小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC_(50)的计算方法

半数抑制浓度、半数致死量等半数量是分析和比较药效及毒效的重要数值,可用以测定药物安全性、比较效价等,其具体应用范围广泛,但计算相同。本文阐述了半数抑制浓度(IC50)的概念、含义、计算原理以及几种具有实际应用价值、精密度较好的计算方法。重点讨论在MTT法测药物对细胞增殖抑制的影响中计算IC50的特点和注意事项等,对正确、简便求解IC50值进行了初步探讨。

三氧化二砷联合顺铂对人结肠癌细胞株colon26抑制作用机理的研究

目的:探讨三氧化二砷(ArsenicTrioxide,As2O3)联合顺铂(Cisplatin,CDP)对人结肠癌细胞株colon26的抑制作用及其机制。方法:用MTT法检测CDP和As2O3对colon26细胞的半数抑制浓度(IC50)及其抑制率。用荧光染色法琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡形态学变化。用流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:IC50浓度的As2O3、CDP和1/2IC50(CDP)+1/2IC50(As2O3)对colon26细胞的抑制率分别为50.13±0.29%、55.26±0.63%和75.82±0.24%。AO/PI双荧光染色观察,正常对照组、As2O3组、CDP组、联合组细胞凋亡比率依次增加。As2O3处理组G2/M期细胞明显增多,而CDP处理组G0/G1期细胞明显增多,联合用药组则主要表现为S期细胞增多,组间差异有显著性(P<0.01)。CDP处理组与对照组相比Bcl-2/Bax的表达无变化,As2O3与CDP联合作用时和As2O3单独作用时相比,Bcl-2/Bax无变化。结论:低浓度As2O3和CDP联合应用与两药高浓度单独应用相比,对colon26细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。As2O3联合CDP抗colon26细胞的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

不同尺寸三氧化二铁(Fe_2O_3)纳米粒子的细胞毒性及氧化作用的实验研究(英文)

目的从细胞半数抑制浓度IC50和氧化作用的角度探讨不同粒径大小纳米Fe2O3粒子细胞毒性的差异。方法将8、13和37nm3个不同尺寸的纳米Fe2O3粒子以不同剂量、作用时间作用于CHL细胞。用活细胞计数法求得各尺寸粒子的IC50,并绘制细胞生长抑制曲线。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化歧化酶(SOD)活性。结果3种尺寸的纳米粒子在一定浓度范围内,剂量与细胞抑制率呈现“剂量-反应”关系,超过这一范围后,量效关系消失;在量效相关的浓度范围内,三个尺寸纳米粒子的IC50分别为:IC50(8nm)=279.8585μg/mL,IC50(13nm)=254.739μg/mL,IC50(37nm)=561.237μg/mL;纳米Fe2O3粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应。且与作用时间有关。但MDA、SOD值变化与纳米粒子尺寸、作用剂量之间无明显的量效关系。结论不同粒径的纳米Fe2O3粒子在细胞毒性上表现出一定的差异。同时,纳米Fe2O3粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应。从时效性分析推论其细胞毒性与氧化性存在一定的关联。

不同粒径纳米Fe_2O_3的细胞毒性及氧化作用

目的 从细胞半数抑制浓度IC50 和氧化作用的角度探讨不同粒径Fe2 O3 纳米粒子细胞毒性的差异。方法 将8,13和37nm 3个不同尺寸的Fe2 O3 纳米粒子以不同剂量、时间作用于中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL) ,用活细胞计数法求得不同尺寸粒子的IC50 并绘制细胞生长抑制曲线。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化歧化酶(SOD)活性。结果 (1) 3种尺寸的纳米粒子在一定浓度范围内,剂量与细胞抑制率呈现剂量-反应关系,而超过这一范围后,量效关系消失。(2 )在量效相关的浓度范围内,3种尺寸纳米粒子的IC50 分别为IC50(8nm) =2 79 .5 85 μg/ml,IC50 (13nm) =2 5 4 739μg/ml,IC50 (37nm ) =5 6 1. 2 37μg/ml。(3)Fe2 O3 纳米粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应,且与作用时间有关。但MDA、SOD值变化与纳米粒子尺才、作用剂量之间无明显的量效关系。结论 不同粒径的Fe2 O3 纳米粒子在细胞毒性上表现出一定的差异,Fe2 O3 纳米粒子可引起CHL细胞的氧化应激反应,从时效性分析推论其细胞毒性与氧化性存在一定的关联。

三唑巴坦对β-内酰胺酶抑制作用的研究进展

三唑巴坦是第三个上市的β-内酰胺酶抑制剂,具有抑酶活性强,抑酶谱广等特点,对绝大多数A类β-内酰胺酶有较强的抑制作用,对C类和D类β-内酰胺酶也有一定的的抑制作用。因此,三唑巴坦在临床产酶耐药菌所致感染性疾病的治疗中具有重要作用。但不可忽视的是,三唑巴坦上市20余年来已有30余种耐三唑巴坦的耐酶抑制剂β-内酰胺酶在欧美国家出现,而对三唑巴坦敏感性较差的β类酶在我国也有报道,这些酶的出现和流行将严重威胁三唑巴坦在临床中的使用。本文将三唑巴坦抑酶作用的分子机制、对各类β-内酰胺酶的抑制作用以及耐酶抑制剂与β-内酰胺酶的构效关系作一综述。

β-内酰胺酶抑制剂高通量筛选模型的建立

目的建立β-内酰胺酶抑制剂的高通量筛选模型。方法从产β-内酰胺酶菌株中提取酶液,以硝噻吩为底物,三唑巴坦作为酶抑制剂,通过检测反应体系吸光度的变化,来判断酶促反应的进行情况以及酶抑制剂的效果,建立384微孔板的高通量筛选模型,优化反应条件并对此模型进行评价。用此模型对7360个化合物组成的随机库进行筛选。结果确定反应体系条件为:最佳测定波长为482nm,反应温度为30℃,选取15min时间点检测,底物硝噻吩终浓度为0.1mmol/L,评价指标Z′因子在0.8～0.9范围内,表明此模型可以用于高通量筛选。基于此模型初筛出65个有抑制活性的化合物。结论建立的β-内酰胺酶抑制剂高通量筛选模型具有快速、稳定和微量的特点,是寻找和发现有潜在活性的β-内酰胺酶抑制剂的有效手段。

桑叶不同提取部位对α-葡萄糖苷酶抑制活性体外研究

目的建立体外α-葡萄糖苷酶抑制活性评价体系,观察桑叶不同提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。方法经大鼠小肠获得α-葡萄糖苷酶,以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(p NPG)为底物,以阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照,测定桑叶水提液(WE)、水提上清液(AP-A)、水提沉淀(AP-P)及75%乙醇提取液(EE)对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。结果桑叶不同提取液均有α-葡萄糖苷酶抑制活性,不同提取液的半数抑制浓度(IC50)分别是WE:0.08 g/L;AP-A:0.17 g/L;AP-P:0.42 g/L;EE:0.12 g/L;桑叶提取液α-葡萄糖苷酶抑制活性强弱顺序为:WE>AP-A>EE>AP-P,其中WE IC50小于Acarbose(0.11 g/L)。结论桑叶水提液抑制α-葡萄糖苷酶活性作用最强,为桑叶在该机制发挥降糖作用的主要活性部位,体外α-葡萄糖苷酶活性抑制评价体系可作为该药效成分筛选平台。

力达霉素抗肝癌作用的实验研究

目的观察力达霉素(LDM)在体外、体内对肝癌的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定力达霉素和丝裂霉素C对人肝癌BEL-7402细胞及小鼠肝癌22细胞的增生抑制作用。以小鼠移植性肝癌22模型观察不同剂量力达霉素的治疗效果。结果力达霉素和丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.0030±0.0006)nmol/L和(150±27)nmol/L。力达霉素对小鼠肝癌22细胞的IC50为0.025nmol/L。体内试验:力达霉素静脉给药1次及延迟静脉给药3次对小鼠移植性肝癌22细胞的生长均有显著抑制作用。当通过静脉给予1次力达霉素剂量为0.025、0.05和0.1mg/kg时对肝癌22细胞抑瘤率分别为62%、72%和85%。结论力达霉素在体外对肝癌细胞增生有强烈的抑制作用。

石香薷挥发油体外抗病毒作用研究

摘 要: 采用有机溶剂法提取了石香薷挥发油,采用体外细胞培养的方法研究石香薷挥发油对新城疫病毒(NDV)感染的拮抗作用,测定其对鸡胚成纤维细胞的最大无毒浓度(TD0 )、半数细胞中毒浓度(TD50 )、抑制50%细胞病变的药物浓度(IC50 )、治疗指数(TI)及体外抗NDV效果。试验结果表明:石香薷挥发油的TD0、TD50、IC50、TI分别为1 56g/l、3 13g/l、0 20g/l、15 65,石香薷挥发油0 79g/l对NDV所致的CPE有明显的抑制作用,证明石香薷挥发油具有明显的抗NDV作用,提示石香薷挥发油可以作为一种新的抗NDV感染的药物。

脂氧合酶抑制剂抑制HepG2细胞增殖的研究

目的探讨脂氧合酶抑制刑对HepG2细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞，应用不同浓度脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)处理HepG2细胞，利用MTT比色法、生长曲线、细胞克隆形成试验观察NDGA对HepG2细胞增殖的影响。结果NDGA对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用，不同浓度的NDGA(50、100、150、200μmol/L)处理HepG2细胞72h的抑制率分别为27．34％、41．76％、57．08％和69．17％，其IC50值为109．13μmol／L。细胞克隆形成率分别为21．63％。17．33％，12．53％，7．97％，明显低于对照组的31．70％。结论NDGA对HepG2细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖。

16种中药水提物和醇提物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

为了筛选治疗禽痛风病的中药,试验对16种中药进行了水提和醇提,并检测提取物对黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的体外抑制作用,采用紫外分光光度法确定反应体系的检测波长、酶浓度、检测时间,并检测同一水提和醇提条件下的16种中药提取物对XOD的抑制率,测定每种中药的半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明:检测波长为292 nm,酶浓度为34.0μg/mL,检测时间为第1,2,3,4,5,6,7,8,9,10分钟;同一种中药的水提物和醇提物对XOD的抑制作用存在一定差异;中药水提物中抑制效果较好的有黄柏、土茯苓、槐花、高良姜、山慈菇,其IC_(50)分别为12.60,15.98,19.66,29.65,31.68 mg/mL;中药醇提物中抑制效果较好的有土茯苓、瞿麦、槐花、牛膝、山慈菇,其IC_(50)分别为14.89,16.99,23.44,29.48,29.61 mg/mL。说明同一种中药水提物和醇提物对XOD抑制作用存在一定差异。

罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1的影响

目的 CYP2E1是肝脏中主要的药物代谢酶,在肝脏疾病发生及发展中发挥重要的作用。本实验分别通过体内、体外实验,研究罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1活性和表达的影响,为评价罗布麻茶对肝脏的保护作用和药物的联合使用提供理论依据。方法将30只昆明小鼠随机分为空白对照组、黄酮提取物低剂量组和高剂量组(50和100 mg/kg),连续灌胃给药10天。采用探针药物法测定小鼠肝脏微粒体中CYP2E1催化对硝基苯酚代谢的活力。采用Western Blot法检测肝脏微粒体中CYP2E1蛋白的表达情况。体外抑制实验中,考察不同浓度的黄酮提取物对CYP2E1的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC_(50))值。结果灌服高剂量黄酮提取物(100 mg/kg)后,小鼠体内CYP2E1酶活性和表达量均显著降低,黄酮提取物对CYP2E1的IC_(50)值为128.4μg/mL。结论罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1有抑制作用。

Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤

目的:研究Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤作用。方法:用Isogoniotriol衍生物处理体外培养白血病K562细胞,MTT法测定IC50,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞核DNA的损伤。结果:Isogoniotriol衍生物处理K562细胞IC50为4×10-5mol/L,不同浓度的Isogoniotriol衍生物处理细胞后可见彗星状拖尾。结论:Isogoniotriol衍生物可造成肿瘤细胞DNA损伤,抑制肿瘤细胞生长。

速尿、苯氧比酸、硫唑嘌呤对慢性炎症性肠病患者红细胞TPMT活性的影响

目的:研究利尿剂速尿、苯氧比酸及其硫唑嘌呤对慢性炎症性肠病患者红细胞硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的影响。方法:应用高效液相法(HPLC)测定慢性炎症性肠病患者红细胞TPMT活性,其中中等活性、正常活性、较高活性的患者各6例,依据浓度效应曲线计算每个药物的IC50。结果:速尿对TPMT活性的抑制作用较强,平均IC50为15～19μmol·L-1,在健康志愿者的正常血浆浓度范围内。苯氧比酸和硫唑嘌呤的平均IC50值分别为300～313μmol·L-1、430～532μmol·L-1,均远高于体内所能达到的血浆浓度。3种药物的IC50值在3个不同TPMT活性组间无明显差异(P>0.05)。结论:速尿可抑制红细胞TPMT活性,当速尿和硫嘌呤类药物合用时,应警惕发生不良相互作用。

汞对斜生栅藻的急性毒性研究

为研究水体中汞对斜生栅藻生长的影响,将斜生栅藻在含有不同浓度汞的培养液中培养,分别在24h、48h和96h测650nm的吸光度值,并对斜生栅藻中的汞浓度做了检测。结果表明,培养液中汞的存在对斜生栅藻生长均有抑制作用,并随浓度的递增,抑制作用增强,同时表明斜生栅藻对汞具有一定的富集作用。经Logist回归分析,求得24h、48h和96h汞抑制斜生栅藻生长的半数抑制浓度(IC50),分别为9.4471×10-6、8.8156×10-6和7.4648×10-6mol/L。

盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用。方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响。结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64μmol.L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49μmol.L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25μmol.L-1,TI值分别为2.93,2.41。结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用。

新型除草剂丙酯草醚的作用机理

采用常规的室内生测和生化方法,开展新型除草剂丙酯草醚的作用机理研究。试验结果表明:同时添加5mg/L 浓度的三种支链氨基酸即缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸能完全恢复丙酯草醚对高粱茎的生长抑制作用,而添加相同浓度的单一支链氨基酸只能部分消除其抑制作用。离体条件下,丙酯草醚 IC_(50)>100mg/L,而双草醚 IC_(50)值为10^(-5)～10^(-4)mg/L,说明丙酯草醚对离体 ALS 没有抑制作用;活体条件下,丙酯草醚对 ALS 有一定的抑制作用,且随着处理时间的延长,酶活力降低,对 ALS 的抑制作用增加。因此,丙酯草醚使植物体内必需的支链氨基酸合成受阻,仍然属于 ALS 抑制剂,但其作用方式不同于磺酰脲类和嘧啶水杨酸类除草剂等典型的 ALS 抑制剂,它类似于前体农药,即在植物体内通过代谢活化来发挥作用。

罗库溴铵、维库溴铵及混合应用对骨骼肌成人型、胎儿型乙酰胆碱受体的作用

目的研究罗库溴铵和维库溴铵及其混合应用对骨骼肌细胞膜上成人型乙酰胆碱受体(ε-nAChR)和胎儿型乙酰胆碱受体(γ-nAChR)的作用。方法先在HEK293细胞膜上,应用脂质体转染技术表达ε-nAChR和γ-nAChR,再用全细胞膜片钳技术,比较罗库溴铵和维库溴铵及其混合应用对ε-nAChR和γ-naAChR引起峰电流的影响。结果维库溴铵和罗库溴铵均能竞争性抑制乙酰胆碱对ε-nAChR和γ-nAChR的激动作用。罗库溴铵和维库溴铵抑制ε-nAChR的半数有效抑制浓度(IC50)为169.2±12.5和(8.3±2.7)μmol/L(P<0.01),抑制γ-nAChR的IC50分别为8.6±2.7和(55.0±10.4)μmol/L(P<0.05)。两药混合应用抑制ε-nAChR的IC50为(0.7±0.3)/μmol/L;抑制γ-nAChR的IC50为(36.3±14.2)μmol/L。结论罗库溴铵对γ-nAChR的抑制作用比对ε-nAChR的作用强,而维库溴铵的作用正相反;对于ε-nAChR罗库溴铵的效能低于维库溴铵,而对γ-nAChR作用则相反;两药混合后对ε-nAChR是协同作用,对γ-nAChR却是相加作用。

利多卡因和维拉帕米对药物增敏作用比较研究

目的比较利多卡因和维拉帕米对乳腺癌细胞抗肿瘤药物的增敏作用。方法应用微量细胞培养四氮唑(MTT)法检测乳腺癌细胞系MCF-7对三种抗癌药物5-FU、MMC和CDDP敏感性。观察利多卡因和维拉帕米对三种化疗药物的增敏作用,并比较两药增敏作用之差异。结果 MCF-7对三种化疗药物均敏感,并随药物浓度的升高存活率降低。利多卡因和维拉帕米与三种化疗药物合用后分别降低三种化疗药物的半数抑制浓度(IC50),利多卡因比维拉帕米增敏作用强(P<0.01),加入利多卡因的增效倍数分别为27.4、30.1、59.1,而加入维拉帕米的增效倍数分别6.09、11.2、5.47。结论 MCF-7对三种化疗药物(5-FU、MMC及CDDP)均敏感,利多卡因和维拉帕米对三种化疗药物均有增敏作用,利多卡因比维拉帕米的增敏作用强。

黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶靶点占有率的模拟分析

目的:模拟分析黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶体内靶点占有率。方法:通过体外酶促反应测定非布司他、黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度(IC_(50)),利用分子对接技术对其结合自由能进行预测,同时,采用表面等离子共振技术测定其结合速率常数(k_(on))和解离速率常数(k_(off))。基于测定的结合动力学参数和提取的药物代谢动力学数据建立体内靶点占有率模型。结果:非布司他、黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶的IC_(50)分别为0.0027,1.63,0.38,1.59μmol·L^(-1),非布司他的IC_(50)与文献报道一致。预测的非布司他体内靶点占有率曲线与其临床药效持续时间相吻合。当大鼠按100 mg·kg^(-1)单次灌胃给予槲皮素长循环脂质体时,体内靶点占有率>70%的持续时间约3.9 h;当大鼠按200 mg·kg^(-1)单次口服给予黄芩素和高良姜素时,体内靶点占有率>50%的持续时间分别约为10,1.7 h。结论:利用药靶结合动力学和体内药代动力学曲线建立的黄嘌呤氧化酶靶点占有率预测模型能有效地评估化合物对靶点的体内抑制活性。