桃SRAP-PCR反应体系建立及与半矮生型相关标记的研究

试验采用常规CTAB法提取了桃叶片基因组DNA,并以半矮生型桃基因组DNA为模板,通过对影响扩增结果的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度及引物浓度的梯度试验,对桃SRAP-PCR反应体系进行了优化.结果表明:桃SRAP-PCR的最佳反应体系为DNA模板25～30ng,10×Buffer2μL,Mg2+浓度2.5mmol·L-1,dNTP浓度0.25mmol·L-1,Taq酶1.1U,引物浓度0.3μmol·L-1.通过BSA法建立半矮生型和普通型基因池,从266对SRAP引物中筛选出21对与桃半矮生性状相关的SRAP标记,并通过对18个个体的扩增检测,发现了1个与半矮生性状相关的标记.

半矮生型桃F-box基因的克隆和表达特征分析

【目的】研究半矮生型桃‘SD9238’F-box基因的序列特征及F-box基因在新梢生长跃变期的表达与节间伸长的关系,为进一步研究该基因调控半矮生型桃植株生长的分子机制奠定基础。【方法】利用基因克隆和RACE技术获得‘SD9238’F-box基因的gDNA及cDNA序列,并分析该基因的序列特征。采用qRT-PCR分析该基因在新梢生长跃变期的表达水平。【结果】获得F-box基因gDNA全长3 650 bp,cDNA全长1 936 bp,GeneBank登陆号为KF023192。该基因ORF长1 509 bp编码502个氨基酸,蛋白质分子质量55.984 kD。生物信息学分析表明,氨基酸序列具有F-box蛋白家族中LRR的结构特征,与蔷薇科中苹果和草莓的F-box基因同源,相似性达98%。QRT-PCR分析结果表明,F-box基因在节间生长跃变期表达量的动态变化与新梢节间的伸长速率动态变化趋势一致,其基因相对表达量在半矮生型桃中于节间生长跃变点5月22日达到最大值,为第一时期的9.4倍;在普通型桃中同样于5月22日达到基因相对表达量的最大值,但只为第一时期的2.2倍。【结论】获得了‘SD9238’新梢中F-box基因KF023192的序列全长,并明确了该基因的序列特征。对该基因在新梢生长过程的动态表达分析显示,KF023192可能参与了半矮生桃新梢节间生长的调控。

半矮生型晚粳糯稻单季栽培技术初探

通过对绍糯 9714为代表的半矮生型晚粳糯稻 2 0 0 0～ 2 0 0 1年的栽培试验 ,初步摸清其单季栽培适宜的移栽密度和插种本数 ,本田纯氮肥 (化肥 )施用量与施用方法 ,并总结出了半矮生型晚粳糯稻单季高产栽培的技术思路。

半矮生型单季晚粳稻氮肥运筹分配效应试验研究

半矮生型单季晚粳稻氮肥不同运筹田间试验表明 :从基蘖穗 0 .5∶0 .2∶0 .3的氮肥运筹分配能有效地控制分蘖苗数 ,增加有效穗 ,达到“前足中控后促”和中群体、高成穗率。

半矮生型桃节间长度相关基因的筛选和鉴定

为了进一步研究调控节间长度相关基因的表达模式及为克隆该半矮生性状的基因提供依据,采用cDNA-AFLP分析方法对半矮生型桃节间"生长跃变期"差异表达的基因进行筛选,并对差异的转录衍生片段(TDFs)进行回收、克隆、测序、功能注释及qRT-PCR验证。采用256对引物,共产生9021个TDFs,有明显差异的TDFs共899个,成功回收到497个TDFs,254条序列与已知基因高度相似。差异表达的基因主要涉及到信号转导、生长发育、转录调控、蛋白质代谢、防御和物质与能量代谢等。选取其中26个基因进行实时荧光定量PCR验证,结果表明26个基因的qRT-PCR表达丰度分析与cDNA-AFLP结果一致。分离到植物生长素、细胞分裂素、油菜素内酯、脱落酸、细胞周期等调控途径中生长调控相关的候选基因,可为阐明节间生长调控机制奠定基础。

桃半矮生性状的SSR标记

本研究以普通型油桃品种‘晴朗’为母本、半矮生型油桃‘SD9238’后代——‘中油桃14号’为父本杂交的141个F1代单株为试材,对半矮生性状进行了SSR分子标记研究。通过集群分离分析法(bulked segregant analysis,BSA)用位于桃基因组上的56对SSR引物进行了筛选,获得一个与桃半矮生性状相关的SSR标记CPDCT23,该标记在普通型上表现为显性,在半矮型上表现为隐性。进一步分析表明,该标记对F1代单株性状预测的正确率为92.2%,为进一步开展有关控制该半矮生性状的分子机制研究提供参考。

基于HRM获得与桃Tssd紧密连锁的SNP标记

【目的】植物中,SNP标记具有分布广泛、分辨率高、共显性和多态性高等特点,是遗传研究的常用分子标记。桃全基因组测序完成,获得了大量SNP位点。利用现有的SNP数据进行简单、快速的SNP基因分型是基因定位、品种鉴定和图谱构建等后续研究的基础。文章拟建立采用高分辨率熔解曲线进行不同类型SNP的基因分型方法,以获得与桃温度敏感半矮生型基因紧密连锁的分子标记。【方法】以普通生长型(ST)单株97-32-46为母本,温度敏感半矮生型单株03-94-2(Tssd)为父本进行人工杂交,利用其分离群体96个后代单株为研究材料。在定位目标基因的区间内开发连锁和不同类型的SNP标记的基础上,采用高分辨率熔解曲线进行SNP的基因分型并获得与目标性状紧密连锁的SNP标记。【结果】明确了DNA模板和Mg^(2+)是影响基因分型的关键因子,并确立了反应体系最佳浓度区间。在15μL反应体系中模板DNA的量低于5.0 ng时或Mg^(2+)浓度低于1.6μmol·L^(-1)时则不能完成PCR扩增和基因分型;根据亲本基因型和表型一致的SNP位点设计引物,扩增片段长度在140 bp左右。高分辨率熔解曲线分析可对由单个核苷酸变异引起的4种不同类型的SNP(A/T、A/G、A/C和C/G)进行基因分型,并正确区分了温度敏感半矮生型和普通生长型,与进行Sanger测序鉴定的结果一致。采用96孔板对温度敏感半矮生型和普通生长型各48个分离后代单株进行了PCR扩增和基因分型,确定了遗传距离。分型结果表明高分辨率熔解曲线分析技术可以将96个样杂交后代单株分为温度敏感半矮生型和普通生长型2种,正确地区分了A/A基因型和A/T基因型。在96个样品中仅1个没有成功扩增,在温度敏感半矮生型和普通生长型中各存在1个重组单株。获得与温度敏感半矮生型基因紧密连锁的SNP标记,遗传距离为2.11 cM。【结论】建立了基于高分辨率熔解曲线分析的SNP基因分型。尽管高分辨率熔解曲线分析技术无法区分两种不同纯合类型的SNP变异,但仍不失为区分已知变异SNP的有效方法。在已经获得桃大量SNP的基础上,该体系可用于桃的基因定位、遗传多样性和品种鉴定等研究。

“红辣椒”高羊茅——极耐热、抗病的高羊茅新品种

“红辣椒”是最新培育的高羊茅新品种，它是经过多年的坪质表现、耐热和抗病性方面的选育而成。属半矮生型品种，绝佳的草坪坪质和出色的耐热抗病性很有吸引力，在NTEP草坪质量、抗病性试验中均名列前茅。

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