促红细胞生成素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及基质金属蛋白酶-9和半胱天冬酶-1表达的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠肝缺血再灌注损伤后的保护作用及对肝基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和半胱天冬酶-1(caspase-1)表达的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为5组,缺血再灌注损伤组(I/R)、促红细胞生成素低剂量组(L组)、中剂量组(M组)、高剂量组(H组)和假手术组。H-E染色观察各组肝组织的病理变化;免疫组织化学显色和免疫印迹法检测MMP-9、caspase-1蛋白表达;比色法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果:光镜下I/R组肝细胞出现水肿及片状坏死,大量炎性细胞浸润;EPO预处理组出现肝细胞水肿、坏死及炎细胞浸润程度明显减轻。与假手术组比较,缺血再灌注各组肝组织MMP-9和caspase-1表达水平均上升,血清ALT和AST水平也均上升,且均以I/R组上升最为明显。EPO不同剂量组间比较,中剂量组大鼠肝MMP-9和caspase-1表达水平、ALT和AST的水平与低、高剂量组比较均降低。结论:EPO对大鼠肝缺血再灌注损伤具有保护作用,最佳浓度是3000U/kg。该保护作用可能与抑制MMP-9、caspase-1介导的过度炎症反应有关。

银屑病患者血清细胞因子白细胞介素-17、半胱天冬酶-1、白细胞介素-18的变化情况

目的探讨银屑病患者血清细胞因子白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的变化情况。方法选择寻常型银屑病患者80例为银屑病组,健康体检者80例为对照组。酶联免疫吸附实验法测定两组血清IL-17、caspase-1、IL-18水平。结果银屑病组患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平分别为(215.46±19.78)pg/mL、(112.31±12.14)pg/mL、(134.25±18.85)pg/mL,对照组患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平分别为(142.31±7.80)pg/mL、(43.25±5.65)pg/mL、(62.97±12.13)pg/mL,两组血清IL-17、caspase-1、IL-18水平比较差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000),银屑病组患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平高于对照组。银屑病进展期患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平分别为(265.47±16.57)pg/mL、(137.56±8.93)pg/mL、(163.24±5.83)pg/mL,银屑病静止期患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平分别为(165.37±11.25)pg/mL、(68.73±5.46)pg/mL、(76.86±4.87)pg/mL,两组患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平比较差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000),银屑病进展期患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平高于静止期。银屑病患者血清IL-17和caspase-1、IL-18均呈正相关(r=0.673、0.742,P=0.000、0.000),血清caspase-1和IL-18呈正相关(r=0.587,P=0.000)。结论寻常型银屑病患者血清IL-17、caspase-1、IL-18水平升高,IL-17、caspase-1、IL-18在寻常型银屑病的发病中具有重要作用。

寻常性银屑病患者血清半胱天冬酶-1及IL-37,IL-18水平的检测

目的观察寻常性银屑病患者不同发病时期血清细胞因子半胱天冬酶-1(Caspase-1)及IL-37,IL-18的水平,分析其与疾病发展和转归的相关性。方法分别采集寻常性银屑病患者进行期(26例)、静止期(24例)和退行期(15例)以及30名健康对照者外周血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测其血清中Caspase-1,IL-37及IL-18水平。结果各期寻常性银屑病患者血清Caspase-1水平均高于健康对照组血清Caspase-1水平;进行期寻常性银屑病患者血清中IL-37水平低于健康对照组血清中IL-37水平,静止期和退行期的寻常性银屑病患者血清中IL-37水平均高于健康对照组血清中IL-37水平;进行期和静止期寻常性银屑病组血清中IL-18水平高于健康对照组血清中IL-18水平,退行期寻常性银屑病患者血清中IL-18水平低于健康对照组(P<0.05),以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。寻常性银屑病患者血清IL-37与IL-18的水平呈负相关(P<0.05),Caspase-1与IL-18的水平呈正相关(P<0.05)。结论 Caspase-1可能与IL-18共同参与银屑病的发病,IL-37可能作为一种抗炎细胞因子参与银屑病的发展和转归。

慢性阻塞性肺部疾患病者血清半胱天冬酶-1及CD30/CD3L表达水平及相关性研究

目的:探讨慢性阻塞性肺部疾病(COPD)患者血清Caspase-1、CD30/CD30L表达水平及其相关性研究。方法:选取2018年1月至2019年3月住院的75例急性加重期COPD患者为急性组,74例稳定期COPD患者稳定组,同时选取同期74例健康体检人员作为对照组。肺功能仪测定肺功能,酶联免疫吸附法检测Caspase-1、CD30/CD30L水平, Pearson相关性分析COPD患者Caspase-1、CD30/CD30L与肺功能的相关性。结果:三组观察对象年龄、性别、BMI及吸烟史等,差异无统计学意义(P>0.05)。COPD急性期和稳定期组肺功能相关指标FEF%、 FEV1pred%、V25%、V50%、V75%显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。酶联免疫吸附实验显示与对照组相比,急性组和稳定组患者体内Caspase-1、CD30/CD30L水平升高,并且急性组水平高于稳定组,均差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,COPD患者体内Caspase-1、CD30与肺功能相关指标FEF%、 FEV1pred%、V25%、V50%、V75%、CAT评分存在相关性(P<0.05),外周血Caspase-1、CD30水平间存在相关性(r=0.934,P=0.000)。稳定组内不同风险等级患者血清Caspase-1、CD30、CD30L表达量随着风险等级增加而增加。讨论:急性加重期和稳定期COPD患者体内Caspase-1、CD30/CD30L表达均显著升高,且随着风险等级增加而增加,与肺功能相关指标与CAT评分呈相关性,可能作为评价COPD的有效指标。

前半胱天冬酶-1及活性位点突变真核表达载体的构建、表达及生物活性鉴定

目的构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性。方法从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序;脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响。结果构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低。结论构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低。

NLRP3/caspase-1介导的细胞焦亡在动脉粥样硬化发生、发展中的作用

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症性疾病,是全球范围内主要的心血管疾病负担和死亡原因。细胞焦亡是一种新型的促炎调节的细胞死亡,其特征是细胞肿胀破裂和促炎性细胞因子IL-1β和IL-18等的强释放,与其他细胞死亡方式显著不同。NOD样受体3(NOD-like receptors 3,NLRP3)炎性小体激活半胱氨酸天冬氨酸酶-1(cysteine-dependent aspartate-specific proteases,caspase-1)诱导的细胞焦亡与AS的发生、发展以及斑块的稳定性密切相关。本文主要阐述NLRP3/caspase-1介导的细胞焦亡在AS进程中的作用,以及在AS发展中靶向细胞焦亡的潜在治疗策略,旨在更好地理解细胞焦亡触发AS发生的机制,以期为防治AS提供新靶点和新策略。

基于NF-κB/NLRP3/caspase-1通路研究白及多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症损伤的保护作用

目的:探究白及多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)通路蛋白表达及对肠道屏障损伤的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)+乙醇法建立UC模型,并将SD大鼠随机分为空白组、模型组、白及多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、柳氮磺胺吡啶阳性组(0.67 g/kg),除空白组外,其余各组均建立UC模型。白及多糖低、中、高剂量组和阳性组分别灌胃给予相应剂量白及多糖和柳氮磺胺吡啶,空白组和模型组灌胃给予10 ml/kg生理盐水,各组大鼠连续给药2周,1次/d。末次给药12 h后,观察大鼠一般行为并对大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;取大鼠结肠组织,苏木精-伊红染色观察组织病理形态;ELISA检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肠道屏障功能受损指标二胺氧化酶(DAO)和肠型脂肪酸结合蛋白(i-FABP)水平;Western blot检测结肠组织通路蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠形体消瘦、大便稀溏、结肠组织可见黏膜溃疡、充血、扩张及炎症细胞浸润等病理损伤,DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均升高(P<0.05),DAO和i-FABP含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,白及多糖各剂量组及柳氮磺胺吡啶组大鼠DAI评分、结肠组织病理损伤程度、MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05),DAO和i-FABP含量均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,高剂量白及多糖改善效果与柳氮磺胺吡啶相近(P>0.05)。结论:白及多糖可抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路激活,降低炎症反应和肠屏障损伤,改善UC症状和肠黏膜损伤。

达格列净通过Caspase-1介导的细胞焦亡对糖尿病肾病小鼠肾损伤的影响

目的基于胱天蛋白酶-1(Caspase-1)通路介导的细胞焦亡作用,探究达格列净(DAP)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾损伤的影响。方法取30只SPF级C57BL/6雄性小鼠,8周龄,体重17~25 g,根据随机数字表法将其分为对照组、模型组、DAP组,每组10只。模型组、DAP组建立DN模型,对照组给予普通饲料。DAP组灌胃给予1 mg/(kg·d)DAP,对照组及模型组均灌胃给予等量生理盐水,连续给药4周。药物干预后比较各组小鼠的一般情况,血肌酐、24 h尿蛋白、血清白细胞介素-18(IL-18)水平;观察肾脏病理学变化;比较小鼠肾组织Caspase-1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组精神萎靡,活动减少,偶有颤抖,尿量显著增多,体型较瘦;与模型组比较,DAP组有多饮多食现象,尿量增多不明显,活动正常。与对照组比较,模型组24 h尿蛋白、血肌酐、血清IL-18水平及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,DAP组小鼠24 h尿蛋白、血肌酐、血清IL-18水平及NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论DAP可能通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路活化抑制细胞焦亡,保护肾脏。

细胞焦亡相关蛋白NLRP3、IL-1β、Caspase-1在溃疡性结肠炎黏膜中的表达及意义

目的 通过研究细胞焦亡相关蛋白NLRP3、IL-1β、Caspase-1在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)患者结肠黏膜中的表达,比较其差异性,探讨其在UC发病机制中的作用及相关性。方法 取27例UC患者结肠黏膜标本,根据内镜及组织学进行分级,其中轻度13例,中重度14例。同时收集确诊为结直肠癌并行外科手术切除的结直肠断端正常的结肠黏膜标本25例。采用免疫组化SP法检测所有患者肠黏膜中NLRP3、IL-1β、Caspase-1的表达情况。结果 NLRP3、IL-1β、Caspase-1在UC患者结肠黏膜中的蛋白表达高于癌旁组织对照组,差异均有统计学意义(H=110.57,P<0.01)。IL-1β的表达与病理分级呈正相关(r=0.511,P<0.01)。NLRP3、Caspase-1蛋白表达与病理分级无相关性。结论 IL-1β与UC炎症的发生发展密切相关,NLRP3、Caspase-1参与炎症损伤,介导细胞焦亡,从而影响UC炎症的发生发展,提示细胞焦亡参与UC的发病过程。

布托啡诺对白细胞介素-1β诱导的关节软骨细胞焦亡的影响及机制研究

目的:探讨布托啡诺(BT)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞焦亡的影响及相关机制。方法:取对数生长期HC-a细胞,分为对照组、IL-1β组(给予10 ng/ml IL-1β)、BT低浓度(BT-L)组(给予10 ng/ml IL-1β+1μmol/L BT)、BT中浓度(BT-M)组(给予10 ng/ml IL-1β+2μmol/L BT)、BT高浓度(BT-H)组(给予10 ng/ml IL-1β+4μmol/L BT)、BT-H+NOD样受体蛋白3(NLRP3)激活剂(ATP)组(给予10 ng/ml IL-1β+4μmol/L BT+3 mmol/L ATP)。除对照组外,其余各组均经相应浓度物质处理HC-a细胞。48 h后,倒置显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖率;Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)染色检测细胞焦亡变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞NLRP3、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、IL-1βmRNA表达;ELISA法检测细胞一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-6水平;Western blot检测NLRP3/Caspase-1信号通路及IL-1β表达水平。结果:与对照组比较,IL-1β组PI阳性细胞率,NO、IL-6、TNF-α水平,IL-1β、Caspase-1、NLRP3蛋白及mRNA表达增加,细胞增殖率显著下降(均P<0.05)。与IL-1β组比较,BT-L、BT-M、BT-H组PI阳性细胞率,NO、IL-6、TNF-α水平,IL-1β、Caspase-1、NLRP3蛋白及mRNA表达下降,细胞增殖率显著增加且呈剂量依赖性(均P<0.05)。与BT-H组比较,BT-H+ATP组PI阳性细胞率,NO、IL-6、TNF-α水平,IL-1β、Caspase-1、NLRP3蛋白及mRNA表达增加,细胞增殖率显著下降(均P<0.05)。结论:BT可以抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞焦亡,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1信号通路有关。

淫羊藿苷通过抑制NLRP3炎性小体和Caspase-1通路减轻骨关节炎

目的:考察淫羊藿苷在治疗骨关节炎中的潜在价值,以及淫羊藿苷对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体和半胱天冬酶-1(Caspase-1)的调控作用。方法:本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠膝关节软骨细胞建立体外骨关节炎模型,通过碘乙酸单钠处理SD大鼠建立体内骨关节炎模型。通过乳酸脱氢酶漏出实验检测细胞毒性,通过MTT实验检测细胞活力。通过qRT-PCR检测NLRP3 mRNA的表达,通过Western Blotting检测NLRP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达。用免疫荧光法和免疫组化法检测软骨细胞和大鼠软骨中的NLRP3表达;番红O/固绿染色评价大鼠软骨病变。结果:与LPS组比较,LPS+ICA组LDH的漏出率、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、NLRP3、Caspase-1、ASC和GSDMD的表达水平明显降低,而CollagenⅡ明显升高(P<0.05)。与LPS+ICA+pcDNA3.1-NC组比较,LPS+ICA+pcDNA3.1-NLRP3组的乳酸脱氢酶漏出率及NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OA组大鼠软骨组织中NLRP3阳性细胞数量显著增加,而OA+ICA组的NLRP3阳性细胞数量明显降低(P<0.05)。与OA组比较,OA+ICA组的NRLP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达水平明显降低,而Collagen的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷通过抑制NLRP3和Caspase-1信号转导来抑制脂多糖诱导的软骨细胞损伤和细胞焦亡,从而减轻大鼠骨关节炎。

急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-1β水平的研究

目的:检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及血清白介素-1β(IL-1β)水平的变化,探讨该炎性体及IL-1β在AGA发病中可能的作用机制。方法:用RT-PCR法检测100名健康查体者(对照组)和100例AGA患者(观察组)治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14天(D14)NLRP3炎性体mRNA表达水平,同时用ELISA法测定相应IL-1β水平。比较两组患者生理指标和血生化指标的差异。结果:观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P<0.01);观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组caspase-1 mRNA表达水平,D0和D3与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。观察组血清IL-1β水平在D0、D3、D7与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:NLRP3炎性体及IL-1β在AGA患者治疗过程中水平异常,提示其在AGA发病中参与了炎症反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1诱导的Pyroptosis及其在感染性疾病中的作用

半胱氨酸天冬氨酸特异性酶-1（Caspase-1）的激活可诱导细胞通过一种称为Pyroptosis的方式死亡。Pyroptosis是一种程序性细胞死亡方式，其形态学特征有别于细胞凋亡或坏死，主要表现为包膜破裂，胞内容物外流。在许多感染性疾病中，Caspase-1诱导产生的细胞因子和细胞死亡可促进机体清除病原体；但在一些病原体感染中，Caspase-1活化引起的炎症反应和细胞死亡可能和病原体的致病机制有关。此文就细胞Pyroptosis时的形态学特征、机制及其在感染性疾病中的作用进行综述。

急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-18水平的研究

目的检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]m RNA表达水平及血清白细胞介素(IL)-18水平的变化,探讨该炎性体及IL-18在AGA发病中可能的作用机制。方法用RT-PCR法检测100名健康查体者(对照组,C)和100例AGA患者(观察组,T)治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14(D14)天NLRP3炎性体m RNA表达水平,同时用ELISA法测定相应IL-18水平。观察组与对照组比较采用独立样本t检验,一般生理指标及血生化指标用独立样本t检验,计数资料采用χ2检验。计量资料用(x-±s)表示。采用IBM SPSS 19.0软件包对所有数据进行统计学分析。结果观察组NLRP3 m RNA表达水平D0、D3及D7vs C显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),D14 vs C差异无统计学意义(P>0.05);观察组各阶段ASC m RNA表达水平与对照组相比显著升高,差异均有统计学意义,其中D0、D3及D7 vs C(P<0.01)、D14 vs C(P<0.05);观察组caspase-1m RNA表达水平,D0及D3 vs C显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),D7及D14 vs C差异无统计学意义(P>0.05)。观察组D0、D3、D7、D14血清IL-18水平与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(均为P<0.01)。结论 NLRP3炎性体及IL-18在AGA患者治疗过程中水平异常,提示它们在AGA发病中参与了炎性反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。

急性胰腺炎大鼠caspase-1依赖性腺泡细胞焦亡的观察

目的观察急性胰腺炎大鼠半胱天冬酶-1(caspase-1)依赖性腺泡细胞焦亡的情况。方法选用Wistar大鼠12只,随机分为对照组和胰腺炎组各6只。胰腺炎组经腹腔注射精氨酸制作急性胰腺炎模型。造模成功后24 h,观察胰腺组织病理变化。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺caspase-1、蛋白质gasdermin D(GSDMD)表达情况。采用酶联免疫分析(ELISA)方法检测造模成功后24 h血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)水平。并对胰腺caspase-1与血清IL-1β、IL-18水平进行Pearson相关性分析。结果病理检查显示,胰腺炎组大鼠胰腺组织以间质水肿、空泡形成及炎性浸润为主,对照组无明显病理改变;胰腺炎组与对照组大鼠的胰腺caspase-1[(0.59±0.04 vs 0.20±0.02)]、GSDMD[(0.58±0.08 vs 0.23±0.02)]表达水平比较,胰腺炎组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清ELISA检测显示:胰腺炎组与对照组大鼠的血清IL-1β[(115.14±13.12)pg/mL vs(24.34±4.52)pg/m L]、IL-18[(185.91±14.72)pg/m L vs(21.67±3.98)pg/m L]比较,胰腺炎组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);胰腺caspase-1与血清IL-1β、IL-18水平均呈正相关性(r=0.979、r=0.974,P<0.01)。结论在急性胰腺炎中存在显著的caspase-1依赖性腺泡细胞焦亡现象。

Caspase-1及其激活的细胞因子在发育期惊厥性脑损伤中的作用

目的半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1及其激活的细胞因子与许多疾病的炎症反应和凋亡有关,但与惊厥性脑损伤的关系目前尚不清楚。该研究旨在探讨caspase-1及其激活的细胞因子在发育期惊厥性脑损伤中的作用。方法96只20日龄健康Sprague-Daw ley(SD)大鼠随机分为2组:对照组和惊厥组。通过三氟乙醚反复吸入制作发育期大鼠惊厥动物模型。RT-PCR方法检测各组动物反复惊厥后6 h,1,3,7 d大脑皮层caspase-1,IL-18,IL-1βmRNA的表达,同时观察脑含水量变化和光镜下大脑皮层神经元病理改变,并对脑损伤进行神经病理半定量积分。结果①惊厥组各时间点大脑皮层caspase-1,IL-18 mRNA的表达均较对照组显著增高(P<0.05或<0.01);而IL-1βmRNA的表达呈双峰样改变,反复惊厥后6 h,1 d,7 d表达量较对照组显著增高(P<0.01),第3天表达量与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。②惊厥后皮层神经元出现水肿和变性坏死,并可见炎性细胞浸润和凋亡细胞。③反复惊厥后6 h,1 d,3 d脑含水量均较对照组显著升高(P<0.01),第7天与对照组相比较差异无显著性(P>0.05);惊厥组各时间点脑损伤积分较对照组显著升高(P<0.01)。结论caspase-1及其激活的细胞因子在发育期惊厥性脑损伤中发挥重要作用。

Caspase-1及其激活的IL-18在大鼠急性脊髓组织损伤后的表达及意义

目的探讨Caspase-1及其激活的细胞因子白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)在大鼠急性脊髓组织损伤(SCI)后的表达及意义。方法成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组24只。两组依据损伤后取材时间各再分4个亚组。脊髓损伤组应用改良的Allen's重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,对照组只做T9全椎板切除术。分别于术后6h、1d、3d、7d处死各组大鼠,以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-18的表达情况。结果对照组大鼠脊髓组织中少量细胞Caspase-1、IL-18表达阳性。脊髓损伤后6h,损伤组Caspase-1、IL-18的表达高于对照组,1d继续增高,3d表达最多,7d略有降低,但仍高于对照组。脊髓损伤组各时间点脊髓组织中Caspase-1和IL-18表达阳性的细胞数较对照组显著增高(P<0.01)。结论正常大鼠脊髓组织内存在少量Caspase-1、IL-18的表达。大鼠脊髓损伤后,Caspase-1和IL-18的表达迅速增强。Caspase-1和IL-18的表达增强表明其可能参与了脊髓继发性损伤,并可能是损伤性因素之一。

丹参诱导成纤维样滑膜细胞caspase-1基因表达研究

目的探讨丹参对类风湿关节炎患者和骨关节炎患者的成纤维样滑膜细胞(FLSs)caspase-1 mRNA表达的影响。方法类风湿关节炎(RA)患者关节滑液和骨关节炎(OA)患者关节滑液中游离滑膜样细胞经原代培养,分别用终浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2mg/ml的丹参作用24h后,观察形态;提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SYBR green适时荧光定量PCR方法检测caspase-1的表达。结果无论RA还是OA,在丹参浓度为0.2mg/ml时,FLSs形态变化不明显;当丹参浓度为0.4mg/ml及以上时,FLSs发生凋亡样改变。caspase-1的基础表达量(未加丹参刺激)在RA FLSs与OA FLSs中为差异无统计学意义(P>0.05);以丹参浓度为0作为对照组,无论是在RAFLSs,还是在OA FLSs中,Caspase-1的表达量均随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4mg/ml时开始差异有统计学意义(P<0.001)。结论 caspase-1在RAFLSs和OA FLSs中的表达无明显变化可能表明两种细胞的炎性性质的一致性;丹参可诱导FLSs caspase-1在mRNA水平的表达增加,且呈剂量关系,这可能与丹参抗炎和(或)诱导FLSs凋亡有关。

Caspase-1及其下游炎症因子在大鼠脊髓损伤中的表达及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)及其下游炎症因子白介素-1beta(IL-1β)和白介素-18(IL-l8)在大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)中的表达及意义。方法将成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠84只随机分为对照组和脊髓损伤组,每组42只。脊髓损伤组应用改良的Allen’s重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型,对照组只做全椎板切除。以损伤部位为中心取材,HE染色观察脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-1、IL-1β及IL-18的表达情况。结果对照组大鼠脊髓组织中Caspase-1及其下游炎症因子阳性细胞有少量表达,而脊髓损伤组Caspase-1及其下游炎症因子的阳性表达较对照组显著增高,Caspase-1及IL-18在脊髓损伤后3d表达达到峰值,而IL-1β于损伤后6h表达达到高峰。结论 Caspase-1及其下游炎症因子可能参与了SCI后的继发性损伤,并且可能是继发性脊髓损伤的主要损伤因素之一。

大鼠急性脊髓损伤后IL-18和Caspase-1的表达

目的探讨急性脊髓损伤(SCI)后脊髓组织中IL-18、Caspase-1表达的临床意义。方法将60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(30只)和脊髓损伤组(30只),分别在手术后3h、6h、12h、3d、7d进行取材,依取材时间不同再细分为5个亚组,每个亚组6只。假手术组只做全椎板切除而不用Allen’s重物打击法造成脊髓损伤;脊髓损伤组进行全椎板切除,并采用改良的Allen’s重物打击法造成脊髓损伤建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用BBB评分法分别在造模后1、3、7d对所有实验大鼠的后肢运动功能进行评分。脊髓组织病理学采用HE染色观察,Western blot测定IL-18、Caspase-1蛋白的表达量。结果假手术组大鼠麻醉清醒后活动自如,脊髓损伤组大鼠在麻醉清醒后即可出现双侧后肢完全瘫痪;假手术组大鼠术后1、3、7d的BBB评分均高于脊髓损伤组(P均<0.05)。脊髓组织病理学观察,假手术组光镜下可见神经元细胞排列整齐,结构形态规则,无炎性细胞出现,脊髓组织中IL-18、Caspase-1蛋白在各时间点表达相对稳定;而脊髓损伤组损伤段脊髓灰质出现片状出血,随时间延长会出现灰质结构被破坏、细胞空泡变性,大量神经元细胞死亡、出现大量的炎性细胞;脊髓损伤组大鼠IL-18和Caspase-1蛋白的表达在伤后3h均呈高表达,在伤后3d达到高峰;且各时间点均高于假手术组(P均<0.01)。结论 IL-18和Caspase-1蛋白在SCI的高表达,提示它们可能参与了SCI后的继发性损伤。