异丙酚对兔缺血/再灌注损伤心肌半胱天冬酶-12的影响

目的 观察异丙酚对兔缺血/再灌注损伤心肌半胱天冬酶-12（caspase-12）的影响,从内质网角度探讨异丙酚对减少缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的机制.方法健康雄性新西兰大白兔24只,体重2.1～2.3 kg.随机分为假手术组（Sham组）、缺血/再灌注组（I/R组）和异丙酚组（P组）（每组8只）。术中胸膜破裂和死亡者不纳入实验,再按照随机原则在相同条件下予以补齐.实验结束后取左心室缺血/再灌注区心肌组织，免疫组织化学方法检测caspase-12、半胱天冬酶-3（caspase-3）,用Motic 6.0图像分析系统进行处理,比较各观测指标平均光密度值（Average optical value AO值）；用流式细胞检测技术（flow cytometry,FCM）及DNA原位末端缺口标记法（TUNEL法）检测缺血/再灌注区心肌细胞凋亡。结果 Sham组caspase-12、caspase-3低表达；FCM检测有少量凋亡早期细胞,TUNEL染色见少量阳性细胞;与Sham组比较,I/R组和P组caspase-12、caspase-3表达增加（P＜0.05），FCM检测和TUNEL染色见凋亡细胞数增加（P＜0.05）；与I/R组比较,P组Caspase-12、Caspase-3表达下降（P＜0.05），FCM和TUNEL染色见凋亡心肌细胞数减少（P＜0.05）。结论抑制caspase-12介导的caspase级联反应性凋亡途径的激活是异丙酚减少缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的机制之一。

NGF抑制兔脑缺血/再灌注损伤时caspase-12的表达

目的探讨神经生长因子(NGF)对兔脑缺血/再灌注损伤半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的影响。方法健康雄性新西兰大白兔26只,随机分成假手术组(Sham组,n=6)、缺血/再灌注组(I/R组,n=10)和NGF治疗组(NGF组,n=10)。免疫组化方法检测组织caspase-12及caspase-3的表达;用流式细胞术(FCM)及DNA原位末端缺口标记法(TUNEL法)检测神经细胞凋亡。结果与Sham组相比,I/R组caspase-12及caspase-3表达增加(P<0.01),凋亡细胞数增加(P<0.01);而NGF处理后显著缓解caspase-12与caspase-3的表达增加及凋亡细胞数的增加(P<0.01),但仍高于Sham组。结论抑制caspase-12介导的caspase级联反应性凋亡途径的激活是NGF减少缺血/再灌注损伤细胞凋亡的机制之一。

大蒜素通过抑制caspase-12减轻巨噬源性泡沫细胞凋亡

目的:研究大蒜素对巨噬源性泡沫细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡通路关键分子半胱天冬酶-12(caspase-12)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予大蒜素(12.5、25和50 mg/L)和4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL;100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)处理24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;采用相应的试剂盒测定细胞内caspase-3和培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的活性;采用Western blot技术检测caspase-12的表达变化;油红O染色检测细胞内脂质蓄积;酶比色法测定细胞内总胆固醇含量。结果:与ERS抑制剂PBA相似,大蒜素可减轻oxLDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加、LDH漏出减少、细胞凋亡率和caspase-3活性降低(P<0.05);ERS诱导剂TM可导致巨噬细胞活力下降,LDH漏出增多及细胞凋亡率升高(P<0.05),大蒜素可明显阻断TM的上述作用;大蒜素明显抑制ox-LDL所致的caspase-12活化(P<0.05);与TM组相比,大蒜素也可显著抑制TM所诱导的caspase-12活化(P<0.05)。另外,大蒜素还可显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成(P<0.05)。结论:大蒜素可减少ox-LDL所致的巨噬源性泡沫细胞凋亡,其机制可能与抑制caspase-12活化有关。

米诺环素抑制大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及Caspase-12的表达

目的探讨米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡及半胱天冬酶-12(Caspase-12)表达的影响。方法用大脑中动脉栓塞(线栓)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。18只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组和米诺环素干预组。应用DNA原位末端缺口标记(TUNEL)法检测神经元凋亡,免疫组化法检测组织Caspase-12蛋白的表达。结果与假手术组相比,缺血再灌注组海马CA1区凋亡神经元数增加(P<0.05),Caspase-12表达增加(P<0.05);米诺环素处理后显著缓解凋亡神经元数的增加,抑制Caspase-12的表达(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05)。结论抑制Caspase-12介导的Caspase介导的级联反应凋亡途径的激活是米诺环素减少缺血再灌注损伤神经元凋亡的机制之一。

Caspase3、Caspase12、CHOP在急性坏死性胰腺炎大鼠垂体组织中的表达及作用

目的观察大鼠垂体组织在急性坏死性胰腺炎时病理改变及探讨垂体组织损伤机制。方法24只SD大鼠,随机数字法分为正常组(normal group,N组)、假手术组(Sham operation group,SO组)、急性坏死性胰腺炎组(acute necrotizing pancreatitis group,ANP组),每组8只大鼠,逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备(acute necrotizing pancreatitis,ANP)模型。全自动生化仪检测血清淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LIP)水平;放射免疫分析法测定血清生长激素(growth hormone,GH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)及促性腺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平;光镜下观察胰腺组织、垂体组织病理学改变;免疫组化法测定垂体组织半胱氨酸天冬酶-3(Caspase3)、半胱氨酸天冬酶-12(Caspase12)和C/EBP同源蛋白(CHOP)水平。结果与SO组比较,ANP组血清AMY(8679.16±307.60)U/L、LIP(9376.83±380.92)U/L水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ANP组血清ACTH(0.92±0.41)pg/ml、TSH(0.14±0.06)pg/ml、FSH(2.01±0.38)pg/ml水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);ANP组垂体组织Caspase3(65.66±7.58)、Caspase12(70.66±4.76)和CHOP(143.16±19.05)水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下ANP组胰腺损伤程度较SO组明显加重,差异有统计学意义(P<0.05),ANP组垂体组织充血程度较SO组明显加重。结论ANP时,大鼠垂体组织存在病理和功能改变,内质网应激损伤在垂体损伤中起到一定作用。