脊髓半切伤大鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性变化的研究

目的:探讨大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性变化与脊髓半切伤严重程度的关系。方法:测定30只大鼠脊髓半切伤急性期和恢复期血清中ALT和AST的水平以及10只对照组大鼠血清的ALT和AST的浓度。结果:脊髓半切伤大鼠急性期血清中ALT,AST活性分别为(51.01±11.08)和(56.08±20.12)nkat/L明显高于假手术组急性期活性犤(36.01±8.79),(30.57±12.98)nkat/L,t=1.32,0.56,P<0.01犦。脊髓半切伤大鼠急性期比恢复期血清中ALT和AST活性犤48.05±18.06),(51.09±11.08)nkat/L犦明显升高。结论:ALT,AST在脊髓半切伤急性期呈反应性升高,与脊髓损伤严重程度呈正相关。

脊髓半切伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的 :研究脊髓半切伤 (hSCI)后脊髓远端组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达的意义 ,并探讨反应性胶质化在脊髓半切伤中的作用。方法 :SD大鼠 2 5只 ,随机分为 5组 (n =5 )正常对照组、伤后 1、4、7、14d组 ,用免疫组化及图像分析方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达 ;用大鼠综合性为评分 (CBS)方法对各组评分。结果 :hSCI后远端星形胶质细胞GFAP表达比对照组明显增高 (P <0 .0 1) ;1～ 14d呈进行性增高 ,损伤各组CBS1～ 14d呈降低趋势 ,两指标有显著相关性 (r =-0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :hSCI后星形胶质细胞通过其反应形胶质化对脊髓再生和修复其重要作用。

神经干细胞移植修复大鼠脊髓半切伤的研究

目的:观察神经干细胞移植修复脊髓半切伤的疗效并探讨移植最佳时机。方法:制备大鼠T13～L1脊髓半切伤模型,取胎龄13.5d胎鼠大脑组织,体外分离、培养、诱导神经干细胞,并采用免疫细胞化学技术分别检测NSC(neuralstemcell)特征性标志Nestin(巢蛋白)表达和用血清诱导分化为大量神经元NSE(neuronspecificenolas)和神经胶质细胞GFAP(glialfibrillaryacidicprotein)表达。用明胶海绵吸附BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶)标记好的神经干细胞悬液移植到脊髓半横断处,移植时间选择损伤后立即移植、损伤后第9、14d。观察移植后的大鼠行为的变化,通过CBS(combinebehavioralscore)评分和爬网格实验评价大鼠的运动功能恢复情况,并进行免疫组化鉴定,光学显微镜观察移植神经干细胞的存活和迁移。结果:在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球;用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的神经胶质细胞。与对照组相比,神经干细胞移植组明显修复了损伤结构,改善了下肢的功能,尤其是第9d移植组。结论:神经干细胞移植促进了脊髓损伤后神经结构和功能的恢复,是治疗脊髓半切伤一种有效方案,考虑综合因素移植干细胞的最佳时机应选损伤后9d左右。

脊髓半切伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的:研究脊髓半切伤(hSCI)后脊髓远端组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的意义,并探讨反应性胶质化在脊髓半切伤中的作用。方法:SD大鼠25只,随机分为5组(n=5),正常对照组、脊髓半切伤后1d、4d、7d和14d组。用免疫组化及图像分析方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达;用大鼠综合行为评分(CBS)对各组评分。结果:hSCI后远端星形胶质细胞GFAP表达比对照组明显增高(P<0.01);1～14d呈进行性增高,损伤各组CBS1～14d呈降低趋势,两指标有显著性相关性(r=-0.05,P<0.01)。结论:hSCI后星形胶质细胞通过其反应性胶质化对脊髓再生和修复起重要作用。

颈脊髓半切伤综合征后S-100蛋白的分布和变化研究

目的研究颈髓S-100蛋白分布及半切损伤后S-100蛋白的分布变化及时相改变。探索其与恢复的关系。方法通过免疫组织化学技术观察大鼠颈脊髓半切伤综合征(Brown-sequard’ssydrone)不同时期神经组织中S-100蛋白的分布变化。结果在未损伤的颈髓神经中,S-100蛋白分布于雪旺细胞的胞桨和胞膜中。神经切断48小时后,远近节段S-100蛋白反应表达减弱,远端1周后几乎没有S-100的表达,而近段有新生轴索生长时重新表达S-100蛋白。结论轴索对于雪旺细胞的成熟具有重要作用,S-100蛋白对于轴索的再生具有刺激和诱导作用。S-100蛋白在颈髓不只存在于成熟的雪旺细胞,而且存在于胶质细胞中。S-100蛋白的出现预示着雪旺细胞的成熟和神经再生的表现。

脊髓半切伤神经细胞凋亡的实验研究

目的 探讨细胞凋亡在脊髓半切损伤发病机理中的作用。方法 采用原位末端标记法 ,对大鼠半切伤的不同时间的凋亡细胞数目和部位进行观察分析 ,并作正常对照。结果 半切后的灰质和白质均有细胞凋亡 ,神经元凋亡后形成空泡 ,胶原细胞凋亡多见。细胞凋亡发生在损伤后12 h,7d达高峰 ,至 5周趋于正常。结论 大鼠脊髓半切伤后神经元和胶质细胞均发生凋亡 ,而胶质细胞凋亡常见。

脊髓半切损伤模型的制备

目的 :建立一种简便易行、稳定可靠的脊髓半切伤动物模型。方法 :取大鼠C5～ 7颈髓阶段 ,T8～ 11胸髓阶段直径 1/ 2脊髓半切。术后不同时间观察脊髓组织学变化 ,并纪录脊髓神经功能综合评分 (CBS)。结果 :光镜下半切脊髓远端侧索和灰质神经变性坏死 ,术后 2 4h、1周实验组CBS评分与假手术组有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,且脊髓腹角运动神经元与假手术组比较明显变化 ,行为表现为大鼠运动和感觉功能障碍。结论 :颈髓 5～ 7半切模型死亡率低 ,安全可靠。

小鼠脊髓损伤半切模型的建立及评价

目的建立一种稳定可靠、重复性强的脊髓损伤半切动物模型,模拟人类脊髓半切伤,为后期脊髓损伤的治疗研究提供可靠的动物模型。方法 60只健康昆明小鼠随机分为手术组和假手术组。实验小鼠麻醉后俯卧位固定,以T10胸椎棘突为中心,暴露T9~11棘突和椎板;在体式显微镜下,咬除T10棘突及椎板,暴露该阶段脊髓;用虹膜剪尖端将脊髓半切至脊髓后正中静脉右缘。于造模后1d、3d、5d、1w、2w、3w,采用双盲BMS评分法,评价各组小鼠后肢运动功能。并取损伤局部脊髓组织进行结晶紫染色、Caspase3免疫组织化学染色及超微结构检测,以观察脊髓损伤后的组织学变化。结果手术组实验动物均表现出损伤侧后肢瘫痪,BMS评分低于7分;脊髓损伤局部形态学观察显示该方法能很好地实现脊髓半横切。结论小鼠T10脊髓损伤半切模型建立成功,死亡率低,可重复性强。

大鼠脊髓半切损伤模型的制备

目的用一种新的方法建立简便易行,稳定可靠的脊髓半切损伤模型.方法取45只SD大鼠随机分为3组:假手术组为A组5只,40只为手术组(其中20只用眼用手术尖刀通过T11～T12椎间隙切割脊髓一侧1/2制成hSCI模型为B组,另20只用有齿血管钳咬除T11-12棘突和1/2椎板,用显微剪在T13～L1节段脊髓剪断其一侧1/2制成hSCI模型为C组).术后不同时间观察脊髓组织学变化,并记录脊髓神经功能综合评分(CBS).结果光镜下伤侧灰质缩小,脊髓远端侧索和灰质神经变性坏死,出现大量空泡而神经元减少且明显萎缩,Waller's溃变下节段较上节段严重,术后CBS评分两两比较q检验发现手术组与假手术组有显著意义(P＜0.01),但B组与C组CBS评分无显著性差异(P＞0.05).结论用眼用手术尖刀切割和显微剪切割制成hSCI模型具有同样的模型效果,但前者制备的模型死亡率低,更简单易行、安全可靠等优点.

环磷酸腺苷在大鼠脊髓背侧半切损伤修复中的作用

目的观察在体内给入环磷酸腺苷(cAMP)对大鼠脊髓损伤修复中的作用.方法采用大鼠脊髓T10背侧半切伤模型,通过在脊髓损伤局部、大脑运动皮层、和蛛网膜下腔内给入cAMP,做组织切片免疫组化染色,观察损伤区局部神经丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、皮质脊髓束(CST)纤维、脊髓神经纤维及后肢运动功能评分(BBB).结果 cAMP在脊髓损伤局部和大脑运动皮层给入时,损伤区可见大量脊髓再生纤维,在蛛网膜下腔内给入时损伤区可见极少量皮质脊髓束纤维存在.cAMP组损伤区NF分布较多,GFAP较少.所有动物后肢运动在5～6周恢复正常行走,BBB评分的时间曲线在对照组和cAMP组之间没有明显区别.结论在体内给入cAMP能诱导大鼠脊髓损伤后神经再生.