半套式聚合酶链反应检测牛奶中部分肠道致病菌

目的 建立一套食物中的单核细胞增生性李斯特氏菌、耶尔森氏菌和副溶血性弧菌等肠道致病菌的快速检测方法。方法 采用裂解法提取DNA与各自的三条引物进行二次聚合酶链反应扩增(简称半套式PCR),检测模拟阳性牛奶中部分肠道致病菌。结果 常规PCR能检出100个活菌的存在,在其产物进行半套式PCR检测时有10个活菌存在时即可扩增出特异性产物,提高10倍。最低检测限可达10 cfu(集落形成单位)。结论 本方法具有特异性强、敏感性高、简便快速等特点。

母婴配对血清中TT病毒的分子鉴定

为了解TT病毒（TTV）在我国母婴间传播的可能及分子病毒学依据,合成引物（引物1:5’-ACAGACAGAGGAGAAGGCAACATG-3’;引物2:5’CTGGCATTTTACCATTTCCAAAGTT-3’;引物3:5’-GGCAACATGTTATGGATAGACTGG-3＇）,采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR）方法,检测了40对母、婴配对血消中的TTV DNA,并对TTV DNA均阳性的一对母婴配对血清中PCR产物进行测序和序列分析.结果发现:（1）在40例产妇血清中,有5例经半套式PCR检出了TTV DNA,检出率为12.5％;40例脐血中.检出TTV DNA阳性血清1例,阳性率为2.5％.脐血呈阳性的新生儿母亲静脉血中TTV DNA也为阳性.（2）母婴同时检出TTV DNA的血清PCR产物经测序后进行序列比对,二者病毒核苷酸序列的同源性为100％;与日本G2b型代表株核苷酸同源性为98.6％,属于G2b亚型、研究结果表明:TTV存在母婴传播途径,TTV可经胎盘垂直传播.

TTV在黑龙江省不明原因肝炎患者中的比例及其致病性

目的 研究一种肝炎病毒 (输血传播病毒 ,TTV)在黑龙江省不明原因肝炎患者中的比例、疾病的发展过程及健康人的携带情况 ,以探讨输血传播病毒的致病性。方法 采用半套式 聚合酶链反应 (semi nestedPCR)方法对不明原因性肝炎患者 ,包括 4 5例急性肝炎、2 7例慢性肝炎、8例重型肝炎 ,11例健康志愿献血员进行TTV的定性检测。对 9例经过第一步检测TTV DNA阳性的急性恢复期患者行再次检测。结果 80份不明原因性肝炎患者血清中 15份TTV阳性 ,占 18.75 %。其中急性肝炎患者血清中检出 9份TTV阳性 ,占 2 0 % ;慢性肝炎患者血清中检出 5份TTV阳性 ,占 18.5 2 % ;8份重型肝炎中检出 1份TTV阳性 ,占 12 .5 %。其中 9份TTV阳性的急性不明原因性肝炎患者在恢复期采集的第 2份血清TTV检测结果均为阴性。 11份健康志愿献血员的血清中没有检出TTV DNA。结论 输血传播病毒具有致病性。可以引起急性、慢性、重型肝炎 ,临床表现与甲 戊型肝炎的临床表现没有明显区别。急性TTV病毒性肝炎可以痊愈。

SEN病毒D亚型中国株流行病学及序列变异

目的 了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法 分析已知的基因序列设计引物 ,建立半套式PCR检测方法 ,对 5 8份献血者血清样本和 2 5份non A～E肝炎患者血清样本进行了SENV D亚型的检测 ,并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果 无偿献血者中SENV D亚型感染率为 4 5 % ,在non A～E肝炎患者中SENV D亚型感染率为 4 8% ,两者间差异无显著性 ;但在无偿献血者中SENV D亚型的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明 ,各测序株均与已知的SENV D株序列有很高的同源性 ,并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论 建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测 ;SENV D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV D株序列之间有变异。与无偿献血者相比 ,non A～E肝炎患者血清SENV D株无进化上的显著倾向性。在测序的部分ORF1序列中存在一个核苷酸高变区。