半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织的表达及其意义

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织中的表达及意义。方法20只SD大鼠建立腹部创伤大鼠模型,按照数字表法分为对照组和腹部创伤组,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹分析两组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析两组大鼠肠道组织细胞凋亡水平;采用免疫荧光分析两组大鼠肠道组织LC3点的数量;采用免疫组织化学分析两组大鼠肠道组织裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组大鼠肠道组织炎性因子水平。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1 mRNA表达水平(0.96±0.11、1.08±0.12)明显低于腹部创伤组大鼠(1.82±0.12、1.77±0.18),差异有统计学意义(t=16.910、10.120,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平[(18.82±3.56)pg/ml]明显低于腹部创伤组大鼠[(71.98±11.80)pg/ml],差异有统计学意义(t=13.640,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1蛋白相对表达水平(0.60±0.08、0.89±0.08)明显低于腹部创伤组大鼠(1.34±0.18、1.56±0.16),差异有统计学意义(t=12.170、12.230,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织cleaved Caspase-3蛋白相对表达水平(97.66±11.25)明显低于腹部创伤组大鼠(191.33±24.47),差异有统计学意义(t=10.990,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织TUNEL染色阳性率[(2.83±1.10)%]明显低于腹部创伤组大鼠[(50.59±10.15)%],差异有统计学意义(t=14.790,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织LC3点数量[(45.20±14.91)个]明显低于腹部创伤组大鼠[(82.81±13.17)个],差异有统计学意义(t=5.977,P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,对照组大鼠肠道组织自噬底物p62蛋白表达水平(1.26±0.11)明显高于腹部创伤组大鼠(0.62±0.11),差异有统计学意义(t=12.940,P<0.05)。结论腹部创伤后肠道组织中Caspase-3和Beclin1表达水平显著增加,导致肠道细胞凋亡和自噬水平显著增加,肠道损伤加剧。

苦参碱诱导人乳腺癌细胞凋亡逆转耐药及对酸化蛋白激酶B、Fas、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

乳腺癌的综合治疗除手术、放疗、内分泌外，化疗仍是最有效的治疗方法，化疗可明屈提高患者的生存率，但肿瘤的多约耐药（MDR）是临床化疗最棘手的难题，寻找高效低毒能抗肿瘤并能逆转MDR新药是目前肿瘤防治研究的热点。

血管性痴呆大鼠模型大脑海马区半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达及意义

血管性痴呆(VD)是一类脑卒中后导致的认知和行为障碍的疾病,临床上较为常见。相关流行病学研究认为,其普通人群发病率在3%左右。海马区解剖位置在大脑丘脑和内侧颞叶之间,属边缘系统,其与记忆方向等位等高级中枢神经活动有关。该区域的功能损失与血管性痴呆存在一定的相关性。为半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3是细胞凋亡过程中的重要剪切酶,其高表达提示细胞凋亡水平增高。我们应用改良四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型,探讨VD大鼠脑海马区Caspase-3蛋白表达与血管性痴呆的关系。

转化生长因子-β1诱导的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶依赖的人胃癌细胞凋亡途径

目的探讨转化生长因子-β1（TGF—β1）诱导胃癌细胞的凋亡作用及机制。方法利用TGF-β1诱导胃癌细胞SGC7901凋亡，小干扰RNA（siRNA）封闭半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-8的表达，Westernblot检测诱导及封闭前后各Caspases表达随时间的变化，流式细胞术分析细胞的凋亡率。结果TGF—β1作用后，各组细胞的凋亡率明显增加，0、24、48h凋亡率分别为1．13％、14．88％、37．32％；Caspase-812h后激活，Caspase-924h后激活；白RNA干扰（RNAi）后Caspase-8表达明显下降，24h后Caspase-8表达量为对照组的11．2％，48～72h未测到表达，96h后Caspase-8表达重新出现，为对照组的9．2％。结论TGF—B1通过Caspase途径诱导胃癌细胞发生凋亡，由Caspase-8开始启动；抑制Caspase-8表达可以在一定程度上阻断TGF—β1／Caspases信号的转导，进而抑制细胞凋亡。

右美托咪定对痫性发作大鼠海马神经细胞B细胞淋巴瘤／白血病-2、B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的观察右美托咪定（DEX）对痫性发作大鼠海马神经细胞凋亡蛋白表达的影响。方法将36只sD大鼠随机分为3组（n=12）：对照组（Control组）、右美托咪定组（DEX组）及致痫组（EP组）。DEX组给予10μg／k剂量DEX灌胃，连续3d，至致痫当日；对照组、致痫组则分别给予等体积生理盐水灌胃。以氯化锂-匹罗卡品制作致痫模型，观察SD大鼠行为学变化；采用Westernblot检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果EP组大鼠均表现易激惹，DEX组反复自发性痫性发作（SRS）次数[（5．67±1．53）次]比EP组[（10．33±3．06）次]明显减少，且差异有统计学意义（P〈0．05）。bcl-2、bax、bcl-2／bax和Caspase-3表达水平结果，对照组分别为1．0557±0．0081、0．5712±0．0057、1，0870±0．0026、0；DEX组分另U为0．9654±0．0216、0．6920±0．0028、1．3951±0．0328、0．6765±0．9697；EP组分另0为0．8925±0．0063、0．7427±0．0010、1．2016±0．0082、0．8565±0．9626。EP组与对照组比较，大鼠海马、bax、活化的active—Caspase-3表达水平增加，bcl-2表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05），bcl-2／bax比值升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；DEX组与EP组比较，海马bcl-2表达水平、bcl-2／bax比值升高，bax、active—Caspase-3表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DEX可能作用抑制大鼠海马神经细胞Casepase-3和box基因表达，减少SRS次数，对海马神经元产生保护作用。

二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白（Livin）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达的影响.方法 采用体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,用50、100、200、400 μmol/L的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,在24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法测各组细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率.作用于骨肉瘤MG-63细胞24h后,用Western blot方法检测各组细胞Livin和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 随PDTC浓度增加骨肉瘤MG-63细胞增殖活性呈下降趋势,作用时间越长细胞的增殖活性越低,而细胞的凋亡率呈上升趋势（P＜0.05）.作用24h后,随PDTC浓度增加各组细胞中Livin蛋白的表达为1.384±0.009、0.912±0.007、1.501±0.011、0.751 ±0.008,对照组为1.834±0.006,呈下降趋势,而Caspase-3蛋白表达呈上升趋势（P＜0.05）.结论 PDTC可诱导入骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与PDTC抑制核因子（NF）-κB传导通路,下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂早期干预在脓毒症急性肾损伤中的作用

目的观察半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）抑制剂Ac—DEVD—CHO在脓毒症诱导的急性肾损伤（AKI）中的作用。方法健康清洁级雄性C57BL／6小鼠72只，随机分为3组（每组24只）：假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孑L组（CLP组）和Caspase-3抑制剂组（cI组）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症AKI小鼠模型。cI组术后30min立即给予4μg／gCaspase．3抑制剂Ac—DEVD—CHO皮下注射。于术后6、12、24h各组小鼠取血及肾组织，测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度，观察肾组织光镜下病理学变化并检测肾组织细胞凋亡率及凋亡相关因子Caspase-3、B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）、bax蛋白在肾组织中的表达。结果与Sham组比较，CLP组血清Cr术后6h、BUN术后6h和12h显著升高（P〈0．05）；肾组织损伤评分、肾组织凋亡率各时间点均显著增高（P〈0．05）；术后24h肾组织Caspase-3、bcl-2、bax表达上调（P〈0．05）。与CLP组比较，CI组术后6h血清Cr、BUN浓度显著下降[血清cr：（83．82±10．15）μmol／L比（125．05±33．48）μmol／L；BUN：（10．15±4．34）mmol／L比（14．02±5．51）mmol／L，P〈0．05]；肾组织损伤评分、肾组织细胞凋亡率各时间点均显著降低[肾组织损伤评分6h：（0．88±0．64）分比（2．17±0．75）分，12h：（0．63±0．74）分比（1．83±0．98）分，24h：（1．83±0．98）分比（1．33±0．52）分；肾组织细胞凋亡率6h：（13．28±0．91）％比（18．27±1．40）％，12h：（9．71±0．91）％比（15．85±3．51）％，24h：（8．45±．55）％比（12．48±2．14）％，P〈0．05]；肾组织Caspase-3及促凋亡因子bax表达下调，而抗凋亡因子bcl-2表达上调（P〈0．05）。结论Caspase-3抑制剂可抑制肾组织细胞凋亡，从而起到肾保护性作用。

生存素和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在骶骨脊索瘤中的表达及其与凋亡的相关性

目的探讨骶骨脊索瘤组织中生存素（Survivin）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）的表达相关性及其临床意义。方法应用免疫组织化学（SP）法检测30例人骶骨脊索瘤组织和10例癌旁组织中Survivin和Caspase-3的表达。结果Survivin在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为70．0％，在瘤旁组织中不表达，两者差异有统计学意义（P〈0．05），Survivin的表达与患者肿瘤有无局部浸润、是否复发相关（P〈0．05）；Caspase．3在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为33．3％，显著低于瘤旁组织的90．0％（P〈0．05），Caspase-3的表达与患者肿瘤有无局部浸润、是否复发相关（P〈0．05）。Survivin与Caspase-3表达呈显著负相关（r=-0．463，P〈0．05）。结论Survivin在骶骨脊索瘤中高表达，可能通过抑制Caspase-3活性，从而阻止细胞凋亡，促进肿瘤细胞增殖与肿瘤的发生、发展。

热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C／EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的观察热休克蛋白70（HSP70）表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-12、C／EBP同源蛋白（CHOP）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70（HSP70）基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达，建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型，测定细胞凋亡，提取内质网测定，采用免疫组织化学和Westernblot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变。结果对照组细胞凋亡率（9．28±0．83）％、晚期（28．60±1．83）％，HSP70基因转染组早期细胞凋亡率（4．30±0．72）％、晚期（11．6±1．66）％，HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率（29．3±2．54）％、晚期（34．4±2．43）％，免疫组织化学和Westernblot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达；HSP70表达抑制细胞凋亡，但HSPT0反义寡核苷酸则促进；HSPT0显著抑制Caspase-12和CHOP的表达，HSP70增加JNK的表达；HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达。结论转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3和β-连环蛋白、糖原合成激酶-3β在体外培养保存关节软骨组织中的表达及其相关性

目的体外培养保存关节软骨组织，探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）和Wnt／β-连环蛋白（β-catenin）信号通路中关键蛋白表达规律及其相关性。方法选取20只健康成年新西兰大白兔，切取膝骨软骨柱100枚，随机分为5组（n=20）。对照组：取材2h内的新鲜软骨；实验组：分为4组，将软骨柱浸入MEME培养液中保存，第14、21、28、35天时各取一组检测指标。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V—FITC）细胞凋亡检测法测定凋亡率，Western blot检测Caspase-3、糖原合酶激酶-38（GSK-3B）表达，免疫组织化学法检测β-catenin表达。结果随着保存时间延长，软骨细胞凋亡率逐渐增加，Caspase-3、GSK-3β表达逐渐上调，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05），各组软骨细胞凋亡率为：对照组（6．04±1．09）％、14d（12．75±0．40）％、21d（21．90±0．57）％、28d（30．44±0．79）％、35d（40．70±0．43）％，Caspase-3表达量为：0．078±0．032、0．193±0．026、0．327±0．041、0．510±0．023、0．719±0．063，GSK-3β表达量为：0．162±0．025、0．242±0．019、0．493±0．012、0．717±0．020、0．905±0．011；免疫组织化学结果显示，细胞质与细胞核中B-catenin阳性染色逐渐增强，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞凋亡率与Caspase-3、GSK-3β、β—Catenin表达呈高度正相关（r=0．695、0．702、0．682，P〈0．01）；Caspase-3与GSK-3β、β—catenin表达呈高度正相关（r=0．713、0．661，P〈0．01）。结论体外培养保存关节软骨组织过程中，软骨细胞凋亡伴有Wnt／β-catenin信号通路关键蛋白β—catenin和GSK-3β表达的显著上调。

洛铂诱导胆管癌RBE细胞凋亡及其对B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8和细胞色素C凋亡相关因子影响

目的 观察洛铂对胆管癌RBE细胞抗肿瘤作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、actived-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和细胞色素C（Cyt-C）转录及表达的影响.方法 不同浓度洛铂干预胆管癌RBE细胞一定时间,噻唑蓝（MTT）比色法检测RBE细胞的生长抑制,流式细胞法检测细胞周期,膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染检测凋亡率,Western blot及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测bax、bcl-2、actived-Caspase-3、Caspase-8、Cyt-C蛋白及mRNA表达的变化.结果 MTT结果显示随浓度升高及时间延长,药物对细胞增殖抑制作用增强（P＜0.05）,24 h的半数抑制剂量（IC50）值为11.82 mg/L.随药物浓度增加G0/G1期与G2/M期细胞增加,S期细胞比例减少（P＜0.05）.Annexin V-异硫氰酸荧光素（FITC）/PI检测显示洛铂能诱导RBE细胞凋亡,与对照组比较有更高的凋亡率（Pp＜0.05）.Western blot及Real-time PCR检测结果显示bax、actived-Caspase-3、Caspase-8和胞质内Cyt-C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低.结论 洛铂对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放Cyt-C激活Caspase-8、Caspase-3诱导RBE细胞凋亡.

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8对非小细胞肺癌脑转移的预测价值

目的 探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-8在非小细胞肺癌脑转移中的预测价值.方法 采用免疫组织化学方法研究284例手术治疗的非小细胞肺癌患者Caspase-8的表达,利用Kaplan-Meier法评价脑转移发生时间与Caspase-8表达的关系.结果 284例患者中,女104例,男180例;平均年龄（62.5±10.5）岁;中位随访时间29.5个月（12 ～ 108个月）,随访期间共有8.1％ （23/284）的患者发生了脑转移.在Caspase-8高表达组脑转移发生率为14.0％ （15/107）,而Caspase-8低表达组脑转移发生率仅为4.5％（8/177）.单因素和多因素Cox回归模型提示,Caspase-8是肺癌脑转移的独立危险因素.Caspasc-8高表达能够预测早期的脑转移（Log-rank检验,P＜0.05）.结论 Caspase-8高表达与非小细胞肺癌患者术后脑转移明显相关,Caspase-8可以作为肺癌脑转移高危患者筛选的标志.

芹菜素抑制PC-3细胞增殖及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3的作用

目的 观察芹菜素（API）对雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞的调控作用并探讨其机制.方法 以不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）的API干预PC-3细胞48 h,通过细胞形态学观察以及细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测API对PC-3细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3 mRNA的表达.结果 CCK-8法检测显示0、10、20、40μmol/L API处理PC-3细胞48 h后的吸光度值分别为1.48 ±0.04、0.81 ±0.04、0.69±0.03、0.33±0.03,相较于对照组,10、20、40 μmol/L API浓度组对PC-3细胞均有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为44.7％、53.5％、77.4％ （P＜ 0.01）.0、10、20、40 μmol/L API浓度组Caspase-3 mRNA的表达分别为0.230±0.036、0.410±0.080、0.480 ±0.100、0.730±0.150,实验组与对照组之间的差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 API对PC-3细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性,其机制可能通过诱导PC-3细胞Caspase-3表达的增加,最终导致细胞凋亡.

B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3在不同级别脑胶质瘤中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学法检测60例脑胶质瘤和11例正常脑组织中bcl-2、Caspase-3蛋白表达.结果 bcl-2在正常脑组织、低、高级别胶质瘤组表达阳性率分别为9％、78％、100％,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;Caspase-3表达阳性率分别为0％、100％、84％,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;bcl-2、Caspase-3在肿瘤组表达呈负相关（r=-0.814,P＜0.05）.结论 在胶质瘤中bcl-2表达增高,通过抑制Caspase-3表达,失去对细胞周期的调控,促进胶质瘤的增殖和恶性进展.

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达及意义

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3在乙醇致睾丸损伤中表达的变化，并探讨其意义。方法将24只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组，每组12只，连续对实验组小鼠腹腔注射乙醇14d，建立睾丸损伤模型，处死所有小鼠并收集睾丸标本，应用实时定量聚合酶链反应（Real—time PCR）和Western blot检测Caspase-3 mRNA和蛋白的表达变化。结果Real-time PCR结果显示实验组Caspase-3 mRNA表达（3．35±0．13）显著高于对照组（P〈0．05）；Western blot结果显示Caspase-3蛋白表达（44．51±8．94）显著高于对照组（140．66±6．25，P〈0．05）。结论Caspase-3作为重要的促凋亡基因参与乙醇致睾丸损伤的过程。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1抑制剂VX-765对急性胰腺炎的保护作用及其机制

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1抑制剂VX-765对急性胰腺炎的保护作用及其分子机制。方法将60只SD大鼠(2019年8月购自河南省实验动物中心)按照随机数字表法分为假手术组、模型组和VX-765组,模型组和VX-765组经手术注射5%牛黄胆酸钠制备急性胰腺炎模型,对照组只进行手术不注射5%牛黄胆酸钠。建模24 h后对照组和模型组大鼠经腹腔注射生理盐水,VX-765组大鼠经腹腔注射50 mg/kg VX-765,治疗48 h后,观察3组大鼠存活率,采用自动生化仪检测血清淀粉酶活性;采用苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺病理学变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组大鼠外周血白细胞介素(IL)-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达水平,计量资料比较采用单因素方差分析。结果VX-765组大鼠血清淀粉酶活性[(1530.40±280.45)U/L]低于模型组血清淀粉酶活性[(2910.43±429.12)U/L],差异有统计学意义(t=4.891,P<0.05)。VX-765组大鼠病理学评分(4.09±0.17)分低于模型组大鼠病理学评分(9.56±2.61)分,差异有统计学意义(t=3.018,P<0.05)。VX-765组大鼠胰腺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平(1.96±0.14、1.47±0.17)低于模型组大鼠胰腺组织中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平[(3.18±0.21)、(2.67±0.17)],差异有统计学意义(t=2.999、2.104,P<0.05)。VX-765组大鼠外周血清IL-1β和IL-18水平[(159.43±7.09)、(99.50±5.09)ng/L]低于模型组大鼠外周血清IL-1β和IL-18水平[(310.48±25.55)、(190.65±10.43)ng/L],差异有统计学意义(t=2.801、2.466,P<0.05)。结论VX-765通过抑制Caspase-1活性,降低IL-1β和IL-18等炎性因子水平,进而缓解急性胰腺炎。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）．3抑制剂对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法45只肺缺血再灌注损伤模型大鼠随机分为模型组、低剂量组和高剂量组；同时选取15只大鼠作为假手术组。低剂量组和高剂量组分别经尾静脉注射z-VAD-FMK5mg／kg和15mg／kg，模型组和假手术组给予尾静脉注射等体积的生理盐水。治疗12h后，取肺组织，测定肺组织中氧化应激指标[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和活性氧水平（ROS）]和炎性因子水平[肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β和IL-6]；采用Westernblot分析凋亡相关蛋白水平[凋亡诱导因子（AIF）、Caspase．3、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）和bcl-2相关x蛋白（bax）]；采用原位缺口末端标记法（TUNEL）染色分析肺组织中细胞凋亡水平。结果与对照组比较，模型组、低剂量组和高剂量组MDA和ROS水平明显增加，而SOD水平显著降低（均P=0．000）。与模型组比较，低剂量组和高剂量组MDA和ROS水平明显下降，而SOD水平显著升高（均P=0．000）。与假手术组比较，模型组、低剂量组和高剂量组TNF-α、IL-1β和IL-1β等炎性因子水平显著升高，而与模型组比较，低剂量组和高剂量组上述炎性因子显著下调（均P=0．000）。与假手术组比较，模型组、低剂量组和高剂量组AIF、Caspase-3和bax蛋白水平显增加，而bcl-2水平显著下调；与模型组比较，低剂量组和高剂量组AIF、Caspase-3和bax蛋白水平明显下降，而bcl-2水平显著升高。与假手术组（3．43±0．67）比较，模型组、低剂量组和高剂量组肺组织细胞凋亡水平（25．32±3．21、17．39±2．97和11．33±2．56）显著升高，差异有统计学意义（均P=0．000）。与模型组比较，低剂量组和高剂量组肺组织中细胞凋亡水平显著下降，差异有统计学意义（均P=0．000）。与低剂量组比较，高剂量组大鼠肺组织中细胞凋亡水平下降更为显著，差异有统计学意义（P=0．000）。结论Caspase-3抑制剂z-VAD．FMK可显著降低氧化应激、炎症以及肺细胞凋亡，对肺组织起到保护作用。

芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响及其意义

本研究旨在检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3蛋白及mRNA表达的变化,观察芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响.一、材料与方法1．材料：雄性BALB／c（nu／nu）裸鼠30只；人前列腺癌细胞株PC-3；R＆D公司生产的人Caspase-3酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒；Fermentas公司生产的逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）试剂盒；β-肌动蛋白（β-actin）、Caspase-3引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

大鼠液压冲击脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12动态表达变化和意义

目的探讨大鼠颅脑液压冲击伤脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12蛋白及其mRNA的表达变化及其意义.方法成年雄性SD大鼠48只应用Dixon法制作颅脑损伤模型,造模后6、12、24h、3d用免疫组织化学方法、蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别测定Caspase-12蛋白及其mRNA的表达,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定神经细胞凋亡变化.应用SPSS 22.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较差异性分析采用Student's t检验.结果与假手术组(Sham组)比较,模型组(TBI组)自伤后6h,损伤灶周脑组织Caspase-12蛋白开始增加[积分吸光度(IA)0.165±0.021],24 h达高峰(0.489±0.034),3d开始下降(0.258±0.027),差异有统计学意义(￡=2.293、4.594、6.488、3.605,P<0.05).Western blot进一步印证了Caspase-12蛋白变化趋势.Caspase-12 mRNA于伤后6h开始增加(0.626±0.054),12 h达高峰(0.867±0.048),持续至3d后下降(0.764±0.077),差异有统计学意义(t=2.326、4.185、3.607、2.215,P<0.05);TUNEL发现神经细胞凋亡指数(AI)自6h开始增高(22.372 ±3.304),24h达到峰值(55.222 ±4.123),3d时出现下降(28.226±3.273),差异有统计学意义(t=3.093、6.224、6.984、4.133,P<0.05).结论内质网应激的特异性关键蛋白Caspase-12表达上调在液压冲击脑损伤的神经细胞凋亡中起重要作用.

肝缺血再灌注时葡萄糖调节蛋白78、葡萄糖调节蛋白94、磷酸化蛋白激酶B1及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12的表达及意义

目的动态观察大鼠肝缺血再灌注（HIRI）不同时限葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、葡萄糖调节蛋白94（GRP94）、磷酸化蛋白激酶B1（p-Akt1）及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶12（Caspase-12）的表达变化，并探讨其意义。方法将55只Wistar雄性大鼠随机分为正常组（n=5）、假手术组（n=25）、缺血再灌注组（n=25），无损伤动脉钳阻断肝血流45min后使其复流，用免疫组织化学法检测GRP78、GRP94及Caspase-12在再灌注0、3、12、24、72h时的蛋白表达，用Western blot法检测同期p-Akt1蛋白表达。结果GRP78在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（393．04±79．06），12h时达峰值（2369．38±182．53），24h（1023．02±185．61）及72h（505．19±102．89）表达开始下降，但仍高于前述各组表达水平。GRP94在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（168．47±21．08），12h时达峰值（678．80±52．62），24h（425．78±38．63）及72h（173．99±36．82）表达降低。Caspase-12在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（647．00±73．68），12h达峰值（6867．67±601．11），24h（2356．12±210．65）及72h（675．89±109．3）表达开始降低。p-Akt1在缺血再灌注组各观察时限点的表达趋势与GRP78一致，显著高于正常组及假手术组。结论大鼠肝缺血再灌注损伤可触发经内质网途经的Caspase级联反应活化；GRP78与GRP94可能通过降低内质网负荷和促进糖异生而发挥细胞保护作用；p-Akt1可能是此过程中机体通过磷酸肌醇3激酶（P13K）／Akt信号通路上调GRP78表达的重要信号分子。