半定量聚合酶链反应分析EB病毒相关疾病标本中的EB病毒DNA

EB病毒(EBV)是导致免疫缺陷病人产生传染性单核细胞增多症(IM)、淋巴组织增生症的主要病因,并与Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤等发生密切相关。免疫缺陷病人的原发性EBV感染及再活化感染的实验室诊断常用方法为血清学试验,但较为困难,且与临床资料难以吻合。近年来,用聚合酶链反应(PCR)技术检测EBV DNA。

半定量聚合酶链反应在PCR-RFLP酶切法测定基因多态性中的应用

目的探索将半定量聚合酶链反应方法，应用于PCR-RFLP酶切法以提高基因多态性测定精确性和可重复性。方法PCR扩增81例人维生素D受体基因BsmI位点多态性片段，分别在酶量不同的两种酶切体系中测定基因型；PCR产物经半定量后，再次用上述两种体系酶切。考察4次测定的一致性。结果经产物半定量后用PCR-RFLP法测定VDR基因BsmI多态性，不同酶切系统测得基因多态性的一致性明显优于未经半定量的结果。结论应用半定量PCR方法可明显提高PCR-RFLP酶切法的精确性和可重复性。

用半定量RT-PCR方法分析小麦TaMlo-A1c基因的表达

以小麦稳定表达的肌动蛋白基因(Actin)作为对照,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)技术,对与抗白粉病有关的小麦(TriticumaestivumL.)TaMlo-A1c基因的表达进行了研究。结果发现:TaMlo-A1c基因在小麦的叶、茎、根中均表达,穗中不表达,在白粉菌(Blumeriagraminis(DC.)E.O.Speerf.sp.triticiEm.Marchal,Bgt)诱导不同时间后小麦叶片中的表达稍微有所增强。研究表明,用半定量RT-PCR技术研究小麦基因表达,具有特异性高、操作简便和可靠性强的优点。

用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的影响因素

半定量逆转录聚合酶链式反应(Semi-QRT-PCR)以其灵敏、简捷及特异性高等优点已逐渐成为分析基因表达水平的一种有效手段。着重对用半定量RT-PCR法分析基因表达水平的相关影响因素进行了综合论述,并讨论了半定量RT-PCR法在基因表达研究方面的应用潜力。

1alpha,25(OH)_2维生素D_3对OPG、RANKL在人牙周膜细胞中表达影响的RT-PCR半定量研究

目的 研究 1alpha ,2 5 (OH) 2 维生素D3 (1alpha ,2 5 (OH) 2 vitaminD3 ,1α ,2 5 (OH) 2 vitD3 )对人牙周膜细胞骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG)及破骨细胞分化因子 (receptoractivatornuclearfactorkappaBligand ,RANKL)表达的影响。方法 组织块法培养人牙周膜细胞 ,1α ,2 5 (OH) 2 vitD3 诱导 0、2、4、6天 ,半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscription -polymerasechainreaction ,RT -PCR)检测细胞OPG和RANKL在信使RNA(messengerRNA ,mRNA)水平表达的变化。结果 随着 1α ,2 5 (OH) 2 vitD3 作用时间的延长 ,人牙周膜细胞OPG的表达降低 ,RANKL的表达增高 ,OPG/RANKL比值降低并具有时间依赖性。结论 在 1α ,2 5 (OH) 2 vitD3 对人牙周膜细胞的诱导周期中 ,OPG和RANKL骨代谢通路发挥作用。这一结论为探讨 1α ,2 5 (OH) 2 vitD3

半定量RT-PCR法检测赤霞珠葡萄白藜芦醇合酶STS基因的表达

以赤霞珠葡萄(Vitis vinifera L.)为材料,以Actin基因为内参,采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测葡萄果实发育过程中白藜芦醇合酶(STS)基因表达量的变化,以期建立适于检测该基因表达的RT-PCR试验体系。结果表明,在退火温度58℃,扩增循环31次的时候,STS基因能够进行较好的扩增。在赤霞珠葡萄浆果发育的过程中,花后20、50 d STS基因表达量较少,在花后80 d表达量增到最大,花后110 d又降低。

半定量RT-PCR法检测VCP mRNA与PCNA mRNA在胃癌中的表达

目的通过研究癌旁正常胃组织、淋巴结转移癌组织及胃癌组织中VCP mRNA的表达及其与增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达的相关性,探讨VCP mRNA在胃癌发生发展过程中的可能作用,为胃癌的诊断及预后判断提供分子生物学指标。方法运用半定量RT-PCR技术检测42例胃癌患者胃癌组织、淋巴结转移癌组织、相应癌旁正常胃组织中VCP mRNA、PCNA mRNA的表达水平。结果 (1)VCP mRNA、PCNA mRNA在胃癌组织、淋巴结转移癌组织较相应癌旁正常组织表达显著升高(P<0.01),两者在胃癌组织中的表达丰度与肿瘤的分化、浸润深度、淋巴结转移个数及病理TNM分期有相关性(P<0.05);(2)VCP mRNA、PCNA mRNA在胃癌组织中表达存在正相关关系(r=0.631,P<0.01)。结论胃癌组织中VCP mRNA高表达可能是上调PCNA mRNA表达的一个因素,对于肿瘤的发生发展具有重要影响,联合检测两分子指标的表达对预测胃癌患者预后?指导治疗有一定临床辅助意义。

Ptcor8表达与枳生理落叶及温度的关系

将干径粗度相近的2年生枳实生容器苗60株从田间移入温室(20～25℃),以田间10株为对照.从2008年11月14日至2009年1月3日,每10d从温室随机搬出3株置于田间,研究枳叶片中Ptcor8的表达与枳生理落叶及环境温度的关系.结果表明,温室里的枳冬季不落叶;从温室搬至田间的枳,随着搬出温室时间的延后,其落叶期推迟;12月中旬后搬出温室的枳,即使经历冬季低温也不落叶.在落叶和未落叶的枳叶片中,均能检测到Ptcor8的表达,qPCR结果表明,Ptcor8的表达与枳的生理落叶无关,其表达量的明显增加与骤然降温和持续低温有关,与低温关系密切.

黄鳝性腺发育过程中Amh和SOX9基因的表达分析

文章研究了黄鳝性腺发育过程中抗苗勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,Amh)基因和Sry相关高泳动类非组蛋白基因9(Sry-related high mobility group-box gene 9,SOX9)2个基因的表达量变化及关系,进而推断其基因表达通路,为研究黄鳝性逆转过程中基因的调控理论奠定基础。文章提取黄鳝Ⅰ龄卵巢(Ⅱ期卵巢)、Ⅲ龄卵巢、Ⅱ龄间期性腺早期、Ⅱ龄间期性腺后期、Ⅲ龄精巢5个时期的性腺组织RNA并反转录成cDNA,通过半定量和荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对其表达量进行定量分析。结果表明,Amh和SOX9基因在黄鳝性腺发育过程中的表达没有特异性,随着卵巢的败育和精巢的发育,表达量明显升高。Amh基因在Ⅲ龄精巢表达有显著增高,SOX9基因的表达量高于Amh(Ⅲ龄精巢例外)。Amh和SOX9基因的表达呈现正相关,后期Amh基因的表达量显著升高可能是由于存在一个诱导SOX9基因表达的信号,两者在黄鳝性逆转过程及精巢的发育过程中存在一定的协同关系,可能存在Amh—SOX9基因信号通路。

糖尿病大鼠肾皮质转移生长因子-β基因表达探讨

目的 :观察转移生长因子 β在糖尿病肾病中的作用。方法 :用逆转录半定量聚合酶链反应 (RT PCR )法测定 12只STZ模型鼠 (糖尿病组 )及 8只对照组鼠的肾皮质转移生长因子 β的基因表达。结果 :糖尿病组鼠肾皮质转移生长因子 β较对照组明显升高 (P <0 0 1)。结论 :糖尿病后期转移生长因子 β生成增加 ,加剧了糖尿病肾脏病变的进展。

环状RGDfK肽对肌成纤维细胞整合素αVβ3表达调控的实验研究

目的探讨环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-脯氨酸-赖氨酸短肽(Cyclo-RGDfK)能否提高去细胞瓣对肌成纤维细胞(myofibroblast)的黏附性能,以及RGD肽对Integrin αVβ3基因表达的调控。方法组织块培养法获取大鼠主动脉壁肌成纤维细胞(myofibroblast),免疫荧光染色检测波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)分子在培养myofibroblast中的表达。将去细胞瓣随机分为3组(每组7个),A组:去细胞瓣未接受任何处理;B组:去细胞瓣与交联剂1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)反应36h;实验组:去细胞瓣与EDC反应36h后,再与Cyclo-RGDfK反应24h,使RGD肽共价结合于去细胞瓣。将第5代myofibroblast分别接种至各组瓣膜上。HE染色和扫描电子显微镜观察细胞黏附增殖状况,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Integrin αVβ3基因在各组的表达。结果免疫荧光染色显示原代培养的myofibroblast生长良好,高表达Vimentin和α-SMA分子。HE染色和扫描电子显微镜显示myofibroblast在实验组的生长好于A组和B组,半定量PCR示Integrin αVβ3 mRNA在实验组的表达高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.05),而A组与B组比较差异无统计学意义(P=0.900)。结论Cyclo-RGDfK促进myofibroblast在去细胞瓣上黏附,此效应可能与RGD肽上调Integrin αVβ3基因表达有关。

鹅胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的克隆及其mRNA在组织中的表达量变化

利用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆了黑龙江籽鹅IGF-Ⅰ基因,并检测了生长期间该基因mRNA在各组织中的表达量变化。结果表明,鹅IGF-Ⅰ基因与鸡、鸭IGF-Ⅰ基因的同源性分别为97.6%、99.3%;鹅肝组织中IGF-ⅠmRNA的表达水平在30日龄和60日龄较高,而30日龄的表达量极显著高于22、28日龄鹅胚和1日龄籽鹅,显著高于10日龄雏鹅;30日龄雏鹅IGF-ⅠmRNA在肝、卵巢、胸肌、肺、脾、腿肌、垂体、肌胃、肾、心等组织中都有表达,其中肝、卵巢、胸肌、肺的表达量较高。

纳米硅对Cd胁迫下水稻幼苗γ-ECS基因表达的影响

为了探明外源纳米硅对缓解植物Cd毒害的分子机制,本文以核基因延伸因子(EF-1α)作为内参,利用半定量反转录聚合酶链式反应技术,对Cd胁迫下的水稻γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)基因的表达进行了研究。结果发现:γ-ECS基因在水稻的叶、根中均表达,外源纳米硅不同时间处理后水稻叶片和根中γ-ECS基因的表达稍微有所增强。研究表明,用半定量RT-PCR技术研究水稻基因表达,具有特异性高、操作简便和可靠性强的优点。

原发性肝癌Plk1基因表达及其与预后的相关性

目的:分析Plk1基因在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,及其与预后的关系.方法:用半定量RT-PCR及Western blot方法检测我院2003-01/2008-05原发性肝癌患者213例的Plk1基因蛋白表达,同时应用Kaplan-Meier法及多变量Cox比例险模型,分析Plk1基因的表达及临床病理因素与预后的关系.结果:Plk1基因在肝癌组织中阳性表达率为83.6%.Plk1阳性组的1、3、5年的生存率明显低于阴性组(P=0.004).原发性肝癌的预后与Plk1阳性表达,Edmondson分级,肉眼癌栓,显微癌栓及肿瘤数目相关;与HBsAg、肝硬化、AFP、假包膜、肿瘤大小无关;多因素Cox回归分析显示Edmondson分级、Plk1基因蛋白表达、肉眼癌栓及肿瘤数目4项指标反映肝癌预后情况,危险度分别为1.717、1.938、1.537及2.355.结论:Plk1基因的检测有助于有高危肝癌患者的选择,为Plk1基因靶向治疗肝癌提供了有力依据.

雌激素对大鼠心脏雌激素受体α和β表达的影响

目的研究雌激素受体(ER)α和β在新生、成年和卵巢切除大鼠心脏的表达.方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法,分析新生和成年大鼠心脏各部的ERα和β mRNA及ER蛋白质的表达,探讨不同剂量的17β-雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和β mRNA、ER蛋白质的表达调控及对心房、心室重量和它们与体重比变化的影响.结果ERα mRNA在新生大鼠心脏各部表达较低,而成年大鼠心脏各部ERαmRNA的转录水平提高3～20倍,这种差别体现在ERα蛋白质的表达水平不同.反之新生大鼠心脏ERβ mRNA表达水平较高,而成年大鼠心脏ERβmRNA的表达降低2～7倍.卵巢切除减少成年大鼠心房ERα mRNA和蛋白质的表达,减轻心房重量及心房/体重比;17β-雌二醇替代却能反转这些改变,同时随着血浆17β-雌二醇水平的增高,这种影响在一定程度上呈剂量依赖关系.卵巢切除和17β-雌二醇替代并不改变心脏和心室/体重比,也不影响ERβmRNA的表达.结论雌激素受体α和β在新生和成年大鼠心脏的表达存在差别,ERβ可能在大鼠心脏的发育过程中起重要作用,ERα是雌激素对成年大鼠心脏调控的优势受体;雌激素的主要靶器官是心房,且通过其受体的介导促进心房肌细胞的增生.

膀胱移行细胞癌中间隙连接蛋白Cx43 mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及其相关性研究

目的探讨间隙连接蛋白Cx43、Bcl-2及Bax在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其意义。方法用半定量RT-PCR的方法检测Cx43、Bcl-2及Bax在35例BTCC和21例癌旁组织中的表达情况,并分析其与BTCC临床病理因素的关系。同时取正常膀胱组织15例做对照。结果 BTCC组织中Cx43 mRNA的表达比值[Cx43/人肌动蛋白(β-actin)]为(0.34±0.37),低于BTCC癌旁组织中的(0.79±0.70)和正常膀胱组织的(0.81±0.47),差异有统计学意义(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达比值为(0.35±0.43),高于癌旁组织中的(0.16±0.33)和正常膀胱组织的(0.15±0.23),差异有统计学意义(P<0.01)。癌旁组织与正常膀胱组织Cx43 mRNA及Bcl-2mRNA的表达比值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Cx43 mRNA在BTCC病理分级G3的表达为(0.30±0.16),G2的表达为(0.54±0.22),G1的表达为(0.60±0.25),3个级别比较差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2 mRNA在BTCC病理分级G3的表达为(0.47±0.15),G2的表达为(0.35±0.11),G1的表达为(0.24±0.10),3个级别间比较差异有统计学意义(P<0.01)。复发BTCC组织中Bcl-2 mRNA的表达水平(0.40±0.15)高于初发癌组织(0.28±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。Bax mRNA在BTCC组织、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Bax mRNA的表达水平与BTCC患者的肿瘤分期、病理分级以及肿瘤有无复发比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 Cx43表达下调与BTCC的发生、进展及其恶性特征有关,Cx43基因可能与凋亡相关基因Bcl-2(或Bcl-2/Bax)在BTCC的发展中起拮抗作用,与细胞的凋亡过程有关。

急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达

背景:据作者查新检索,国内外有关急性白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因表达的报道罕见。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞TAp63基因的表达及其意义。方法:50例急性淋巴细胞白血病患者,其中32例急性B淋巴细胞白血病,18例急性T淋巴细胞白血病。同期选择27例非恶性血液病患者作为对照。取肝素抗凝的骨髓液2～4mL,用Ficoll液分离骨髓单个核细胞,半定量反转录聚合酶链反应法检测TAp63的表达。结果与结论:50例急性淋巴细胞白血病患者有49例表达TAp63,急性淋巴细胞白血病组明显高于非恶性血液病组(P<0.05),急性B淋巴细胞白血病表达水平显著高于急性T淋巴细胞白血病(P<0.05)。动态观察了5例初治急性淋巴细胞白血病化疗后不同阶段TAp63的表达变化,发现初治时TAp63表达,缓解后低表达或不表达,复发后又表达。结果表明TAp63在急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞的表达明显高于非恶性血液病患者,尤其在急性B淋巴细胞白血病患者中高表达。

心房颤动患者氯电流相关通道CIC-3基因表达的研究

目的:研究心房颤动(AF)患者心房组织氯电流相关通道ClC3的基因表达,探讨AF时心房组织ClC3的mRNA表达改变及其意义。方法:将71例风湿性心瓣膜病接受换瓣手术患者分为3组:窦性心律组(SR组)31例,阵发性房颤组(PAF组)7例,持续性房颤组(CAF组)33例,术中获取右心耳组织,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测心房组织ClC3的mRNA表达的相对含量。结果:与SR组相比,PAF组心房组织中ClC3的mRNA表达增加,但无显著的统计学意义(P>0.05),CAF组的表达明显增加(P<0.01),并与AF时程呈明显正相关(r=0.376,P=0.001)。结论:房颤患者ClC3的mRNA表达水平的增加可能是细胞容量调节的氯电流(ICl.VOL)上调的分子基础。

大豆防御应答相关WRKY转录因子的克隆与表达分析

WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过RT-PCR方法获得了与拟南芥转录因子WRKY14的相似性高达92%的大豆WRKY转录因子GmWRKY的cDNA序列,并利用半定量RT-PCR分析了GmWRKY在大豆不同组织中及不同非生物胁迫下的表达情况。结果表明:GmWRKY在大豆根、茎、叶中均有表达。在铝、低磷、盐等胁迫下,GmWRKY表达均有不同程度的增加,说明非生物胁迫下GmWRKY在大豆抗逆中可能发挥重要作用。

PTN和MK在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨pleiotrophin(PTN)和midkine(MK)mRNA在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及意义。方法:采用病例对照研究方法,以35例EMs患者在位和异位子宫内膜(研究组)以及25例非EMs妇女子宫内膜(对照组)为样本,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTN、MK mRNA的表达。结果:研究组在位内膜中PTN和MK表达均明显高于对照组(P<0.01);异位内膜PTN mRNA表达高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。EMs在位内膜中PTN、MK mRNA表达与内异症的临床期别呈正相关。无论增殖期或分泌期,EMs在位内膜中PTN、MK表达均高于对照组(均P<0.05)。结论:EMs患者在位子宫内膜组织中PTN和MK表达的变化可能与子宫内膜异位症的发生、发展有关。