半枝莲碱B抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导DNA损伤与凋亡的实验研究

目的:探讨半枝莲碱B(SBT-B)对人胶质瘤U251细胞增殖、DNA损伤和凋亡的影响。方法:U251细胞经SBT-B(0.05、0.1和0.2μmol/L)处理24 h,台盼蓝染色检测细胞活力;参照半数抑制浓度(IC50),将U251细胞分为对照(control)组和SBT-B处理组(处理浓度分别为0.05、0.1和0.2μmol/L);5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)掺入法检测SBT-B对U251细胞增殖的影响;免疫荧光染色检测DNA损伤;TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡;同时,SBT-B处理U251细胞24 h,Western blot检测细胞凋亡、DNA损伤修复及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白表达水平。结果:SBT-B显著抑制U251细胞活力和增殖(P<0.05)。U251细胞经SBT-B作用24 h后,磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)灶点形成及表达水平显著增加(P<0.05),DNA损伤修复蛋白Rad51的表达水平则下调(P<0.05);SBT-B显著诱导U251细胞凋亡(P<0.05),同时促进caspase-8、caspase-9和聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的剪切(P<0.05)。SBT-B处理24 h后,细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38 MAPK的磷酸化水平显著增加(P<0.05)。结论:SBT-B抑制U251细胞增殖,并诱导细胞DNA损伤和凋亡,其可能通过激活MAPK信号通路而对胶质瘤细胞发挥抑制作用。

液质联用分析芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B在小鼠灌胃给药后体内的组织分布

目的:建立UPLC-MS同时测定小鼠组织中芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B的分析方法,并对该3种成分在小鼠体内的组织分布进行研究。方法:以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷^(-1),9(11)-二烯-28-酸甲酯(CDDO-Me)为内标,通过甲醇沉淀组织样品蛋白,使用LC-MS技术进行定量分析,采用ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,正、负离子检测模式,检测离子质荷比(m/z)为芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B 558.4和CDDO-Me 506.7。结果:在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B分别在0.005 0~0.160 0、0.004 0~0.133 0、0.0033~0.106 7μg·m L^(-1)的线性范围内线性关系良好(r≥0.9913);方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率为90.0%~98.4%,RSD小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3个成分在小鼠体内分布比较广泛,其中在肝脏和肾脏中分布较多,在肺脏中分布含量最低。结论:本方法经方法学验证,可对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B含量进行测定;在用于小鼠体内化学成分的组织分布研究中,芦丁在肾脏中含量多、脾脏中最少,野黄芩苷在心脏中含量最多、肺脏中最少,半枝莲碱B在肝脏中含量最多、肾脏中最少。

消癌解毒方中有效成分在小鼠体内的组织分布研究

目的：使用液质联用方法对消癌解毒方水提液中芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B等在小鼠组织中的分布进行研究。方法：以2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷-1,9（11）-二烯-2-酸甲酯（CDDO-Me）作为内标,以甲醇对组织中蛋白进行沉淀,通过液质联用技术对芦丁、野黄芩苷和半枝莲碱B含量进行测定,使用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱,正、负离子模式检测,检测离子质荷比（m/z）芦丁609.2、野黄芩苷463.3、半枝莲碱B558.4和CDDO-Me 506.7。结果：在小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织中,芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B在测定的线性范围内线性关系良好（r≥0.9913）;方法的精密度和稳定性RSD小于均15%;回收率为89.89%~113.35%,RSD值小于15%,符合化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则。芦丁等3种成分在不同组织中分布情况各不相同,芦丁主要分布在肝脏和肾脏,其次为心脏和脾脏,肺脏中分布最少;野黄芩苷只在肺脏中检出;半枝莲碱B的分布趋势为肝脏、肾脏和心脏中,肺脏和脾脏中分布较少。结论：本方法能够方便、灵敏、准确地对小鼠组织中的芦丁、野黄芩苷、半枝莲碱B的含量进行测定。