半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体

为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。

液液萃取气相色谱-串联质谱法测定含油半固体食品中19种邻苯二甲酸酯类化合物

建立液液萃取结合气相色谱-串联质谱法测定含油半固体食品中19种邻苯二甲酸酯类化合物含量。样品经正己烷饱和的乙腈提取,提取液与乙腈饱和的正己烷液液萃取净化,采用HP-5MS色谱柱分离,多反应监测模式定量分析。19种邻苯二甲酸酯类化合物的质量浓度在20~1000μg/L范围内线性相关系数均大于0.9993,方法检出限为0.0012~0.060 mg/kg,定量限为0.0036~0.18 mg/kg,0.2、1.0、7.5 mg/kg低、中、高三水平加标试验的平均回收率为81.2%~100.7%,测定结果的相对标准偏差为0.9%~5.7%(n=6)。该方法适用于含油半固体食品中19种邻苯二甲酸酯类化合物的定量分析。

黄芪产品半固体制备工艺优选

目的 优选黄芪产品半固体制备工艺。方法 采用单因素试验及正交试验优选黄芪的最佳提取液,以黄芪浓缩液、木糖醇、复配胶及柠檬酸的加入量为考察因素,以产品的感官评分为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优化黄芪产品半固体制备工艺。结果 黄芪的最佳提取液工艺为料液比1∶10,提取时间1 h,提取次数3次。黄芪产品半固体最佳制备工艺为黄芪浓缩液加入量11.0%,木糖醇加入量9.0%,复配胶加入量1.0%,柠檬酸加入量0.11%。结论 该研究所制备的产品半固体呈半透明,工艺简便易行,具有一定的开发应用前景。

半固体挤出3D打印卡托普利分剂量片的质量评价

目的对不同剂量的半固体挤出3D打印卡托普利分剂量片进行质量评价,为临床提供精准剂量的分剂量药品。方法对3D打印卡托普利分剂量片剂进行外观、硬度、重量差异、含量、含量均匀度、溶出度和稳定性质量评价,并通过差示扫描量热分析(Differential scanning calorimetry,DSC)对比打印片与市售片中药物的特征峰。结果3D打印卡托普利分剂量片为白色圆柱形网格片,各检测指标均符合2020版《中国药典》要求,DCS图谱中3D打印片和市售片的药物特征峰位置一致。结论半固体挤出3D打印卡托普利分剂量片可用于临床药品分剂量,实现精准医疗服务。

海藻酸丙二醇酯在低脂半固体复合调味料中的应用

本文主要研究了PGA的添加量对低脂半固体复合调料的粘稠度、稳定性、口感、组织结构的影响。采取单因素实验,对产品进行感官品评,找出低脂半固体复合调料中PGA的最适添加量为0.3%,然后通过正交实验得出复配功能配料的最佳添加量为结冷胶0.05%、黄原胶0.15%、羧甲基纤维素钠0.2%、藻酸丙二醇酯0.25%。

羟基喜树碱半固体脂质纳米粒的制备和体外释药特性

目的:制备羟基喜树碱的半固体脂质纳米粒(HCPT-SSLN),初步考察其体外释药规律。方法:采用乳化蒸发-低温固化法制备HCPT-SSLN;用激光粒度仪测定其粒径和ξ电位;考察其混悬液和冻干粉的物理稳定性;用透析法考察其体外释药性质。结果:HCPT-SSLN纳米粒平均粒径为130.5nm,载药量为2.51%,包封率为79.19%,ξ电位为-33.1mV;室温(25℃)和4℃下放置6个月,纳米粒冻干粉和混悬液外观、粒径及包封率无明显变化;体外释药规律符合Weibull方程lnln[1/(1-Q)]=0.263 3lnt+0.050 9(R2=0.948 5)。结论:制备的HCPT-SSLN包封率高,稳定性好,大小均匀,体外释药具有缓释特点。

9-硝基喜树碱半固体脂质纳米粒的制备及大鼠的药动学研究

采用高温乳化蒸发-低温固化法制备9-硝基喜树碱(1)半固体脂质纳米粒,并考察其形态、粒径、包封率、z电位及大鼠静脉给药后体内药物动力学行为。结果表明,1半固体脂质纳米粒为圆形,具有明显可见的亲水性聚乙二醇“外壳”,粒径为223.3～249.1nm,包封率为77.9%～83.5%,z电位为-28.4～-22.2mV。分别用1半固体脂质纳米粒和溶液对大鼠静脉给药,体内药物动力学参数分别为:t1/2 (14.9±0.3)h和(1.2±0.6)h,AUC0～t(486±37)mg·h·L-1和(117±64)mg·h·L-1,MRT (19.3±0.7)h和(1.7±1.0)h。表明1半固体脂质纳米粒可延长体循环时间,提高生物利用度。

卡波姆在半固体制剂中的应用

卡波姆（Ｃａｒｂｏｍｅｒ）是丙烯酸与烯丙基蔗糖或季戊四醇交链而成的高分子聚合物，是一种优良的药剂新辅料，美、英药典均已收载，我国药用标准的卡波姆已由上海人民制药厂生产。１卡波姆的性质［１～４］卡波姆为白色、疏松、酸性、具吸湿性和特殊臭味的粉末，平均含...

MTT-半固体培养基测定细菌动力的研究

目的 制成一种容易测定细菌动力的半固体培养基。方法 根据Difco动力试验培养基配方 ,降低琼脂浓度 ,加入MTT代替TTC。培养基组成为 10 .0gTryptose ,5 .0gNaCl,3.5gagar ,10 0 0 .0ml蒸馏水 ,高压灭菌后 ,冷却至 5 0℃～ 6 0℃。无菌加入 1.5ml滤器除菌的 10g/LMTT水溶液。分装无菌管。结果 有动力菌株沿着穿刺线扩散 ,形成蓝色云雾状 ,而无动力菌株在穿刺线上生长只形成蓝线 ,蓝线周围培养基保持澄清。检测了 12 3株菌 ,鞭毛染色证实 94株有鞭毛、2 9株无鞭毛 ;有鞭毛的菌株中 ,90株菌培养 10～ 18h动力阳性 ,其余 4株大肠埃希菌培养 2 4h动力阳性 ,但这 4株菌应用Difco动力试验培养基需诱导传代才获得阳性结果。除此 4株外 ,还有 9株用Difco动力培养基需培养 48h才阳性。

用显色半固体进行快速细菌药敏试验的方法

目的 介绍一种快速检测细菌药物敏感试验的方法。方法 用氯化-235三苯基四氮唑（TTC）显色半固体药敏法和K-B法同时对儿童医院2003年12月-2004年5月临床检出的528株细菌进行药物敏感试验，并且用此两种方法对标准菌株进行30次检测。结果 511株细菌用TTC显色半固体药敏法在3h内获得结果，占96.8％，与K-B法敏感度完全相同或基本相同的有509例，占96．4％，对标准菌株进行的药敏试验，药敏抑菌环直径毫米数没有显著性差异。结论 该方法可以用来作为检测细菌对药物敏感程度的试验，具有快速、简便、可靠、容易判读的特点，适合各级医院常规使用。

10-羟基喜树碱半固体脂质纳米粒的研制与稳定性考察

目的:制备10-羟基喜树碱的半固体脂质纳米粒(HCPT-SSLN)并考察其稳定性。方法:采用高温乳化蒸发-低温固体法制备了HCPT-SSLN;用透射电镜考察了纳米粒的形态;用激光粒度仪测定了粒径和ξ电位;考察了其混悬液和冻干粉的物理稳定性。结果:HCPT-SSLN纳米粒平均粒径为130.5 nm,载药量为2.51%,包封率为79.19%,ξ电位为-33.1mV;室温(25℃)和4℃下放置6个月,纳米粒外观、粒径及包封率无明显变化,冻干粉比混悬液的物理稳定性更高。结论:本实验制备的HCPT-SSLN包封率和载药量较高,粒径分布均匀,稳定性良好。初步表明HCPT适合进行SSLN包裹。

复合肥浓度对水稻半固体播种秧苗素质的影响

水稻半固体播种是一种全新的栽培方式。为实现水稻"高产、高效、高质"生产,研究了不同浓度复合肥对水稻秧苗素质的影响,结果表明,与对照相比,1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180、1∶200的肥泥质量比例处理秧苗高度增加、整齐度适中、茎基部变宽、根系发育良好、干物质积累及分蘖增多、根冠比增大、叶片长势均匀,水稻秧苗素质明显提高,其中1∶120处理秧苗素质最优。1∶40、1∶80处理受到肥料毒害,秧苗细小、整齐度差、叶片发育不均匀,但干物质积累较多。而1∶20处理受到肥料的毒害最重,导致水稻无法出苗。

脐血单个核细胞在半固体培养基中向神经元样细胞的分化

为观察脐血单个核细胞在甲基纤维素半固体培养基中的生长情况 ,常规方法分离脐血单个核细胞 ,接种于含 SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO的甲基纤维素半固体培养基中培养。第 5 d发现有 6～ 10个细胞组成的小集簇 ,散在分布 ,细胞形态无变化。第 11d有神经元样细胞生长 ,与集簇并存。以后神经元样细胞逐渐生长 ,但集簇生长停滞 ,第 16d仍未发现集落形成。收集细胞 ,进行神经元特异烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)免疫细胞化学测定 ,显示少量神经元样细胞 NSE、NF阳性。该结果提示在半固体培养基中 ,脐血单个核细胞可向神经元样细胞分化 。

粒单系造血祖细胞CFU-GM琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色

用粒单系造血祖细胞 (CFU- GM)体外琼脂半固体培养法 ,琼脂块原位固定 ,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术 ,对培养人的骨髓 CFU- GM进行集落性质鉴定。结果表明 :Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度 :CFU-GM的细胞中 PAS、POX呈阳性反应 ;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。

环孢菌素A自乳化半固体骨架胶囊的制备

目的考察环孢菌素A自乳化半固体骨架胶囊的处方。方法制备药物的饱和溶液用以测定药物在不同油相中的溶解度;采用伪三元相图法考察不同乳化剂形成微乳的能力和区域,绘制不同处方组成的相图;采用体外乳化实验筛选处方,并制备环孢菌素A自乳化半固体骨架胶囊。结果该胶囊中的乳化剂为Tween 80-聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油(质量比为1∶1),助乳化剂为聚乙二醇-8-甘油辛酸/葵酸脂(labrasol),油相为辛酸/癸酸三甘油酯,半固体载体为泊洛沙姆188-硬脂酸聚烃氧(40)酯(质量比为1∶1)。该处方所形成的微乳平均粒径为40 nm。结论按优化处方制得的环孢菌素A自乳化半固体骨架胶囊能够提高环孢菌素A在水中的溶出度。

羟基喜树碱半固体脂质纳米粒制备工艺研究

目的制备羟基喜树碱的半固体脂质纳米粒(HCPT-SSLN)。方法在单因素考察的基础上,通过正交设计优选处方和制备工艺,并对优化条件下制备的HCPT-SSLN纳米溶液进行质量评价。结果制备的HCPT-SSLN平均粒径为130.5 nm,多分散系数为0.18,载药量为2.51%,包封率为79.19%,ξ电位为-33.1mV;纳米溶液4℃下放置6个月,纳米粒外观、粒径及包封率无明显变化。结论所制备的HCPT-SSLN包封率和载药量较高,粒径分布均匀,稳定性良好,为羟基喜树碱的临床应用提供了更广阔的前景。

黑曲霉半固体发酵产单宁酶的工艺优化

采用紫外分光光度法测定酶活,用单因素法对黑曲霉B0201半固体发酵产单宁酶的工艺条件进行优化。结果表明:半固体发酵法主要产胞内酶,3.3%五倍子、2.5%的泡沫、温度30℃、初始pH 5.0,接种量1×108个孢子,装液量60 mL,摇床转速160 r/min是产酶的最佳工艺条件,发酵72 h,单宁酶的活力最高,可达144.39 U/mL。该条件下半固体发酵所产胞内单宁酶酶活较高,工艺简单易控制。

半固体骨架制剂技术在缓控释制剂中的应用

半固体骨架制剂技术目前在药剂学领域主要应用于制备缓控释制剂及提高药物生物利用度。从处方组成、制备工艺、体外释药影响因素等方面 ,综述半固体骨架制剂技术在缓控释制剂中的应用。

半固体培养及快速筛选策略在恶性疟原虫相关单克隆抗体制备中的应用

目的以恶性疟原虫富组氨酸蛋白单克隆抗体的制备为例,分析半固体培养技术和筛选鉴定策略在单克隆抗体制备中的关键作用。方法用恶性疟原虫富组氨酸蛋白重组抗原(re Pf-HRP)免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP20细胞融合,于含2%甲基纤维素的半固体培养基中培养,使融合细胞呈集落化生长;将单细胞集落转移至液体培养基中培养;建立不同的抗原和ELISA检测方法对培养上清进行筛选;经粗筛和特异性筛选为阳性的细胞株置液氮保存。冻存复苏后,对稳定分泌特异性抗体的单抗细胞株进一步分析腹水产量、抗体亚类、抗体识别位点、抗体的亲和常数及配对检测抗原的灵敏度。结果细胞融合后经半固体培养获得的单克隆细胞株为915个,粗筛的克隆阳性率为37.8%(346/915);特异性筛选的克隆阳性率仅占粗筛检测阳性的2.6%(9/346),占总克隆数的0.98%(9/915),经液氮冻存复苏鉴定,获得了8株稳定分泌特异性抗体的单抗细胞株;经腹水产量、抗体亚类、抗体识别位点、抗体的亲和常数及配对检测抗原的灵敏度等检测,最终获得了2株可用于快速检测恶性疟患者血液样本中特异性循环抗原的配对抗体。结论半固体培养保证了可供筛选的融合细胞的数量,粗筛和特异性筛选结合的策略保证了快速筛选出特异性克隆。

半固体制剂微生物限度检查法的体会

半固体制剂微生物限度检查法的体会何娅郁韫超（上海医科大学华山医院上海２０００４０）按上海市卫生局规定，医院自制制剂均应进行微生物限度检查。我们对本院的自制制剂逐一进行检查，在实验中，溶液剂较易进行，而半固体制剂，特别是油包水型基质的乳膏及软膏，操作比...