半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养

采用半原位灌流法,对40 - 50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,采用台盼蓝拒染法测定细胞总数并计算肝细胞实时存活率,肝细胞以5×105 mL的密度接种于6孔细胞培养板,每孔3 mL.在CO2培养箱中培养,观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中LDH活力.结果显示每只鸡肝脏分离获得的细胞产量为（4.1±0.2） ×10^8个,肝细胞实时存活率为（95±1）％,培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7d以上.显示该方法可用于分离培养成年鸡肝细胞,分离培养的鸡肝脏细胞可用于研究细胞代谢、基因表达和肝细胞毒性.

乳猪肝细胞的分离、培养及功能检测

目的 为构建生物人工肝进行肝细胞的准备。方法 采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力及单层和聚集培养后的白蛋白、尿素合成功能进行检测。结果 采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)×10^(10),活性超过95％。在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右。而在未加入激素和生长因子的培养中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失。球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高。结论 采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本能满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求。聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝。