胆固醇半琥珀酸酯囊泡的制备及Ca^(2+)聚集试验

用超声波法制备了胆固醇半琥珀酸酯囊泡 (简称囊泡 ) ,光学显微镜表明其具有明显的双分子层结构。以自制的聚乙二醇单甲醚胆固醇琥珀酸酯衍生物对囊泡进行包衣 ,比较了包衣前后Ca2 +对囊泡的聚集 ,证明PEG层有明显抑制Ca2

己烯雌酚半琥珀酸的合成

将己烯雌酚与丁二酸酐按一定比例溶解于无水吡啶中 ,室温下反应 3 4h。反应产物用稀盐酸溶液洗涤 ,将所得沉淀干燥后经分离纯化 ,对纯化产物进行高分辨质谱、红外光谱鉴定。结果表明 ,高分辨质谱测定出纯化物的分子量为 3 86.195 9,红外光谱鉴定出纯化物的官能团和己烯雌酚半琥珀酸相符 ,从而证明所合成的产物就是己烯雌酚半琥珀酸。

11α-羟基孕酮半琥珀酸酯合成方法的改进

11α-羟基孕酮半琥珀酸酯是制备免疫测定剂的一种重要化合物。本文报道了它的一种改进合成方法,即以DMAP为催化剂,11α-羟基孕酮和琥珀酸酐在二氯甲烷溶剂中回流反应5h,收率可达82.2％,产物的分离得以简化。

治疗急性偏头痛新药--半琥珀酸拉米地坦(lasmiditan hemisuccinate)

偏头痛是一种长期常见的、周期性反复发作的神经血管性疾病,发作时伴有中重度搏动样头痛,单侧常见,或双侧交替发作或累及双侧,伴随某些自主神经症状,如惧声、恶心、呕吐、畏光等,具有发病时间长、病情迁延、难于治愈等特点。可发生于任何年龄,首次发病多见于青春期。女性患病率高于男性。偏头痛对生活质量的影响很大,世界卫生组织(WHO)2001年发布的报告,将常见疾病按健康寿命损失年排列,偏头痛位列前20位,并将严重的偏头痛定为最致残的疾病,类同于痴呆、瘫痪和严重精神病。治疗急性偏头痛新药的有效成分是拉米地坦(lasmiditan),制剂的稳定成分是半琥珀酸盐,由美国礼来公司(Eli Lilly)于2003年3月最先研制,2005年12月与美国CoLucid制药公司签署协议,授予该公司在全球独家开发许可权。2013年10月,CoLucid公司曾与韩国伊东制药公司签署协议,授予该公司在韩国和东南亚销售经营权。2017年3月,礼来公司完成对CoLucid制药公司的收购,使CoLucid制药公司成为其全资子公司。礼来公司于2018年11月14日向美国食品药品管理局(FDA)提交新药上市申请,2019年10月11日获准上市。半琥珀酸拉米地坦片的商品名为Reyvow?。拉米地坦是口服、中枢神经系统渗透性、选择性、5-羟色胺1F亚型(5-HT1F)激动药,其作用机制不同于目前用于治疗偏头痛"地坦"类新型药物,不具有血管收缩效应,对于患有心血管疾病或处于心血管疾病风险的偏头痛患者更为安全,是20年来唯一获准用于成人急性偏头痛治疗药。该文对半琥珀酸拉米地坦片的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

延胡索酸水合酶与2琥珀酸半胱氨酸在初筛延胡索酸水合酶缺陷型子宫平滑肌瘤的应用价值

目的探讨延胡索酸水合酶(fumarate hydratase,FH)和2琥珀酸半胱氨酸(2-succinocysteine,2SC)在具有奇异核特征平滑肌瘤中的表达,分析2种蛋白在初筛延胡索酸水合酶缺陷型(fumarate hydratase-deficient,FH-d)平滑肌瘤中的诊断价值。方法收集67例具有奇异核特征平滑肌瘤的临床资料,采用免疫组化EnVision两步法染色,分析FH、2SC表达与FH-d型平滑肌瘤形态学特征的相关性,并复习相关文献。结果67例患者有27例为FH-d型平滑肌瘤,FH在FH-d型平滑肌瘤中的阳性率为(2/27,7.41%),低于无FH-d形态平滑肌瘤(31/40,77.50%);2SC在FH-d型平滑肌瘤中的阳性率为(26/27,96.30%),高于无FH-d形态平滑肌瘤(11/40,27.50%)。统计学显示FH和2SC的表达存在相关性(P<0.05),且FH、2SC阳性与显著嗜酸性核仁、核仁周围空晕、嗜酸性包涵体和鹿角形血管均有关(P<0.05)。FH免疫组化染色显示FH-d型平滑肌瘤的敏感度为92.59%,特异度77.50%。2SC免疫组化染色显示FH-d型平滑肌瘤的敏感度为96.30%,特异度为72.50%。结论多数FH-d形态的平滑肌瘤中FH阴性和2SC阳性,对两者行联合检测可显著提高FH-d型平滑肌瘤的诊断准确性。

脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯(DAS)通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。方法 30只雄性BALB/C小鼠平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+DAS组)和模型组(LPS组)。使用ELISA对肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。测量BALF中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。对肺组织进行湿/干比(wetto dry ratio,W/D)测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。RT-PCR被用于iNOS mRNA的测定。使用Western blot测定iNOS和β-肌动蛋白(β-actin)蛋白的表达。结果 LPS干预后小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平明显上升而SOD水平显著下降,W/D比值和肺组织损伤评分明显升高,iNOS mRNA和蛋白的表达明显增加。LPS+DAS组小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平、W/D比值、肺组织损伤评分、iNOS mRNA和蛋白的表达较LPS组小鼠明显下降;同时BALF中SOD水平较LPS组小鼠明显增加。结论 DAS可能是通过抑制iNOS表达减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。

脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯上调水通道蛋白5减轻LPS诱导的急性肺损伤肺水肿的实验研究

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯(DAS)对于急性肺损伤状态下水通道蛋白5(AQP-5)的调节作用及对肺水肿清除的影响。方法 30只雄性BALB/C小鼠平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+DAS组)和内毒素组(LPS模型组),每组10只。通过HE染色观察肺组织病理学改变;使用湿/干比(W/D)分析肺水肿程度;使用RTPCR和western blotting对AQP-5的表达进行测量。结果小鼠气道内注射内毒素(LPS)72小时后肺损伤评分和W/D比值明显增加,AQP-5表达量水平明显下降,差异有显著统计学意义(均P<0.05)。同时发现,LPS+DAS组小鼠肺损伤评分及W/D比值较LPS组较低,而AQP-5表达量较之升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯可以有效减轻LPS诱导的小鼠ALI导致的肺水肿,其机制可能与上调了AQP-5的表达相关。该结果为脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯治疗ALI/ARDS相关的肺水肿奠定了实验基础。

脱水穿心莲内酯二琥珀酸半酯的合成工艺改进

以穿心莲内酯在氮气保护下加入无水吡啶、琥珀酸酐、无水亚硫酸钠，控温在70～80％反应生成炎琥宁（脱水穿心莲内酯二琥珀酸半酯钾钠盐）的重要中间体脱水穿心莲内酯二琥珀酸半酯，总收率为41．7％。操作工序简便，生产成本大大降低，收率高。

反相高效液相色谱法测定生物介质中泼尼松龙及泼尼松龙琥珀酸半酯

目的 :建立生物介质测定泼尼松龙及其琥珀酸半酯药物浓度的分析方法。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,内容物及血浆样品均用正戊烷 -甲基叔丁醚 (2∶3)混合液提取 ,挥干后以乙腈 -柠檬酸缓冲液 (33∶67)为流动相 ,经过反相C18 柱 (250mm×4 6mm ,5μm )分离后在254nm波长处检测。结果 :两种药物提取回收率高于80 % ,日内、日间精密度均低于3 %。结论 :本方法具有快速、简便、灵敏、准确的特点 ,适用于泼尼松龙新剂型药代动力学研究 ,也可推广应用于泼尼松龙其它剂型及同类药物。

脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐含量的测定方法

采用紫外分光光度法测定穿琥宁注射液的含量，结果显示，测定浓度在１６～４８μｇ／ｍｌ范围内，吸光度和浓度线性关系良好，ｒ＝０９９９８，平均回收率为９９７５％，ＣＶ＝２１１％。此法与现行法定的比色法比较，测定快速、操作简便、准确性和重现性好。

ALDH5A1基因突变致琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症1例报告并文献复习

目的探讨ALDH5A1基因突变致琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症(SSADHD)的临床特征,基因突变及致病机制。方法回顾分析1例SSADHD患儿的临床资料和基因测序结果,并复习相关文献。结果患儿,女,3岁6个月,表现为反复发作的发作性肌张力障碍。头颅磁共振成像、视频脑电图、血液生化检查、血尿遗传代谢筛查均无异常。基因测序显示,ALDH5A1基因外显子区域有2处杂合突变,c.112G>A(p.A38T)(致病性尚不明确)、c.1529C>T(p.S510F)(已报道的致病突变);2处杂合突变分别来自其父母,为复合杂合突变,符合常染色体隐性遗传规律。确诊为ALDH5A1突变致SSADHD。检索到相关文献26篇,报道75种ALDH5A1突变,分别位于外显子1~11,涉及错义突变、缺失突变、插入突变、剪切突变和无义突变。结论 ALDH5A1基因突变与SSADHD发生密切相关,基因检测有助SSADHD确诊。

鱼腥藻PCC7120中琥珀酸半醛脱氢酶的初步表征及结构分析

蓝藻琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛到琥珀酸的转化,使得蓝藻的三羧酸循环变得完整。BLAST序列分析预测鱼腥藻PCC7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。为了证实all3556基因编码蛋白的催化功能,构建了p ET28a-all3556表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中进行重组蛋白诱导表达;利用镍亲和层析方法对all3556蛋白进行了分离纯化。酶动力学测试表明all3556蛋白是一个NADP+-依赖型的琥珀酸半醛脱氢酶。生物信息学分析发现all3556蛋白和其他来源的琥珀酸半醛脱氢酶的氨基酸序列具有一定的同源性,在催化中心的氨基酸残基高度保守。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法诊断琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱 质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋白、真空干燥处理 ,残余物进行三甲基硅烷化衍生后进样行GC MS法分析。尿液中可检测到明显的 4 羟基丁酸、2 ,4 二羟基丁酸、3,4 二羟基丁酸和 4 ,5 二羟基己酸信号。在TIC图上 ,其绝对保留时间 (相对保留时间 )分别是 6 32min(0 4 34) ,7 80min(0 5 36 ) ,7 94min(0 5 4 6 ) ,8 80min ,8 90min(0 6 0 5 ,0 6 12 )。在质谱图上 ,其特征离子 (m z,TMS)分别是M 15 (2 33,2 ) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (349,3)。GC MS法分离鉴定尿液代谢成分 ,可作为诊断该病的一种可靠手段。

琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症研究进展

琥珀酸半醛脱氢酶缺乏症是一种罕见的常染色体隐性遗传病,属于γ-氨基丁酸代谢性疾病中的一种。临床表现主要以神经系统异常为主,包括发育落后、抽搐、肌张力低下等。气相色谱/质谱技术在尿中检出4-羟基丁酸是诊断的重要依据,确诊需依靠酶学检测和基因分析。ALDH5A1基因是本病的致病基因,已发现的基因突变超过50余种,但没有热点突变。治疗方面主要是对症治疗,没有特效药物。从琥珀酸半醛脱氢酶缺乏症发现过程、致病机理、临床表现、诊断治疗、动物模型及分子遗传学等方面对该病进行综述。

高分辨率熔解曲线技术在筛查琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症致病基因突变中的应用

目的对4例琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症(SSADHD)患儿家系进行基因突变分析,在明确突变的基础上建立针对醛脱氢酶5家族成员A1基因(ALDH5A1)中常见致病基因突变位点c.1529C> T(p.S510F)的高分辨率熔解(HRM)曲线快速筛查方法。方法先证者4例SSADHD患儿年龄(5.3±2.2)个月,其中男性3例,女性1例。商品化试剂盒提取4例先证者及其亲属外周血基因组DNA;采用一代测序技术对患者家系的ALDH5A1进行基因突变分析;应用HRM曲线技术随机筛查80例患儿ALDH5A1上c.1529C> T位点突变。结果先证者均有致病基因突变c.1529C> T位点,其中2例为该位点纯合突变,2例杂合携带并伴有其他致病位点的杂合突变。先证者及其家属的HRM分析结果与测序结果一致。随机检测的80例患儿,年龄为(7.5±3.9)岁,其中男性48例,女性32例,均不携带该基因突变。结论推测c.1529C> T位点突变可能是津冀地区SSADHD患儿中ALDH5A1的常见致病基因突变位点,但其在人群中携带频率很低;利用HRM曲线技术可实现对该位点的快速筛查。

脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的稳定性研究

目的:研究脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(DAS)的稳定性,确定贮存条件。方法:以 HPLC 法测定 DAS 的含量。色普柱:Phenomenex C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-1.5%醋酸溶液(60:40),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:251 nm。分别考察了光照、氧化、pH 及温度对 DAS 稳定性的影响,并用初均速法研究了 DAS 的热稳定性。结果:DAS 对光照、氧化稳定,对高 pH 不稳定,对温度不稳定。结论:DAS 宜在低温下保存。

琥珀酸半醛还原酶AKR7A5的稳态动力学机理分析

琥珀酸半醛还原酶的抑制剂可作为缓解琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病症状的潜在药物.酶抑制剂的研发要以酶的动力学性质为基础,但琥珀酸半醛还原酶的稳态动力学性质还不清楚.本文通过对琥珀酸半醛还原酶AKR7A5稳态动力学性质的分析,判断AKR7A5是按照有序的三元复合物反应机理催化反应;在此基础上,推导出琥珀酸半醛发生底物抑制是由于错误地与AKR7A5:NADP+二元复合物结合;底物的结构类似物琥珀酸体现出反竞争抑制剂的特点,只能与AKR7A5:NADP+二元复合物相互作用,暗示只有通过抑制剂、酶、NADP+复合物的方向入手,才能获得反竞争抑制剂与AKR7A5的复合物晶体结构.

高效液相色谱法测定炎琥宁注射液中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯含量

目的建立测定炎琥宁注射液中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯含量的高效液相色谱法。方法以Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氢钾溶液（35∶65）为流动相,检测波长为251 nm,流速为1.0 mL/min。结果脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯质量浓度在40-400μg/mL范围内与峰面积积分线性关系良好,平均回收率为98.39%,RSD=0.64%（n=9,r=0.999 9）。结论该法能有效控制炎琥宁注射液中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的质量,简单、准确、灵敏度高。

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的含量(英文)

目的建立了测定大鼠血浆中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯（DAS）的液相色谱-串联质谱法。方法血浆样品经液-液萃取后,以甲醇-水（70∶30,V/V）为流动相,通过Restek PinnacleⅡC18柱分离,格列吡嗪为内标,选择负离子扫描方式,以多反应监测（MRM）方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 531→m/z 431（DAS）和m/z 444→m/z319（格列吡嗪,内标）。结果DAS血浆浓度测定方法的线性范围为5～2500 ng/ml,定量下限为5 ng/ml。日内、日间精密度（RSD）均小于9.51%,准确度（RE）在-0.18%~1.93%。样品提取回收率为79.73%~85.99%,每个样品的测试时间为3 min。应用此法测试了大鼠口服或静注穿琥宁（DAS的单钾盐）后DAS的血药浓度,计算出其绝对生物利用度为3.69%。结论本方法灵敏度高、专属性强,适合于DAS的临床前药动学研究。

琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病MRI影像表现一例

琥珀酸半醛脱氢酶(succinic semialdehyde dehydrogenase,SSADH)缺陷病是一种罕见的常染色体隐性遗传病,由SSADH缺陷引起,当此酶活性下降,琥珀酸半醛则通过琥珀酸半醛还原酶生成4-羟基丁酸(Gamma-Hydroxybutyrate,GHB),造成GHB在血清、尿液、脑脊液中大量蓄积,引发临床症状,所以本病也称为4-羟基丁酸尿症。现将本院诊断的1例SSADH缺陷病患儿的临床及影像表现报道如下。临床资料患儿,女,1岁1个月,因抽搐再发1天于2018年10月20日入院。