半枝莲抑制肿瘤血管生成的作用及其机制研究

背景与目的:以血管再生作为靶点的诸多化学合成药物在有效抑制血管生成的同时具有不可抵抗的副作用,近年来国内外都在致力于从天然药物中开发肿瘤血管生成阻断剂。作为传统抗癌有效药物半枝莲,其阻断血管生成的作用研究少见报道。本实验拟探讨其对肿瘤血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法:采用Matrigel栓、原代人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheialcell,HUVEC)建立体内外血管生成模型,观察半枝莲对血管生成的影响;通过Transwell小室趋化实验检测半枝莲对宫颈癌细胞HeLa培养上清诱导内皮细胞迁移能力的影响;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测半枝莲对HeLa细胞血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平的影响。结果:半枝莲能明显抑制Matrigel栓内微血管的形成;体外小管形成实验发现,20%、40%半枝莲含药血清组小管形成数为(5.6±1.1)、(1.0±0.7),与同浓度空白血清组(9.8±1.3和13.4±1.1)相比有显著性差异(P值分别为0.001、0.000)。经20%、40%半枝莲含药血清处理后内皮细胞迁移数分别为(19.75±2.63)、(14.00±2.58),明显少于同浓度空白血清组(24.25±2.06和26.50±4.65)(P值分别为0.038、0.006)。40%含药血清作用24、48h后HeLa细胞VEGF表达量分别为(138.67±9.50)、(93.84±41.11),与空白血清组(195.82±2.43和193.68±18.37)相比具有显著性差异(P值分别为0.006、0.036)。结论:半枝莲能有效抑制肿瘤血管生成,其机制可能与阻断内皮细胞迁移、下调VEGF蛋白表达有关。

半枝莲不同极性提取物对人胚肾细胞体外活性的影响

目的观察抗肿瘤中药半枝莲不同极性提取物对人胚胎肾脏细胞体外活性的影响。方法分别提取半枝莲的水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯和正丁醇等5种提取物,用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测不同极性提取物的成分差异,用MTT法测定半枝莲不同极性提取物对人胚胎肾脏细胞HEK293增殖的影响。结果半枝莲不同极性提取物组成呈现明显差异,乙醇提取物与甲醇提取物的组成较为相似,而正丁醇提取物与乙酸乙酯提取物较为相似,水提取物则与其他提取物均存在较大差异。细胞活性试验表明,水、乙酸乙酯和正丁醇提取物(0.01、0.1、1、20 g/L)培养48小时后对HEK293的体外增殖无明显影响,而用浓度为0.01、0.1、1、20g/L的甲醇提取物和0.1、1、20 g/L的乙醇提取物培养48小时后对细胞增殖则呈现一定程度的抑制(均P<0.05)。结论本研究提示,抗肿瘤中药半枝莲的水、乙酸乙酯和正丁醇提取物对肾细胞活性无影响,而甲醇和乙醇提取物存在细胞活性抑制现象。

半枝莲对白血病细胞株K562/A02细胞P-糖蛋白表达的影响

目的:观察半枝莲对白血病细胞株K562/A02细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法:用浓度梯度的半枝莲含药血清处理K562细胞耐药细胞株K562/A02,用流式细胞术FCM法检测K562/A02细胞内P-gp表达。结果:半枝莲能够有效抑制K562/A02细胞内P-gp的表达,呈剂量依赖性。结论:半枝莲可能通过抑制P-gp的表达来降低肿瘤细胞的多药耐药性。

清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H_(22)细胞的作用及免疫学机制比较

【目的】比较清热解毒中药和补益类中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制。【方法】选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药,并与补益代表药黄芪进行比较;将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组)。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天,冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、 15、15 g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,连续12 d;热休克组小鼠以43℃热处理20 min,每4天1次,共3次;模型组不予任何处理。12 d后处死小鼠,分别抽取腹水制片,光镜下观察细胞形态,并采用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8+T细胞表达。【结果】冬凌草组、半枝莲组和热休克组见腹水肝癌H22细胞大量坏死和凋亡,黄芪组对肿瘤细胞形态无明显影响;冬凌草组和半枝莲组腹水中CD4+、CD8+表达均升高,而热休克组则主要是CD8+表达升高,黄芪组以CD4+表达升高为主。【结论】清热解毒中药可致小鼠腹水肝癌H22细胞坏死和凋亡,机制可能与其提高细胞免疫功能,从而增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力有关。黄芪未见有直接杀伤肿瘤细胞的作用,其抗肿瘤作用可能主要是通过提高CD4+的表达而实现的。