及分析。结果:模型小鼠在造模第8天,后爪最先出现红肿,逐渐加重累及四肢,第14天红肿达到高峰,足踝肿胀,行动不利,此后开始逐渐缓解;组织形态学观察发现足踝关节有炎症细胞浸润,以单核细胞与淋巴细胞为主,浆细胞少量出现,混合肽段的炎症状况明显强于单肽片段。与健康对照组和单肽片段模型组相比,混合肽段模型组体重增长缓慢;外周血、脾脏CD4^+T细胞数量明显增多;炎症高峰期外周血i NKT细胞比例下降明显(P<0.05),血清中TNF-α水平显著升高(P<0.05)。结论:混合GPI肽段诱导的RA模型小鼠在免疫学特征,特别是i NKT细胞免疫病理方面与RA患者尤为接近,可作为RA免疫机制研究和治疗的良好工具。

血清葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎活动性的价值探讨

目的了解血清葡萄糖6-磷酸异构酶(GPI)在类风湿关节炎患者中的诊断意义及判断其活动性的价值。方法应用ELISA方法检测血清中的GPI浓度。结果102例RA患者血清中GPI浓度为2.51±2.32μg/ml,明显高于84例健康对照组血清中GPI浓度(0.053±0.036μg/ml),两者浓度差异有统计学显著性意义(P<0.01);其中58例活动性类风湿关节炎患者血清中GPI浓度为3.34±3.18μg/ml,明显高于44例非活动性类风湿关节炎患者血清中GPI浓度(1.18±1.25μg/ml),两者浓度差异有统计学显著性意义(P<0.01)。GPI抗原在RA患者中检出率为84.3%(86/102),特异性为95.2%(80/84)。结论检测GPI抗原可能成为RA患者的一个新的诊断指标,对RA的诊断及活动性的判断有很大的临床应用价值。

6-磷酸葡萄糖异构酶检测对类风湿关节炎的诊断意义

目的探讨6-磷酸葡萄糖异构酶抗原(GPI)及其联合抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)和抗角蛋白抗体(AKA)的检测在自身类风湿性关节炎(RA)的诊断意义。方法应用酶联免疫固相吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法,对65例RA患者,55例非RA相关疾病患者血清中GPI、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)和抗角蛋白抗体(AKA)水平进行检测,设本院门诊健康体检73例为正常对照。结果RA患者GPI、抗CCP和AKA阳性检出率分别为86.2%、70.8%、33.8%,若抗CCP联合AKA检测,阳性率可提高到73.8%;联合3个指标检测,RA诊断阳性率为95.4%,临床符合率高达91.2%。结论GPI是协助诊断RA的一个新的特异性血清学指标,同时结合抗CCP抗体和AKA的检测可以提高RA阳性诊断率,适合在各级实验室推广使用。

半乳糖凝集素-3、白介素-6、单核细胞趋化蛋白-1与动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性研究

目的探讨分析半乳糖凝集素-3(Gal-3)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性。方法选取2015年3月—2017年2月收治的143例经颈动脉彩超检查证实为动脉粥样硬化斑块的患者进行研究,根据颈动脉彩超检查结果分为稳定斑块组(n=74)与不稳定斑块组(n=69),另选取同期无颈动脉粥样硬化斑块的健康体检者70例作为健康对照组。分别测定各组Gal-3、IL-6及MCP-1的水平,并分析Gal-3、IL-6及MCP-1与硬化斑块指数(PI)的关系。结果不稳定斑块组血清Gal-3、IL-6和MCP-1水平以及PI显著高于稳定斑块组及健康对照组(P<0.05),且稳定斑块组高于健康对照组(P<0.05)。血清Gal-3、IL-6和MCP-1水平均与PI呈正相关(r=0.243、0.571和0.643,P均<0.05)。结论血清Gal-3、IL-6和MCP-1在动脉粥样硬化斑块的形成与发展过程中起着重要作用,同时与斑块的稳定性及局部形成有着密切相关性。

血清葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的意义

目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测108例RA患者、42例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、50例其他风湿病患者及112例健康体检者血清GPI浓度,RA患者同时检测了抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP)、类风湿因子(rheuma-toid factor,RF)。结果GPI浓度:RA患者为(1.840±2.821)μg/ml,SLE患者为(0.143±0.426)μg/ml,其他风湿病患者为(0.074±0.279)μg/ml,健康体检者为(0.092±0.232)μg/ml。RA患者血清中GPI浓度显著高于SLE、其他风湿病患者和健康体检者(P<0.01)。Spearman等级相关分析显示RA患者GPI浓度与类风湿因子(RF)浓度呈显著正相关(r=0.622,P<0.01),与其他检测指标无相关性。结论GPI浓度大于0.209μg/ml时对RA的诊断有较高的特异性,其特异性可达93.7%,敏感性为56.5%。表明GPI的变化在RA诊断有较重要的意义。

血清中葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎中的诊断意义

目的探讨血清中葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)抗原升高在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测128例RA患者,86例其他风湿病患者和42例健康对照血清中GPI抗原的浓度,RA患者同时还检测了类风湿因子(RF),关节疼痛及肿胀数,血沉(ESR),以及X线分级等。结果128例RA患者血清中GPI浓度为(2.52±2.37)μg/ml,86例其他风湿性疾病组为(0.083±0.056)μg/ml,42例健康对照组为(0.081±0.050)μg/ml,RA患者血清中GPI浓度显著高于其他风湿病组和健康对照组(P<0.05),在RA活动组和RA非活动组,亦有显著差异(P<0.05)。通过分段回归分析发现GPI的浓度和RA病情活动成正相关。GPI抗原对RA检测的敏感性为43.5%,特异性为98.3%。结论GPI在部分RA患者血清中显著升高,有可能成为诊断RA及判断其疾病活动性的一个新指标。

大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达

通过PCR克隆了大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因manA,分别构建了含manA基因的原核和真核生物表达载体。在大肠杆菌中经IPTG诱导表达的GST-PMI融合蛋白,经亲和层析纯化和PreScission蛋白酶酶切,SDS-PAGE分析证实PMI蛋白为42 ku。对转manA基因的拟南芥进行PCR分析表明,manA基因已稳定整合到拟南芥基因组中。氯酚红显色反应证实,整合到拟南芥基因组中的manA基因能表达具有6-磷酸甘露糖异构酶活性的PMI蛋白。这些结果说明,克隆的manA基因可在细菌和高等植物中高效表达。

视黄醇结合蛋白4和葡萄糖-6-磷酸异构酶与糖尿病分型、并发症的相关性

目的探讨视黄醇结合蛋白(RBP)4和葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)与糖尿病(DM)并发症发生发展及DM分型的相关性。方法选取2010年2月至2012年8月在武汉科技大学附属天佑医院内分泌科240例住院和门诊病人,健康体检者160例。按要求随机分为6组,即正常人群组、单纯肥胖人群组、单纯1型糖尿病(T1DM)组、肥胖T2DM组、肥胖2型糖尿病(T2DM)合并相应并发症(肾病、大血管病变、视网膜病变)组、T2DM合并感染(急性呼吸道感染、急性泌尿系感染)组,各组80例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测正常人群组、单纯肥胖人群组、T2DM组、T2DM合并相应并发症(肾、大血管病变、视网膜病变)组四组RBP4含量。比较正常人群组、T2DM组、T1DM组、DM合并感染组GPI含量。检测各组研究对象检测空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h BG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、体重指数(BMI),并分别分析与RBP4的相关性。结果 1单纯肥胖人群组与正常人群组RBP4含量均在正常范围,前者较后者RBP4含量增加(t=6.70,P<0.01)。T2DM患者与肥胖患者比较RBP4含量增加(t=7.14,P<0.01)。T2DM合并相应并发症时RBP4含量明显增加,与T2DM无并发症者比较差异显著(t=6.38,P<0.01);2T2DM组、T1DM组GPI含量均较正常人群组高(t=15.37,t=11.90,P<0.01),T1DM组比T2DM组GPI含量有增高趋势,但两组间无显著差异(t=6.13,P=0.56)。一旦DM合并感染,如呼吸道感染、泌尿系感染时,与非感染T2DM患者比较,GPI含量增高明显(t=12.76,P<0.01)。3高血糖、高血压、血脂异常、体重增加均与RBP4显著相关;T2DM组RBP4与GPI的相关性不强。结论糖代谢异常、血压血脂异常、体重增加等与RBP4相关,RBP4也许可作为正常人进展为T2DM以及进一步并发慢性并发症的动态监测指标;GPI尚不能作为T1DM与T2DM鉴别的标志分子,也许可作为DM合并急性炎症感染的判断指标。

免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导的类风湿性关节炎小鼠的影响

目的:探究前期合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,GPI)混合肽段诱导的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)小鼠发病的影响。方法:h GPI325-339、h GPI469-483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后,于DBA/1小鼠尾根部多点皮下注射,并用百日咳毒素加强免疫。然后分别用α-半乳糖神经酰胺(α-Gal Cer)和CH2b对模型小鼠进行干预,监测各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况,关节组织苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察炎细胞浸润情况,流式细胞技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测全血中i NKT细胞频率变化,微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric bead array,CBA)检测血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-4、IFN-γ水平。结果:与GPI混合肽段诱导的模型组相比,α-Gal Cer和免疫调节剂CH2b均可显著改善模型小鼠的体重增长缓慢、关节肿胀情况(P<0.05);炎性细胞浸润减少;且二者均可以显著提高RA小鼠体内i NKT细胞的频率,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);α-Gal Cer、CH2b组可以降低模型小鼠炎症高峰期TNF-α、IL-6、IFN-γ水平,两组结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:免疫调节剂CH2b通过激活i NKT细胞影响炎性细胞因子的分泌,缓解GPI混合肽段诱导的关节炎。