半胱亚磺酸脱羧酶和牛磺酸转运体mRNA在成年小鼠睾丸间质细胞的表达

为检测成年小鼠睾丸间质细胞是否存在牛磺酸生物合成关键酶半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)和牛磺酸转运体(TauT)mRNA的表达,通过Percoll分离液分离纯化成年小鼠睾丸间质细胞,运用RT-PCR方法测定睾丸间质细胞中CSD和TauT mRNA表达情况。结果显示,成年小鼠睾丸间质细胞存在CSD和TauT mRNA表达。说明成年小鼠睾丸间质细胞能通过CSD途径合成牛磺酸以及睾丸间质细胞可能存在牛磺酸的转运活动。

雌二醇和孕酮对小鼠子宫半胱亚磺酸脱羧酶基因表达和牛磺酸含量的调控

实验主要研究了17β-雌二醇(E2)和孕酮(P4)对小鼠子宫组织中半胱亚磺酸脱羧酶基因(CSD)表达和牛磺酸含量的调控。给去卵巢小鼠分别皮下注射植物油(对照组)、17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)、E2和P4、E2和氟维司群(ICI 182780)、P4和米非司酮(RU486),24h后观察各组小鼠子宫中CSD的表达和牛磺酸的含量。Real-time PCR和Western blot定量分析结果显示,每只小鼠注射1μg E2能够显著抑制CSD的mRNA和蛋白的表达,6mg P4能够显著促进CSD mRNA和蛋白的表达,其受体抑制剂RU486和ICI182780都能逆转它们的作用。高效液相色谱(HPLC)测定结果显示,注射1μg E2和6mg P4分别下调和上调子宫组织中牛磺酸的含量。上述结果提示E2和P4可能通过受体途径参与调节子宫CSD的表达,从而调节子宫中牛磺酸含量。

半胱亚磺酸脱羧酶在Ishikawa细胞中的表达与检测

以半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)在Ishikawa细胞中的表达与检测为例,进行了生物技术大实验教学模式的改革。实验首先体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞,然后分别采用免疫细胞化学、RT-PCR、Western Blot检测了CSD基因在该细胞中的表达。结果表明,在Ishikawa细胞中有CSD mRNA和蛋白的表达。通过完成上述大实验,学生所学的理论知识得到综合应用,培养了创新精神与科学思维。

半胱亚磺酸脱羧酶在成年小鼠副性腺器官中的表达

采用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学方法检测了CSD在小鼠副性腺器官中mRNA和蛋白水平的表达。结果显示,CSD在小鼠副性腺器官中都有mRNA和蛋白水平的表达。CSD主要定位于精囊腺的高柱状上皮细胞、前列腺的腺上皮细胞和尿道球腺的腺上皮细胞中。结果表明雄性副性腺器官可以通过CSD合成通路参与牛磺酸的合成。

埃及伊蚊来源半胱亚磺酸脱羧酶的性质解析

原核来源L-天冬氨酸-α-脱羧酶的活性较低,是限制生物法合成β-丙氨酸的主要因素,该研究将目光由原核来源转向真核来源,意在寻找具有更高催化活性的酶。该文通过基因合成获得埃及伊蚊来源半胱亚磺酸脱羧酶,并添加sumo标签实现了其在大肠杆菌中的高效表达,酶学性质表征实验结果表明,重组酶可催化L-天冬氨酸生成β-丙氨酸,比酶活力为(5.00±0.074)U/mg,添加sumo标签后比酶活力为(5.40±0.129)U/mg;最适反应条件为40℃,pH 6.0;带标签酶的稳定性要明显优于野生型,在50℃处理30 min后酶活力仍保留40%,在pH 5.0~8.0酶活力都维持在80%左右。利用大肠杆菌自身的天冬氨酸裂解酶与重组半胱亚磺酸脱羧酶相偶联,实现了从富马酸到天冬氨酸的一步转化,产物的摩尔转化率达到93.03%。该研究中半胱亚磺酸脱羧酶对于L-天冬氨酸具有较高的催化活性,为β-丙氨酸的工业化生产提供理论支持和技术参考。

高效液相色谱法评价海洋生物中半胱亚磺酸脱羧酶活性

[目的]建立磺基丙氨酸(CA)的高效液相色谱分析法,并以CA为底物,评价不同海洋生物组织中半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)的活性。[方法]以Agilent Eclipse XDB-C_(18)为色谱柱,采用邻苯二甲醛(OPA)进行柱前衍生,检测波长为315 nm,对衍生化过程及色谱条件进行了优化。[结果]当CA∶OPA(物质的摩尔比)=1∶2、衍生时间2 min、流动相甲醇∶乙酸钠=65∶35(V/V)、流速1 m L/min时,CA具有最优的检测效果。在该条件下,CA浓度在10～500μg/m L具有良好的线性关系(R^2>0.99),平行样品的相对标准偏差为0.9%～8.6%,保留时间为1.4～1.5 min。不同海洋生物组织中CSD活性检测结果显示,在所选择的海洋贝类、头足类、鱼类中,贻贝、疣荔枝螺和大黄鱼均未检测到CSD活性;蛏子、血蛤、芝麻螺和鱿鱼中CSD活性较低。不同组织比较,海鲈鱼肝脏中CSD活性最高,达21.8 U/mg,而肉和鳃中则未检测到CSD活性。[结论]不同海洋生物体内牛磺酸的合成途径不尽相同。

凡纳滨对虾半胱次磺酸脱羧酶基因的克隆表达

牛磺酸（Taurine）是一种具有多种生物活性的含硫非蛋白氨基酸，在神经系统发育、眼睛发育、渗透压调节等方面有重要功能，目前在饲料、饮料、医药等行业有重要应用。同时其也是鱼类等水产动物风味形成的呈味氨基酸。半胱次磺酸脱羧酶（cysteine sulfinate decarboxylase，CSD）是牛磺酸生物合成的限速酶，在牛磺酸的合成中有重要功能。本研究利用race PCR技术克隆到了凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的半胱次磺酸脱羧酶基因（L．vannamei CSD，LvCSD）的全长序列，对其编码的蛋白的特性进行了分析。同时构建原核表达载体对其进行表达，获得可溶表达的LvCSD，并利用镍柱对其进行纯化，获得较纯的重组LvCSD。另外还发现LvCSD在较盐度为15‰的养殖水体中的凡纳滨对虾的血淋巴细胞和肝胰腺细胞中转录水平较高。

鲫鱼(Carassius auratus)半胱亚磺酸脱酸酶CSAD基因克隆及其表达研究

本研究以鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,采用巢式PCR和RACE技术克隆鲫鱼半胱亚磺酸脱酸酶CSAD基因c DNA序列,并且利用实时荧光定量PCR检测了CSAD m RNA在鲫鱼不同组织和昼夜节律中的相对表达水平,同时还研究了牛磺酸对鲫鱼肠道CSAD m RNA表达的影响。结果表明:(1)鲫鱼CSAD基因c DNA序列包含186bp的5?UTR序列,675bp的3?UTR序列,1503bp开放阅读框,编码500个氨基酸。同源性分析表明,鲫鱼和鲤鱼的同源性为97.2%。系统发育分析表明,鲫鱼与鲤鱼之间的亲缘关系最接近,置信度为100。经预测,其编码的蛋白质的分子量和等电点分别为56.82k Da和5.77;(2)Ca CSAD m RNA在肌肉、心脏、肠道及肝脏中的表达水平较高,在脑和鳃组织中的相对表达量较低;(3)鲫鱼肠道CSAD m RNA的相对表达量在6:00am点时最高,9:00pm点时相对表达量最低;(4)鲫鱼CSAD的相对表达丰度随着牛磺酸添加量的增加而逐渐下降。本研究结果不仅有助于理解鲫鱼CSAD基因的分子特征,同时将为进一步研究鱼类CSAD营养调控功能提供理论依据。

分光光度法测定大蒜提取物中硫代亚磺酸酯

提供了一种利用L 半胱氨酸和DTNB检测新鲜大蒜及大蒜提取物中硫代亚磺酸酯的分光光度法 ,通过对Lawson法的进一步改良 ,不仅提高了测定的准确性和重现性 ,而且可应用于大蒜乙醇提取物中硫代亚磺酸酯的定量测定 ,也同样适用于其它大蒜提取物中总硫代亚磺酸酯的定量测定。

饲料牛磺酸含量对斜带石斑鱼幼鱼生长性能、体成分、TauT mRNA表达量及牛磺酸合成关键酶活性的影响

为探讨饲料牛磺酸含量对斜带石斑鱼幼鱼生长性能、体成分、TauT mRNA表达量及牛磺酸合成关键酶(CSD和CDO)活性的影响,实验在以酪蛋白和明胶为蛋白源的基础饲料(0DT)中分别添加0.5%(0.5DT)、1.0%(1.0DT)、1.5%(1.5DT)的牛磺酸,配制成4种不同牛磺酸含量的饲料。将平均体质量为(13.85±0.25) g的320尾斜带石斑鱼幼鱼随机分为4组,每组4个循环水族箱,每箱放养20尾鱼,每组分别投喂一种相同实验饲料,每天定时投喂实验饲料至表观饱食状态,实验为期84 d。结果显示,在0DT饲料中补充外源牛磺酸能显著提高饲料效率、摄食率、增重率和全鱼粗蛋白含量,而显著降低肝体比和全鱼粗脂肪含量。组织中肝脏、肌肉、肠道TauT mRNA表达量在1.0DT组时达到最大值,且显著高于其他各组,当饲料牛磺酸含量继续增加至1.5DT组时明显降低,但仍显著高于0DT和1.0DT组。斜带石斑鱼幼鱼血浆、肝脏、肠道和肌肉中牛磺酸含量与饲料牛磺酸含量之间呈正相关。饲料中补充外源牛磺酸能够显著降低肝脏、肌肉中CSD活性,同时降低血浆、肝脏、肠道和肌肉中CDO活性,但对血浆CSD活性无显著影响。研究表明,饲料中补充外源牛磺酸能够明显促进斜带石斑鱼幼鱼生长,增加鱼体蛋白沉积,同时降低鱼体脂肪沉积,上调组织中TauT mRNA表达水平及提高牛磺酸蓄积,降低牛磺酸合成关键酶活性。研究表明,以增重率为目标,通过二次多项式回归分析,饲料中牛磺酸的适宜含量为0.92%。

一个新的L-半胱亚磺酸脱羧酶基因的分析和突变

【目的】完成一个来源于碱性污染土壤宏基因组文库的新的L-半胱亚磺酸脱羧酶基因undec1A的鉴定,研究其酶学性质并利用非理性设计技术对其进行分子改造。【方法】以p ETBlue-2为表达载体构建包含undec1A基因的重组表达质粒,转化至宿主细胞E.coli Tuner(DE3)p Lac?中构建重组表达克隆,采用镍亲和层析完成了酶蛋白的分离纯化,完成其生化特征研究,利用连续易错PCR技术对Undec1A蛋白进行分子改造。【结果】生物信息学分析结果揭示Undec1A蛋白与已知的L-半胱亚磺酸脱羧酶存在类似的辅酶结合位点和底物识别催化基序等。分子对接结果显示氨基酸残基Val237、Asp239、Asp266、Ile267、Ala268和Lys298等决定了与底物分子L-半胱亚磺酸的识别和结合催化。以L-半胱亚磺酸作为底物,重组Undec1A蛋白的最适作用p H为7.0,最适作用温度为35°C;分子动力学常数K_m为(1.557±0.015)mmol/L,V_(max)为(49.07±3.19)μmol/(L·min),k_(cat)为(45.80±1.32)/min。利用连续易错PCR技术完成了亲本酶的分子改造,分离筛选到了一个酶活力更高的突变酶Undec1A-1180。在优化条件下,Undec1A-1180的比活力较亲本酶提高了约5.62倍。【结论】本研究为构建牛磺酸的生物合成工艺提供了理论参考,因而具有重要的实践意义。

半胱亚磺酸脱羧酶在妊娠小鼠子宫和胚胎中的表达定位研究

目的研究半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)mRNA和蛋白在妊娠小鼠子宫和胚胎中的表达定位。方法构建CSD原位杂交探针,收集正常妊娠小鼠第1~9天子宫组织和第11天胚胎,采用免疫组织化学染色、原位杂交检测CSD的表达情况。结果小鼠妊娠第1~2天CSD主要定位在子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞,基质细胞从第3天开始表达,第6天开始胚胎周围的子宫蜕膜细胞中检测不到CSD蛋白,第8天子宫CSD的表达明显减弱,第9天表达更弱。从囊胚到第9天时胚胎都有CSD表达。CSD在第7天定位于着床点子宫和胚胎中,胚胎周围的子宫蜕膜细胞无表达,在第11天定位于胚胎的脑、心脏、脊髓。结论子宫和胚胎在小鼠妊娠过程中可表达CSD。

高效液相色谱法评价海洋生物中半胱氨酸双加氧酶活性

建立半胱亚磺酸的高效液相色谱分析方法,并利用该方法测定不同海洋生物组织中半胱氨酸双加氧酶的活性。应用邻苯二甲醛(o-phthalaldehyde,OPA)为衍生试剂进行柱前衍生,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C_(18)。结果发现,当检测波长为315 nm、半胱亚磺酸与OPA物质的量比1∶2、衍生时间3 min、流动相甲醇-乙酸钠(8∶2,V/V)、流速1 m L/min时,半胱亚磺酸在10~400μg/m L质量浓度范围内具有良好的线性关系(R^2>0.99),平行样品的相对标准偏差为0.9%~6.4%,保留时间为1.46 min。以此方法为基础,对不同海产品组织中半胱氨酸双加氧酶活性进行检测,结果显示,所选择的海洋贝类、蟹类、虾类、鱼类中均检测到半胱氨酸双加氧酶活性,其中南美白对虾中活性最高。不同组织比较,鱼体肝脏中半胱氨酸双加氧酶活性最高,而鳃中活性最低。

培养的钙化大鼠心肌细胞牛磺酸转运障碍

目的探讨离体培养钙化幼鼠心肌细胞牛磺酸(Tau)跨膜转运功能及牛磺酸转运体(TAUT)和半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)mRNA含量的改变及意义。方法以β-磷酸甘油培养心肌细胞;氨基酸分析仪测定细胞牛磺酸含量;3H标记的牛磺酸测定心肌细胞牛磺酸转运;竞争性定量RT-PCR测定心肌细胞TAUT和CSDmRNA水平。结果与非钙化大鼠心肌细胞相比,钙化心肌细胞牛磺酸含量减少27%(P<0.05),细胞3H-牛磺酸摄入程度降低,最大转运速率(Vmax)减少39%(P<0.01),Km值两组间差异无显著性(P>0.05);钙化心肌细胞TAUTmRNA含量减少45%(P<0.01),而CSDmRNA增加25%(P<0.05)。结论钙化心肌细胞牛磺酸转运功能障碍,TAUT表达减少,而CSD表达增加。

猫牛磺酸营养研究进展

猫体内由于缺乏合成牛磺酸的限速酶-半胱亚磺酸脱羧酶,所以不能以蛋氨酸和半胱氨酸为原材料合成机体所需的牛磺酸,需要从动物蛋白中获取。牛磺酸除了可以与胆酸结合生成牛磺胆酸,促进脂肪及脂类物质消化吸收外,还对维护其敏锐的视觉,正常的繁殖、免疫和神经学功能等诸多方面有举足轻重的作用,是十分重要的必需氨基酸。

牛磺酸对生殖的影响

牛磺酸,是一种β含硫非蛋白氨基酸,因1827年首次从牛胆汁中分离出来而得名。1850年,其化学结构得以确定。1975年,Hayes等报道了幼猫采食牛磺酸含量不足的食物可导致视力功能下降,甚至失明,牛磺酸的营养作用引起了人们的极大关注。

牛磺酸

牛磺酸以游离形式存在于人及哺乳动物的几乎所有脏器中，是重要营养物质，在体内有广泛的生物活性，具有镇静、消炎、解热、兴奋呼吸、抗心律失常等药理作用，临床上可用于治疗急慢性肝炎、支气管炎等多种病症。由于人体合成牛磺酸的半胱氨酸亚磺脱羧酶(CSAD)活性较低(新生儿更低)，远远满足不了机体需要，只能从体外摄入。

牛磺酸强化乳制品

牛磺酸强化乳制品宁夏自治区中宁县畜牧局（７５１２００）张晓林，刘进忠牛磺酸是一种氨基酸，学名α－氨基乙磺酸，分子式ＨＯ＿３Ｓ－ＣＨ＿２－ＮＨ＿２，分子量１２５．１。在人体的组织中，蛋氨酸和半胱氨酸代谢的中间产物半胱亚磺酸经半脱亚磺酸胱羧酸（ＣＳＡＤ）...

大蒜绿色素形成机理的研究进展

综述了大蒜的绿变机理;论述了大蒜绿色素的性质、分离纯化过程,并对绿色素形成途径进行了探讨。

SOE-PCR二步法构建shRNA干扰质粒

通过拼接重叠延伸PCR(SOE-PCR)二步法成功地建立了一种方便的shRNA干扰质粒的构建方法。将目的基因———半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)特异性的shRNA序列用SOE-PCR二步法插入到pEGFP-H1-shRNA质粒中,经菌液PCR、酶切、测序鉴定,证明pEGFP-H1-CSD shRNA干扰质粒与预期结果一致,可以用于细胞转染和RNA干扰实验。采用本方法能快速、高效构建RNA干扰质粒,为研究基因功能提供帮助。