奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中caspase-8的活化

目的探讨奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中半胱天冬酶亚类8(caspase-8)的变化。方法以不同浓度(0,0.03,4.0,100μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24,36,48h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8mRNA水平的改变,肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性。结果奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;奥沙利铂浓度为0,0.03,4.0,100μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.15±0.09)%、(0.43±0.17)%、(6.92±0.81)%、(11.76±1.25)%。用不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24h,caspase-8酶原的表达随药物浓度的增加而减少,caspase-8mRNA水平呈浓度依赖性的增加(P<0.01)。用4.0μg/ml奥沙利铂分别处理细胞0.5,2,6,12,24,36h,caspase-8活性于2h开始升高,12h达高峰(P<0.01);用不同浓度的奥沙利铂处理细胞12h,caspase-8活性呈浓度依赖性的升高(P<0.01)。结论奥沙利铂能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达上调有关。