微量半固体琼脂稀释法用于中草药抗菌试验的方法学研究

目的建立用于具有抗菌活性中草药筛选的、简单有效的抗菌药物敏感性试验方法。方法在微量反应板上采用药基（药物和半固体培养基）混合试验法以丁香、黄连、虎杖和大青叶等抗菌中草药的水提液及乙醇提取液对金黄色葡萄球菌标准菌株、淋病奈瑟菌和白色念珠菌质控菌株进行抗菌试验，同时应用传统的琼脂平板稀释法作为对照，且重复试验3次。结果测试的4种中草药针对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抗菌活性在1：128～1；512稀释度，针对淋病奈瑟茼199622在1：2稀释度，针对白色念珠菌199713在1：64～1：512稀释度，与对照方法相比抗菌活性多为相同或有一个稀释度的差异，仅有两个结果为两个稀释度差异。结论微量半固体琼脂稀释法用于抗菌活性中草药的筛选具有操作简便、结果易于判读的优点。

TTC在半固体琼脂动力试验中的应用

为使动力试验的结果更容易观察，在原半固体琼脂的基础上加入低浓度的ＴＴＣ作为指示剂。细菌沿穿刺线向因周呈紫红色树根状或呈紫红色弥漫状生长为阳怀，细菌沿穿刺线紫红色生长为阴性。用ＴＴＣ半固体琼脂和半固体琼脂两种培养基，分别做了２６３例细菌动力试验的结果表明，ＴＴＣ半固体琼脂比无色的半固体琼脂更易观察细菌的动力。

用半固体琼脂培养、液体石蜡密封法保存埃尔托型霍乱弧菌菌种

用半固体琼脂培养基穿刺接种加液体石蜡封藏在室温下保存埃尔托型霍乱弧菌28株。在保存3、6、9、12、18个月后,对细菌的形态、生理、生化特性的观察发现,分别有28株、28株、26株、17株弧菌生长良好,未见变异。分别占原菌株的100.0％、100.0％、100.0％、92.9％和65.4％。

粒单系造血祖细胞CFU-GM琼脂半固体培养的原位固定及鉴定染色

用粒单系造血祖细胞 (CFU- GM)体外琼脂半固体培养法 ,琼脂块原位固定 ,Wright染色与细胞化学和免疫细胞化学技术 ,对培养人的骨髓 CFU- GM进行集落性质鉴定。结果表明 :Wright染色能区别集落的性质及细胞的分化程度 :CFU-GM的细胞中 PAS、POX呈阳性反应 ;CD14、CD15分别在单核细胞和粒细胞的胞浆或胞膜上表达。该方法对鉴定细胞集落类型、集落中细胞的分化与成熟程度是简便可靠的手段。

酪酸梭状芽孢杆菌发酵培养基的优化

验证了高层半固体琼脂试管法比固体琼脂平板法更具有良好的厌氧性能,能准确地对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数.通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子进行单因素研究,L9(33)正交实验进一步优化得到最佳培养基组成为(g/L):胰蛋白胨10,葡萄糖8,酵母膏4.用此培养基在37℃培养24 h,活菌数可达4.1×108 mL–1.培养基中添加K2HPO4 5 g/L、MgSO4.7H2O 0.2 g/L、MnSO4.H2O 0.2 g/L、CaCO3 1 g/L培养32 h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95%.

源于脾干细胞的破骨细胞诱导生成及培养

目的 建立一种可以获得大量破骨细胞或破骨样细胞的方法 ,以便进行原发性骨质疏松有关破骨细胞的研究。方法 C5 7雌性小鼠经尾静脉注射 5 氟脲嘧啶后 ,取脾细胞悬液在含有rmIL 3 ,rhIL 6和胎牛血清(FCS)以及牛血清白蛋白 (BSA)的α MEM 琼脂半固体培养 7d左右 ,获得脾脏造血干细胞集落 ;此集落再以粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)诱导生成破骨样细胞。结果 经活体观察、酒石酸 抗酸性磷酸酶 (TRAP)染色、扫描电镜检查 ,证实所得细胞为破骨细胞。结论 建立了一种获得大量破骨细胞或破骨样细胞方法 。

微生物标准菌株不同保藏方法的比较

菌株保藏的目的是为了减少标准菌株的死亡、变异、被杂菌污染等情况的发生,因此选择好的菌株保藏方法至关重要。通过对半固体琼脂石蜡保存法、细菌湿种牛奶冻存法和菌株保藏管法这3种方法从操作、保藏时间、占用空间、菌株存活情况4个方面进行比较。结果表明,相较于其他2种方法,菌株保藏管法操作更简单、保藏时间更长、占用空间更小、菌株更不易发生变异和死亡。由此可见,3种方法中菌株保藏管法要优于其他2种方法。

2种教学菌种保存方法的比较

为探讨一种较为理想的教学菌种保存方法，对纸片法与半固体琼脂法进行比较。保存1年和2年后纸片法的菌种存活率明显高于半固体琼脂法。纸片法具有简单、经济、实用等优点，是基层单位较理想的菌种保存方法。