3种常用碳青霉烯类抗生素血药浓度UPLC-MS/MS检测方法的建立

目的 建立3种临床常用碳青霉烯类抗生素——厄他培南(ETP)、亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)血药浓度检测的超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法。方法 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以3种抗生素的稳定性同位素(ETP-D4、IPMD4、MEM-D6)为内标,采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱分离;流动相为98%乙腈+2%水+0.1%甲酸和98%水+2%乙腈+0.1%甲酸,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;柱温为40℃;采用正离子、多反应监测模式进行扫描分析。结果该方法专属性良好,在ETP、IPM、MEM 0.2~200、0.1~100、0.1~100μg/mL范围内线性良好(r2≥0.993),批内、批间精密度和准确度良好(RE均≤5.14%,RSD均≤11.15%),基质效应、提取回收率较一致(RSD≤12.99%)。结论 本实验建立了一种可以同时定量ETP、IPM、MEM血药浓度的UPLC-MS/MS法,该方法样品前处理简单、检测时间短、所需样品量少,可满足临床需求。

碳青霉烯类抗生素对重症肺部感染患者抗感染治疗的临床疗效观察

评价碳青霉烯类抗生素治疗重症肺部感染的效果。方法 随机将84例重症肺部感染者分为对照组42例(用头孢哌酮-舒巴坦治疗)与观察组42例(用头孢哌酮-舒巴坦+亚胺培南-西司他丁钠治疗)。结果 效果对比,观察组临床疗效及其相关指标治疗后均优于对照组(P<0.05)。结论 碳青霉烯类抗生素在治疗重症肺部感染的患者中疗效明确,建议推广。

血必净联合碳青霉烯类抗生素治疗脓毒症患者的临床疗效

目的:探讨血必净联合碳青霉烯类抗生素治疗脓毒症的效果。方法:回顾性分析2021年2月—2023年2月遵义市第一人民医院收治的80例脓毒症患者的临床资料,根据患者的治疗方式分成观察组及对照组,每组40例。对照组患者应用碳青霉烯类抗生素治疗,观察组患者应用血必净联合碳青霉烯类抗生素治疗。比较两组患者治疗前后的生命体征指标及血清炎症指标水平变化,比较两组并发症发生率及住院期间病死率。结果:治疗14 d,两组呼吸频率、心率、体温、平均动脉压均低于治疗前,且观察组呼吸频率、心率、体温、平均动脉压均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗14 d,两组白细胞(WBC)计数均少于治疗前,血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)水平均低于治疗前,且观察组WBC少于对照组,血清PCT、CRP水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组脓毒性休克、新发器官功能障碍发生率及病死率均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:血必净联合碳青霉烯类抗生素治疗脓毒症效果满意,有利于改善患者生命体征及缓解炎症反应,减少休克及器官功能障碍的发生,降低病死率。

血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素分析

目的探讨血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素,为临床提供参考。方法回顾性分析2022年1月至2023年8月于绵阳市中心医院诊断为血流感染大肠埃希菌的200例患者的临床资料,根据是否对碳青霉烯类抗生素耐药分为耐药组(18例)与敏感组(182例)。比较两组患者一般资料[性别、年龄、感染前手术史、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、是否实施过侵入性置管操作、是否入住ICU、是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)],分析影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的危险因素。结果两组患者性别、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、入住ICU占比比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);耐药组患者年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs占比均高于敏感组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作、产ESBLs均是影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的独立危险因素(均P<0.05)。结论血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药受患者年龄、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs影响,临床应予以密切关注。

昆明地区耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌的分子流行病学特点及耐药特征分析

目的研究耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌分子流行病学规律及耐药机制,为临床预防和治疗铜绿假单胞菌的感染提供理论依据。方法对多中心收集的耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌(carbapenems-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)开展多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和遗传信息研究,并对碳青霉烯酶基因与外膜孔蛋白OprD编码基因进行序列分析。结果多位点序列分型方法将81株CRPA分为36个ST型,总体以ST3390(41.98%,34/81)为主,其中有5种为新发现的ST型别;CRPA菌株中碳青霉烯酶基因的检出率较高(65.43%,53/81),尿液标本检出率最高(80.00%,28/35),其中IMP、VIM和NDM型碳青霉烯酶基因检出率分别为37.04%、27.16%和1.23%,未检测到KPC、GES、SPM和OXA-40型碳青霉烯酶基因;oprD基因的序列比对分析发现,高达96.29%(78/81)CRPA临床分离株发生了各种类型的突变,以单个或者多个碱基的插入或缺失为主(76.54%,62/81)。结论81株CRPA主要的耐药机制为膜孔蛋白基因突变和产碳青霉烯酶;存在ST3390克隆株的局部流行,应加强医院感染防控措施,防止暴发流行。

青霉烯和碳青霉烯类抗生素关键中间体4-AA的合成研究进展

(3R,4R)-3-[(R)-1-叔丁基二甲基硅氧乙基]-4-乙酰氧基-2-氮杂环丁酮(4-AA)是合成青霉烯类和碳青霉烯类抗生素的基本原料,本文根据其基本骨架及手性中心构建的不同方法综述了5种合成路线。

1β-甲基碳青霉烯类抗生素关键中间体的合成进展

合成碳青霉烯类抗生素的关键中间体主要有两类 ,本文针对这两类关键中间体的合成新进展作一简单综述。

1β-甲基碳青霉烯类抗生素美罗培南合成进展

美罗培南是首个1β-甲基碳青霉烯类抗生素,于1990年首次合成得到,其对β-内酰胺酶和肾脱氢肽-Ⅰ酶(DHP-Ⅰ)稳定,无需与脱氢肽酶抑制剂联用,已用于临床抗重症感染的治疗。该类抗生素是目前研发难度大,生产工艺复杂的产品之一,主要是通过化学全合成来制备,工艺过程包括关键侧链合成和骨架母核的合成。本文综述了1β-甲基碳青霉烯类抗生素美罗培南的全合成方法。

2017-2021年某医院碳青霉烯类抗生素的应用情况及其与耐碳青霉烯类革兰阴性菌检出率的相关性

目的分析2017-2021年某医院碳青霉烯类抗生素的应用情况及其与耐碳青霉烯类革兰阴性菌检出率的相关性,为规范临床合理使用抗菌药物、遏制耐药菌产生提供依据。方法统计2017-2021年某医院碳青霉烯类抗生素的销售金额、用药频度、使用强度和5种主要革兰阴性菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率,采用SPSS 26.0统计软件对耐药率和使用强度进行相关性分析。结果2017-2021年碳青霉烯类抗生素销售金额、用药频度和使用强度总体呈逐年增长趋势,其中亚胺培南/西司他丁均居于首位,临床使用率较高。5种主要革兰阴性菌对碳青霉烯类耐药率总体呈上升趋势,大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素还保持高度敏感,而铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率最高,超全国平均水平;耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率与碳青霉烯类抗生素使用强度呈正相关,耐碳青霉烯铜绿假单胞菌、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌、耐碳青霉烯大肠埃希菌、耐碳青霉烯阴沟肠杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药率与碳青霉烯类抗生素使用强度无显著相关性。结论碳青霉烯类抗生素的使用对部分革兰阴性菌的耐药率变化影响较大,应加强监管碳青霉烯类抗生素在临床的应用,减少和延缓细菌耐药。

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌感染预测神经网络模型的构建及应用

目的研究耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌(CRAB)感染预测神经网络模型的构建及应用。方法回顾性分析医院从2019年2月~2022年2月收治的286例鲍曼不动杆菌(AB)感染的住院患者病历资料,根据耐药性分为观察组(CRAB感染)92例及对照组(碳青霉烯类抗生素敏感AB感染)194例。比较两组患者的一般资料以及临床治疗情况。通过单因素分析、多因素Logistic回归分析明确CRAB感染的影响因素。采用Logistic回归分析以及神经网络模型分析CRAB与各项影响因素的关系,构建预测评估模型。结果单因素分析发现,性别、年龄、BMI以及基础疾病均和CRAB感染无关(P均>0.05),使用呼吸机、碳青霉烯类抗生素、替加环素以及使用抗菌药物时间、入住ICU时间均和CRAB感染有关(P均<0.05)。经多因素Logistic回归分析显示,使用呼吸机、碳青霉烯类抗生素、替加环素以及使用抗菌药物时间、入住ICU时间均是CRAB感染的危险因素(P均<0.05)。将“1-特异性”作为横坐标,以“灵敏度”作为纵坐标,进行ROC曲线的绘制,其中ROC曲线下面积为0.879,95%CI(0.572~0.894),P<0.001,可见该模型预测效果较佳。结论CRAB感染的危险因素较多,包括使用呼吸机、使用碳青霉烯类抗生素、使用替加环素等,且随着使用抗菌药物时间以及入住ICU时间的增加,CRAB感染风险增加。其中,神经网络模型对CRAB感染的预测能力较佳。

碳青霉烯类抗生素厄他培南的合成

目的:合成碳青霉烯类抗生素厄他培南。方法:以4R-羟基-L-脯氨酸(1)为原料,在碱性条件下与氯甲酸对硝基苄酯反应,得到氨基保护的4R-羟基-L-脯氨酸(3)。经氯甲酸异丙酯活化化合物3的羧羟基后胺解,所得中间体4用甲烷磺酰氯酰化得到化合物(5)。化合物5与硫代醋酸钾置换得到4-羟基构型反转的化合物(6),化合物6经碱性水解,得到厄他培南侧链(7)。侧链7与培南母核MAP(12)反应,得到保护的厄他培南(13),再经催化氢化得到目的物厄他培南(14)。结果:以4R-羟基-L-脯氨酸(1)为原料,合成了对硝基苄氧羰基保护的厄他培南侧链(7),进而制备了碳青霉烯类抗生素厄他培南。结论:此方法原料易得、反应条件温和、成本低,易于放大生产。

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的探讨临床标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法收集2010年1月—2013年12月临床标本中分离的CRKP。采用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定并联合纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,Microflex^(TM)MALDI-TOF MS进行菌种复核。改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶表型;PCR方法检测bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM-1)和bla_(OXA-48)等碳青霉烯酶基因及AmpC酶基因,并对阳性扩增产物进行基因测序;SDS-PAGE检测菌株外膜蛋白Ompk35和Ompk36的表达情况;对携带碳青霉烯酶基因的菌株进行质粒转移接合试验。结果 75株CRKP中,有71株改良Hodge试验阳性,其中69株携带bla_(KPC-2)基因合并Ompk36变异(68株)或Ompk36缺失(1株);1株携带bla_(IMP-4)基因合并Ompk35和Ompk36变异,1株携带bla_(NDM-1)和bla_(CIT-1)基因合并Ompk35和Ompk36变异。4株改良Hodge试验阴性的菌株中,3株DHA4基因阳性合并Ompk36缺失(1株)或Ompk36变异(2株),另1株未检测到耐药基因但Ompk36缺失。仅4株产碳青霉烯酶菌株(4/71)转移接合试验成功。结论临床标本分离的CRKP对碳青霉烯类抗生素的主要耐药机制为产KPC-2酶合并外膜蛋白表达异常。需加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。

碳青霉烯类抗生素中间体MAP的合成工艺改进

本研究报道了一种以4-乙酰氧基氮杂环丁酮(4-AA)为起始原料经过Reformatsky、酰化、还原、亲核取代、Dieckmann环合、烯醇化六步反应得医药中间体β-甲基乙烯基磷酸酯(MAP)的方法,通过单因素对照实验对关键反应的重要参数进行了优化,得到一条收率高、成本低和高效的合成路线,总收率达到43%,液相纯度达到98.82%,并采用MS和^(1)HNMR对关键中间体和产物都进行了表征。

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制

目的研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)对碳青霉烯及头孢菌素类抗生素耐药机制,为临床治疗CRE感染及医院感染的控制提供分子流行病学依据。方法收集2014—2015年临床送检各类标本分离的细菌,使用Microscan Walkaway 40 plus进行细菌鉴定和药敏试验,对分离的CRE进行常见碳青霉烯酶的编码基因(bla_(NDM-1)及bla_(KPC-2))和超广谱β-内酰胺酶编码基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)-like、bla_(CTX-M-2)-like、bla_(CTX-M-8)-like及bla_(CTX-M-9)-like)的检测,同时检测细菌多重耐药相关的Ⅰ类整合子编码基因bla_(inT-1)。结果 2014—2015年共分离7株CRE,检出率为0.30%,1~6号菌株为肺炎克雷伯菌,7号菌株为弗劳地柠檬酸杆菌,7株菌株对β-内酰胺酶抑制剂复合制剂、头孢菌素类、头霉素类、碳青霉烯类抗生素均耐药,3株菌对阿米卡星及四环素敏感,2株菌对复方磺胺甲口恶唑敏感。3株菌检出bla_(NDM-1),2株检出bla_(KPC-2),5株检出bla_(TEM),7株均可检出bla_(SHV),1株检出bla_(CTX-M-1)-like,4株检出bla_(CTX-M-9)-like,5株检出bla_(inT-1),未检出基因bla_(CTX-M-2)-like及bla_(CTX-M-8)-like。结论 bla_(NDM-1)及bla_(KPC-2)是导致7株CRE对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制,bla_(TEM)、bla_(SHV)及bla_(CTX-M-9)-like是导致对头孢菌素类抗生素耐药的主要原因,bla_(inT-1)在CRE多重耐药及耐药基因传播中发挥着巨大的作用。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是引起医院感染的重要条件致病菌之一。目前,碳青霉烯类是临床上治疗PA感染的最佳选择。然而,临床上对该类药物滥用现象较严重,造成PA对碳青霉烯类抗生素的耐药率迅猛上升。目前国内外对该类抗生素耐药机制的研究非常迫切。PA对碳青霉烯类的耐药机制主要包括:外膜蛋白表达降低;外排泵的过表达;β-内酰胺酶的水解作用(金属β-内酰胺酶和头孢菌素酶);青霉素结合蛋白靶位点的改变以及生物被膜的形成。本文从这五个方面分别阐述铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药机制。

三种碳青霉烯类抗生素对ICU分离菌株的体外抗菌作用

为评价亚胺培南、帕尼培南与美罗培南的体外抗菌作用 ,用琼脂双倍稀释法测定从我院重症监护病房分离的 2 30株革兰氏阴性菌的最低抑菌浓度 (MIC) ,并采用抑制剂增强的纸片扩散法测定大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL s)。结果 ,5 0株肺炎克雷伯氏菌和 17株大肠埃希氏菌中的ESBL s阳性率为 6 1.2 %。三种碳青霉烯类对阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、不动杆菌等都具有高度的抗菌活性 ,且对产 ESBL s菌株保持高度的抗菌活性。对嗜麦芽黄单胞菌高度耐药。

碳青霉烯类抗生素暴露对老年重症肺炎多重耐药菌检出率及预后的影响

目的探讨碳青霉烯类抗生素暴露对老年重症肺炎多重耐药菌(MDRO)检出率及预后的影响。方法回顾性调查2014年2月—2016年2月某院重症医学科收治的老年重症肺炎患者。根据是否存在碳青霉烯类抗生素暴露分为A组(碳青霉烯暴露组)、B组(非碳青霉烯暴露组)。A组患者再依据碳青霉烯类抗生素暴露时间分为2个亚组,A1组:应用碳青霉烯类抗生素时间>7 d的患者;A2组:应用碳青霉烯类抗生素时间≤7 d的患者。对各组患者MDRO检出率、机械通气日数、入住ICU日数及28 d病死率进行比较分析。结果共纳入患者86例,其中男性57例,女性29例;年龄65~92岁,平均年龄(80.12±10.45)岁。A组40例,B组46例;A1组24例,A2组16例。A组MDRO检出率为65.00%,B组为36.96%,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者比较,A组的机械通气日数、入住ICU日数、28 d病死率均高于B组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。A1组的MDRO检出率为75.00%,高于A2组的43.75%(P<0.05);A1组的机械通气日数为(7.69±2.22)d,高于A2组的(6.34±1.56)d(P<0.05);A1、A2组28 d病死率及入住ICU日数比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论碳青霉烯类抗生素暴露可增加MDRO感染的发生,特别是非发酵菌的定植或感染,且延长了患者机械通气日数及入住ICU日数,影响患者预后。

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌的耐药机制和同源性研究

目的研究肺炎克雷伯菌对耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制和同源性。方法对卫生部中日友好医院从2006年1月至2011年2月临床标本中分离的肺炎克雷伯菌,用V1TEK-Ⅱ全自动微生物分析仪和常规方法进行菌种鉴定和药敏试验,筛选对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌;用三维试验和改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;用PCR扩增碳青霉烯酶基因,并对扩增产物测序,确定其基因型;接合试验研究其传播机制;通过基因外重复回文(REP)-PCR分析其同源性。结果共检测得4株耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌,其中2株菌对所测试的所有抗菌药物均耐药。1株菌产IMP-4型金属酶;未检测出其他碳青霉烯酶基因。转移接合试验呈阴性;REP-PCR显示4株菌属于3个不同的克隆型。结论该院出现碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌,属于不同克隆型,耐药机制复杂,产IMP-4型金属酶是其对碳青霉烯类抗生素耐药的原因之一。

碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD_2的研究

目的研究铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2与碳青霉烯类抗生素耐药的关系。方法琼脂稀释法测定14种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC。PCR扩增oprD2编码基因并进行序列分析。十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的变化,比较敏感株和耐药株外膜蛋白的差异,统计分析采用均数t检验。结果 141株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药(IMPRMEMR)为主,占66.7%;亚胺培南耐药和美罗培南敏感(IMPRMEMS)占32.6%;亚胺培南敏感和美罗培南耐药(IMPSMEMR)仅占0.7%。PCR扩增141株耐药株oprD2编码基因结果136株耐药株oprD2编码基因发生显著变异,变异位点呈现多样性。其中34株细菌的oprD2编码基因存在大片段缺失,6株的oprD2编码基因中有插入片段,96株有小片段缺失或不同位置的多个点突变。另4株产金属酶菌株及1株亚胺培南敏感(美罗培南耐药)株的oprD2编码基因未发现异常。对其中16株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行SDS-PAGE分析,结果显示10株IPMRMEMR和5株IPMRMEMS铜绿假单胞菌外膜蛋白均存在分子量46 000 u处的OprD2蛋白减少,而1株IMPSMEMR株OprD2蛋白带未见异常。结论 oprD2编码基因的缺失或突变可能是导致外膜蛋白OprD2缺失或减少的分子基础,并是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素尤其是亚胺培南耐药的主要机制之一。

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌产β内酰胺酶研究

目的了解鲍曼不动杆菌对13种抗生素耐药性及β内酰胺酶基因携带情况,为临床合理用药及控制医院感染提供依据。方法收集临床分离鲍曼不动杆菌共80株,其中亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(imipenem resistant acinetobacter bauman-nii,IRAB)50株,亚胺培南敏感株(imipenem sensitive acinetobacter baumannii,ISAB)30株。采用琼脂稀释法检测上述细菌对13种抗菌药的MIC,三维试验检测AmpC酶,EDTA纸片协同试验检测金属酶表型。PCR检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、AmpC、IMP-1、IMP-4、VIM-2编码基因。结果 50株IRAB中MIC50>128mg/L的抗菌药有阿米卡星、环丙沙星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮、头孢西丁、磺胺甲口恶唑-甲氧苄啶,MIC50在32～128mg/L的抗生素有美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、头孢吡肟、头孢他啶,MIC50<8mg/L的抗生素有左氧氟沙星和多黏菌素B。对30株ISAB,MIC50<8mg/L的药物有美罗培南、阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟和多黏菌素B。IRAB和ISAB中AmpC酶表型阳性的分别为42株(84%)和9株(30%),金属酶表型检测全部阴性。IRAB中PCR检测到36株OXA-23阳性(72%)、45株AmpC阳性(90%),ISAB中PCR检测到4株OXA-23阳性(13.3%)、20株AmpC阳性(66.7%),IRAB与ISAB相比,OXA-23阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01),而AmpC阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。80株鲍曼不动杆菌中OXA-51均为阳性。结论 OXA-23是我院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带的主要β内酰胺酶基因。