热休克蛋白70对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12、C／EBP同源蛋白和c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的观察热休克蛋白70（HSP70）表达对心肌细胞内质网应激半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-12、C／EBP同源蛋白（CHOP）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响。方法应用腺病毒基因表达技术诱导热休克蛋白70（HSP70）基因在SD乳鼠心肌细胞的表达和应用HSP70反义寡核苷酸导人技术抑制HSP70的表达，建立细胞培养和心肌细胞缺氧模型，测定细胞凋亡，提取内质网测定，采用免疫组织化学和Westernblot方法测定转染前后HSP70的表达水平及HSP70的表达对内质网应激导致的细胞凋亡、Caspase-12、CHOP、JNK通路引起的凋亡信息传递的改变。结果对照组细胞凋亡率（9．28±0．83）％、晚期（28．60±1．83）％，HSP70基因转染组早期细胞凋亡率（4．30±0．72）％、晚期（11．6±1．66）％，HSP70反义寡核苷酸处理组早期细胞凋亡率（29．3±2．54）％、晚期（34．4±2．43）％，免疫组织化学和Westernblot证实HSP70基因成功转染人心肌细胞内表达；HSP70表达抑制细胞凋亡，但HSPT0反义寡核苷酸则促进；HSPT0显著抑制Caspase-12和CHOP的表达，HSP70增加JNK的表达；HSP70反义寡核苷酸组明显增加CHOP的表达。结论转染HSP70表达通过调节内质网应激Caspase-12、CHOP和JNK信号通路调控心肌细胞凋亡。

大鼠液压冲击脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12动态表达变化和意义

目的探讨大鼠颅脑液压冲击伤脑损伤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-12蛋白及其mRNA的表达变化及其意义.方法成年雄性SD大鼠48只应用Dixon法制作颅脑损伤模型,造模后6、12、24h、3d用免疫组织化学方法、蛋白质印迹法(Western blot)以及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别测定Caspase-12蛋白及其mRNA的表达,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定神经细胞凋亡变化.应用SPSS 22.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较差异性分析采用Student's t检验.结果与假手术组(Sham组)比较,模型组(TBI组)自伤后6h,损伤灶周脑组织Caspase-12蛋白开始增加[积分吸光度(IA)0.165±0.021],24 h达高峰(0.489±0.034),3d开始下降(0.258±0.027),差异有统计学意义(￡=2.293、4.594、6.488、3.605,P<0.05).Western blot进一步印证了Caspase-12蛋白变化趋势.Caspase-12 mRNA于伤后6h开始增加(0.626±0.054),12 h达高峰(0.867±0.048),持续至3d后下降(0.764±0.077),差异有统计学意义(t=2.326、4.185、3.607、2.215,P<0.05);TUNEL发现神经细胞凋亡指数(AI)自6h开始增高(22.372 ±3.304),24h达到峰值(55.222 ±4.123),3d时出现下降(28.226±3.273),差异有统计学意义(t=3.093、6.224、6.984、4.133,P<0.05).结论内质网应激的特异性关键蛋白Caspase-12表达上调在液压冲击脑损伤的神经细胞凋亡中起重要作用.

肝缺血再灌注时葡萄糖调节蛋白78、葡萄糖调节蛋白94、磷酸化蛋白激酶B1及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12的表达及意义

目的动态观察大鼠肝缺血再灌注（HIRI）不同时限葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、葡萄糖调节蛋白94（GRP94）、磷酸化蛋白激酶B1（p-Akt1）及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶12（Caspase-12）的表达变化，并探讨其意义。方法将55只Wistar雄性大鼠随机分为正常组（n=5）、假手术组（n=25）、缺血再灌注组（n=25），无损伤动脉钳阻断肝血流45min后使其复流，用免疫组织化学法检测GRP78、GRP94及Caspase-12在再灌注0、3、12、24、72h时的蛋白表达，用Western blot法检测同期p-Akt1蛋白表达。结果GRP78在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（393．04±79．06），12h时达峰值（2369．38±182．53），24h（1023．02±185．61）及72h（505．19±102．89）表达开始下降，但仍高于前述各组表达水平。GRP94在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（168．47±21．08），12h时达峰值（678．80±52．62），24h（425．78±38．63）及72h（173．99±36．82）表达降低。Caspase-12在缺血再灌注组的表达显著高于正常组与假手术组（P〈0．01），在缺血再灌注0h时表达开始上升（647．00±73．68），12h达峰值（6867．67±601．11），24h（2356．12±210．65）及72h（675．89±109．3）表达开始降低。p-Akt1在缺血再灌注组各观察时限点的表达趋势与GRP78一致，显著高于正常组及假手术组。结论大鼠肝缺血再灌注损伤可触发经内质网途经的Caspase级联反应活化；GRP78与GRP94可能通过降低内质网负荷和促进糖异生而发挥细胞保护作用；p-Akt1可能是此过程中机体通过磷酸肌醇3激酶（P13K）／Akt信号通路上调GRP78表达的重要信号分子。

马齿苋提取物对接触性皮炎大鼠皮肤丝聚蛋白和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-14蛋白表达的影响

良好的皮肤屏障系统对维持机体对抗湿疹起着至关重要的作用,湿疹皮肤屏障系统的恢复与重建是治疗湿疹的有效途径。构成皮肤表皮屏障功能的结构基础主要是角质层、表皮脂质及天然保湿因子等。在角质层中,丝聚蛋白(filaggrin)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-14是参与皮肤屏障的重要因子,主要功能是参与表皮细胞的分化及皮肤屏障的形成^([1-3])。它们在分子调节机制方面存在一定的联系,在皮肤损伤及某些屏障受损性皮肤病的发生、发展过程中起到一定作用。马齿苋是马齿苋科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。临床研究表明。

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素-1β和其相关因子及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶表达的影响

目的:研究三七总皂苷(Panax notoginsengsaponins,PNS)对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-1受体Ⅰ型(interleukin-1 receptor typeⅠ,IL-1RⅠ)、白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1ra)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteinyl-aspartate specific protease,caspase)-1、3、8 mRNA表达的影响。方法:采用颈内动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,在脑缺血前5 min和脑缺血后12 h分别腹腔注射给药1次。在脑缺血2 h再灌注22 h后,以逆转录-聚合酶链反应测定缺血脑组织IL-1β、IL-1RⅠ、IL-1ra、ICAM-1和caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果:在脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组脑组织IL-1β、IL-1RⅠ、IL-1ra、ICAM-1和caspase-1、3、8 mRNA表达较假手术组均增强(P<0.05或P<0.01)。PNS组脑组织IL-1β、IL-1ra和IL-1RⅠ表达低于模型组,高于假手术组,与模型组和假手术组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);PNS组脑组织caspase-3表达低于模型组(P<0.05),但PNS对ICAM-1、caspase-1和caspase-8表达无明显影响。结论:PNS可抑制caspase-3的表达,同时对脑缺血后IL-1β及其相关炎症因子的表达有一定抑制作用,从而对缺血性脑损伤发挥保护作用。

依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用

目的 :探讨肝硬化大鼠肝缺血 /再灌注 (I/R)损伤是否与肝细胞凋亡相关及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 - 3(caspase- 3)活性变化与肝细胞凋亡的关系。方法 :Pringle法复制肝I/R模型 ,将肝硬化大鼠随机分为 2组 :A组 :单纯肝门阻断 ;B组 :血流阻断 +抑制剂 :N -苯甲基氧化碳酰 -缬氨酸 -丙氨酸 -天冬氨酸 -氟化丙酮(ZVAD -fmk) 15mg/kg ;取无肝硬化大鼠 ,作单纯肝门阻断为C组。各组肝门阻断时间均为 30min ,再灌注 72h。比较 3组的血清天冬氨酸转氨酶 (AST)、肝组织的caspase - 3活性和肝细胞凋亡数。结果 :A组大鼠肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数在再灌注后 6h达高峰 ,分别为 (18 1± 1 8) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 2 0 9%± 4 9% ,与I/R前的 (6 6± 2 0 ) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 0 5 %± 0 3%相比 ,P <0 0 1。肝细胞凋亡数、caspase - 3的活性随灌注时间的延长而减低 ,两者随时间的变化一致。 3组中A组肝损伤最严重 ,表现为再灌注后 6h血清AST最高 ,与B、C组比较有显著差异 ,大鼠 7d生存率只为 6 2 5 %。进一步研究表明 ,再灌注后 6h ,A组的肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数亦明显比B、C组高。结论 :肝细胞凋亡是肝硬化大鼠肝I/R损伤的主要病理改变。

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9活性改变及其与凋亡的关系

目的探讨脓毒症时CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9（caspase-3／9）活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系。方法体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg，随机分为对照组、抗CD3／CD28组、抗CD3／CD28＋脂多糖（LPS）组，培养3d后采用流式细胞术检测Treg凋亡率，荧光比色法检测caspase-3／9活性。同时采用盲肠结穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒症模型，将动物随机分为正常对照组、假手术组、CLP组，于第3日分离Treg后检测Treg凋亡率和caspase-3／9活性。结果体外实验显示，抗CD3／CD28组和抗CD3／CD28＋LPS组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率均显著高于对照组（P均〈0．01），而抗CD3／CD28＋LPS组Treg凋亡率明显低于抗CD3／CD28组（P〈0．05）。抗CD3／CD28组caspase-3／9活性均显著高于对照组（P均〈0．01）；抗CD3／CD28＋LPS组caspase-3／9活性则明显低于抗CD3／CD28组（P均〈0．01）。体内实验显示，CLP组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率和caspase-3活性均显著低于正常对照组和假手术组（P均〈0．01），但caspase-9活性改变不明显（P均〉0．05）。结论脓毒症病理过程中CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率明显下降，caspase-3激活是诱发Treg凋亡的重要途径之一。

银杏叶提取物对惊厥性脑损伤大鼠天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在惊厥性脑损伤发病机制中的作用及银杏叶提取物对脑损伤的可能保护机制。方法将20日龄健康SD大鼠108只随机分为3组:对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组。通过三氟乙醚反复吸入制备大鼠惊厥模型。干预组在每次惊厥后立即腹腔注射银杏叶提取物50 mg/kg,12 h后再重复注射1次,其他两组注射等量生理盐水。各组动物于末次惊厥后1、3和7 d采用免疫组化法检测海马组织中caspase-3蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中caspase-3 mRNA表达。结果末次惊厥后1、3和7 d海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较对照组显著升高,3 d时达峰值(P均<0.01)。银杏叶提取物干预组各时间点海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较惊厥组显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠反复惊厥后海马caspase-3表达显著增高,提示caspase-3参与了惊厥性脑损伤的病理过程。银杏叶提取物能下调惊厥后海马caspase-3的异常表达,提示其对惊厥性脑损伤的保护机制可能与抑制海马caspase-3异常表达有关。

葛根素对缺血/再灌注损伤兔肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化的影响

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在兔肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的变化及葛根素的保护作用机制。方法健康日本大耳白兔30只,随机分为对照组、缺血/再灌注(I/R)组及葛根素组,每组10只。复制单侧LIRI模型。对比观察各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、肺湿/干重(W/D)比值及肺泡损伤指数(IQA);用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定肺组织细胞凋亡指数(AI);用免疫组化及原位杂交技术分别检测肺组织caspase-3蛋白和mRNA表达。结果与对照组比较,I/R组血清SOD活性和NO含量降低,MDA含量、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达均上调(P均<0.01)。与I/R组比较,葛根素组SOD、NO显著升高,MDA、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达明显下降(P均<0.01)。相关分析显示:AI值与SOD、NO呈明显负相关,与MDA、caspase-3 mRNA及caspase-3蛋白呈明显正相关(P均<0.01);caspase-3 mRNA与SOD、NO呈明显负相关,与MDA含量呈明显正相关(P均<0.01)。结论葛根素可通过提高体内NO水平、降低氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应,下调caspase-3的mRNA和蛋白表达,从而抑制肺再灌注后肺组织细胞的异常凋亡,减轻LIRI。

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8表达的影响

目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂+阻断剂预处理组(阻断剂组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脑缺血再灌注后各组脑组织凋亡细胞数和caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 (1)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点凋亡细胞数,开放剂组较对照组和阻断剂组显著减少(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(2)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点caspase-8蛋白表达,开放剂组显著低于对照组和阻断剂组(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(3)缺血再灌注各时间点caspase-8 mRNA表达,开放剂组均显著低于对照组和阻断剂组(均P＜0.01), 阻断剂组与对照组各时间点相比差异无统计学意义.结论 KATP开放剂能显著减少脑缺血再灌注后神经元凋亡和caspase-8 mRNA及蛋白的表达;KATP开放剂可能通过抑制死亡受体通路发挥脑保护作用.

糖尿病大鼠血蛋白激酶C和骨骼肌Bax/B细胞淋巴瘤-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化及其意义

目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义。方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax、Bcl2和Caspase3值。结果:糖尿病组大鼠骨骼肌普遍萎缩,肌纤维萎缩变细,纤维变性、水肿,部分区域坏死,纤维断裂,肌丝走行紊乱,核固缩,横纹模糊消失,间质脂肪组织略增生。糖尿病组和正常对照组大鼠的血PKC值分别为110.60±5.94ng·mL-1和74.72±7.19ng·mL-1,骨骼肌Bax值分别为26311±3698.30μm2和16764±6116.10μm2,Bcl2值分别为18573±8529.90μm2和35533±485.52μm2,Caspase3值为32419±3201.50μm2和12123±1919.60μm2。糖尿病大鼠血中PKC值较正常对照组显著升高,糖尿病组肌肉中Caspase3及Bax值显著升高,而Bcl2值明显下降,Bax/Bcl2值升高,两组间比较均有显著差异。结论:氧化应激中的PKC途径及细胞凋亡通路共同参与了糖尿病骨骼肌病变的发生,可能是糖尿病骨骼肌病变的重要发病机制之一。

甲基苯丙胺诱导大鼠神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

目的:探讨甲基苯丙胺对实验大鼠神经元凋亡的诱导以及凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。方法:选择Wistar♂大鼠20只,将动物随机分为4组,每组5只。4组中随机选3组为甲基苯丙胺实验组(B、C、D),1组为对照组(A)。B组给予甲基苯丙胺,20mg·kg-1,单次ip;C组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续2d;D组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续4d;A组给予等体积生理盐水。采用TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达。结果:给予甲基苯丙胺后,大鼠各脑区有凋亡细胞形成,凋亡相关因子Caspase-3有不同程度的表达。结论:甲基苯丙胺可导致神经元的凋亡,并诱导凋亡相关因子Caspase-3的表达。

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3mRNA在人脑挫裂伤后神经细胞中的表达

目的研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3mRNA在脑挫裂伤患者神经细胞中的表达与预后的关系。方法应用原位杂交技术检测脑组织15例Caspase-3mRNA的表达情况。结果均有不同程度的Caspase-3mRNA表达,死亡组表达值较存活组明显升高。两组之间表达差异有显著性意义。结论脑挫裂伤后Caspase-3mRNA表达程度较高,Caspase-3mRNA过度表达在脑挫裂伤后神经细胞凋亡的调控中起一定的作用。

尖锐湿疣组织中增殖细胞核抗原和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达及相关性分析

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)在尖锐湿疣(CA)组织角质形成细胞中的表达与相关性。方法采用免疫组化SP法分别检测36例初发性CA患者(CA组)和10例正常包皮组织(对照组)角质形成细胞PCNA、Caspase-3蛋白的表达。结果CA组标本角质形成细胞PCNA及Caspase-表达水平明显高于对照组(P<0.05),但两者在尖锐湿疣组织角质形成细胞中的表达无相关性(P>0.05)。结论PCNA和Caspase-3的表达上调可能参与了CA的发病,但两者的表达并无相关性。

脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3活性和细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方制剂脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)活性和细胞凋亡的影响。方法:将55只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。向双肾双夹肾血管性高血压大鼠右侧尾状核注入Ⅶ型胶原酶诱导脑出血。注射后2h开始,每日灌胃给予脑脉Ⅱ号口服液(8mL/d)或等容积蒸馏水直至处死。注射后6、12h,1、3、7d取脑,用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用荧光分光计测定caspase-3活性。结果:与假手术组比较,模型组细胞凋亡百分率在注射6h后显著增加(P<0.01),3d达到高峰,持续增加至7d以后;模型组caspase-3活性值在注射6h后开始增加(P<0.01),1d后达到峰值,之后开始下降,持续增加至7d以后。注射后12h～7d各时间点,治疗组细胞凋亡百分率和caspase-3活性值均较模型组显著降低(P<0.05)。结论:抑制caspase-3活化可能是脑脉Ⅱ号口服液抗高血压脑出血后细胞凋亡作用机制之一。

股骨头坏死组织中半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3与细胞凋亡的关系

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3在无菌性股骨头坏死(avascular/aseptic necrosis of femoral head,ANFH)进展过程中的表达及意义。方法21例(22髋)ANFH取股骨头病灶周围骨松质,其中早期ANFH组(6髋),中期ANFH组(8髋),晚期ANFH组(8髋);另取19例(19髋)新鲜股骨颈骨折的股骨头对应部位骨松质为对照组。采用原位末端标记(TUNEL)法、空骨陷窝计数法检测细胞凋亡水平,比色法检测股骨头组织Caspase-3活性。结果骨陷窝空虚百分率(F=45.43,P=0.000)、成骨细胞凋亡率(F=120.86,P=0.000)等凋亡指标均随ANFH临床分期进展而显著升高,ANFH早、中期组显著高于对照组(q=18.899,P<0.05;q=6.398,P<0.05),但并不随着ANFH病变进展而增强,而呈现进行性下降;ANFH晚期组Caspase-3活性与对照组Caspase-3活性无统计学差异(q=2.021,P>0.05)。Caspase-3活性与细胞凋亡率统计学相关性不显著(r=0.126,P=0.425)。结论在ANFH进展过程中,Caspase-3可能不是细胞凋亡的主要执行分子;Caspase-3在ANFH进展中可能发挥非凋亡作用。

肺缺血再灌注损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化(英文)

背景:肺缺血再灌注损伤过程中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化及其可能的作用机制有待观察。目的:观察大鼠肺缺血再灌注损伤中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化,并分析细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用及可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:南京医科大学附属南京第一医院急诊中心。材料:实验于2006-04/2006-09在南京医科大学附属南京第一医院动物实验室及南京市放射免疫检测中心完成。选用28只雄性健康清洁级SD大鼠,体质量250￣350g,鼠龄49￣76d,由南京医科大学实验动物中心提供。随机数字表法将大鼠分为实验组及对照组,每组14只。方法:①实验干预:实验组大鼠参照Eppinger等的方法进行建立肺缺血再灌注模型,大鼠给予阻断肺门45min(观察肺无舒缩为阻断标准),再开放3,6h(再灌注以肺恢复舒缩为标准)后取材,每次取7只,对照组仪行开胸术,于相同时间点同样方法分离肺组织。②实验评估:采用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞,计算凋亡率;采用免疫组织化学法及图像分析法观察肺脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达;计算2组大鼠左肺湿干质量比;计算肺泡损伤数比值进行肺组织损伤定量评价;光镜下苏木精-伊红染色观察肺脏的病理形态学变化。主要观察指标:①肺组织细胞凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达。②肺湿干质量比及肺组织损伤定量评价结果。③肺组织病理形态学变化。结果:纳入大鼠28只均进入结果分析,无脱落。①实验组肺缺血再灌注3,6h肺组织细胞凋亡率较对照组有明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),实验组缺血再灌注6h凋亡率较3h有所降低(P<0.05)。②实验组大鼠肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达3h达到最高,6h稍有下降,较对照组各时间点表达增加(P<0.01)。③实验组肺缺血再灌注3,6h肺泡损伤数比值及肺脏湿干质量比值较对照组均明显增加(P<0.01),实验组缺血再灌注6h两比值较3h有所增加(P<0.05)。④实验组肺泡结构破坏、塌陷、消失,肺泡间隔有大量的炎性细胞浸润,肺缺血再灌注6h较3h更严重。对照组无明显改变。结论:肺缺血再灌注早期可能通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的改变,激活细胞的凋亡途径,诱导肺组织细胞凋亡的发生,从而导致肺损伤的发生。

中药联合窄谱中波紫外线对寻常型银屑病表皮中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3及生存素的影响

目的探讨中药联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)在调节寻常型银屑病皮损中角质形成细胞凋亡的可能作用。方法选择30例寻常型银屑病患者给予中药银屑病方联合NB-UVB治疗,疗程8周,取治疗前后标本,用免疫组化方法检测正常人(20名)及患者(30例)治疗前后皮损中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、生存素(survivin)的表达。结果寻常型银屑病患者皮损中Bcl-2(7.50±2.01)的表达明显低于正常组(12.65±2.83),Caspase-3(21.73±3.70)的表达明显高于正常组织(8.55±2.16),survivin(23.90±2.82)的表达明显高于正常组织(7.06±1.96,P<0.01);治疗后Bcl-2(13.63±2.14)表达上调,Caspase-3(11.70±2.44)、survivin(12.46±1.80)表达下调(P<0.01),三者均有向正常组织表达转化的趋势。银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分由治疗前(14.24±3.42)下降至治疗后(3.52±1.07,P<0.01))。结论中药银屑病方联合NB-UVB可能通过调节Bcl-2、Caspase-3、survivin的表达而调节角质形成细胞的凋亡达到治疗目的。

内质网应激及蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12信号通路介导的细胞凋亡在糖尿病肾病发病机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症,主要表现为血糖升高、蛋白尿、肾功能下降,也是患者后期肾功能衰竭的主要原因。临床上主要通过控制血压和血糖水平来抑制DN的进展,但效果不佳。现有研究发现,内质网应激及其介导的细胞凋亡是引起DN的重要原因,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)信号通路在其中发挥关键性作用,其中PERK是内质网应激启动的标志,CHOP是内质网应激由抗凋亡作用开始转为促凋亡作用的重要分子,caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的最终执行分子。本文就内质网应激及相关信号通路介导的细胞凋亡在DN发病机制中的作用进行综述。

肿瘤坏死因子-α与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的作用及意义。方法:大鼠胰腺被膜下均匀注射质量分数5%的牛磺胆酸钠建立ANP动物模型。建模后12、24和48 h检测肺组织TNF-α水平和Caspase-3蛋白表达水平,同时观察肺组织病理改变并给予常规病理评分。结果:大鼠肺组织TNF-α水平和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),肺组织呈现典型炎性损伤性改变,常规病理评分升高(P<0.01)。结论:TNF-α和Caspase-3可能参与了大鼠ANP肺损伤,其水平的高低与ANP肺损伤严重程度密切相关。