半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织的表达及其意义

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织中的表达及意义。方法20只SD大鼠建立腹部创伤大鼠模型,按照数字表法分为对照组和腹部创伤组,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹分析两组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析两组大鼠肠道组织细胞凋亡水平;采用免疫荧光分析两组大鼠肠道组织LC3点的数量;采用免疫组织化学分析两组大鼠肠道组织裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组大鼠肠道组织炎性因子水平。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1 mRNA表达水平(0.96±0.11、1.08±0.12)明显低于腹部创伤组大鼠(1.82±0.12、1.77±0.18),差异有统计学意义(t=16.910、10.120,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平[(18.82±3.56)pg/ml]明显低于腹部创伤组大鼠[(71.98±11.80)pg/ml],差异有统计学意义(t=13.640,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1蛋白相对表达水平(0.60±0.08、0.89±0.08)明显低于腹部创伤组大鼠(1.34±0.18、1.56±0.16),差异有统计学意义(t=12.170、12.230,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织cleaved Caspase-3蛋白相对表达水平(97.66±11.25)明显低于腹部创伤组大鼠(191.33±24.47),差异有统计学意义(t=10.990,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织TUNEL染色阳性率[(2.83±1.10)%]明显低于腹部创伤组大鼠[(50.59±10.15)%],差异有统计学意义(t=14.790,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织LC3点数量[(45.20±14.91)个]明显低于腹部创伤组大鼠[(82.81±13.17)个],差异有统计学意义(t=5.977,P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,对照组大鼠肠道组织自噬底物p62蛋白表达水平(1.26±0.11)明显高于腹部创伤组大鼠(0.62±0.11),差异有统计学意义(t=12.940,P<0.05)。结论腹部创伤后肠道组织中Caspase-3和Beclin1表达水平显著增加,导致肠道细胞凋亡和自噬水平显著增加,肠道损伤加剧。

苦参碱诱导人乳腺癌细胞凋亡逆转耐药及对酸化蛋白激酶B、Fas、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

乳腺癌的综合治疗除手术、放疗、内分泌外，化疗仍是最有效的治疗方法，化疗可明屈提高患者的生存率，但肿瘤的多约耐药（MDR）是临床化疗最棘手的难题，寻找高效低毒能抗肿瘤并能逆转MDR新药是目前肿瘤防治研究的热点。

血管性痴呆大鼠模型大脑海马区半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达及意义

血管性痴呆(VD)是一类脑卒中后导致的认知和行为障碍的疾病,临床上较为常见。相关流行病学研究认为,其普通人群发病率在3%左右。海马区解剖位置在大脑丘脑和内侧颞叶之间,属边缘系统,其与记忆方向等位等高级中枢神经活动有关。该区域的功能损失与血管性痴呆存在一定的相关性。为半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3是细胞凋亡过程中的重要剪切酶,其高表达提示细胞凋亡水平增高。我们应用改良四血管阻断法制备血管性痴呆大鼠模型,探讨VD大鼠脑海马区Caspase-3蛋白表达与血管性痴呆的关系。

右美托咪定对痫性发作大鼠海马神经细胞B细胞淋巴瘤／白血病-2、B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的观察右美托咪定（DEX）对痫性发作大鼠海马神经细胞凋亡蛋白表达的影响。方法将36只sD大鼠随机分为3组（n=12）：对照组（Control组）、右美托咪定组（DEX组）及致痫组（EP组）。DEX组给予10μg／k剂量DEX灌胃，连续3d，至致痫当日；对照组、致痫组则分别给予等体积生理盐水灌胃。以氯化锂-匹罗卡品制作致痫模型，观察SD大鼠行为学变化；采用Westernblot检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果EP组大鼠均表现易激惹，DEX组反复自发性痫性发作（SRS）次数[（5．67±1．53）次]比EP组[（10．33±3．06）次]明显减少，且差异有统计学意义（P〈0．05）。bcl-2、bax、bcl-2／bax和Caspase-3表达水平结果，对照组分别为1．0557±0．0081、0．5712±0．0057、1，0870±0．0026、0；DEX组分另U为0．9654±0．0216、0．6920±0．0028、1．3951±0．0328、0．6765±0．9697；EP组分另0为0．8925±0．0063、0．7427±0．0010、1．2016±0．0082、0．8565±0．9626。EP组与对照组比较，大鼠海马、bax、活化的active—Caspase-3表达水平增加，bcl-2表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05），bcl-2／bax比值升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；DEX组与EP组比较，海马bcl-2表达水平、bcl-2／bax比值升高，bax、active—Caspase-3表达水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DEX可能作用抑制大鼠海马神经细胞Casepase-3和box基因表达，减少SRS次数，对海马神经元产生保护作用。

二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡及黑色素瘤凋亡抑制蛋白（Livin）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达的影响.方法 采用体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,用50、100、200、400 μmol/L的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,在24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法测各组细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率.作用于骨肉瘤MG-63细胞24h后,用Western blot方法检测各组细胞Livin和Caspase-3蛋白的表达水平.结果 随PDTC浓度增加骨肉瘤MG-63细胞增殖活性呈下降趋势,作用时间越长细胞的增殖活性越低,而细胞的凋亡率呈上升趋势（P＜0.05）.作用24h后,随PDTC浓度增加各组细胞中Livin蛋白的表达为1.384±0.009、0.912±0.007、1.501±0.011、0.751 ±0.008,对照组为1.834±0.006,呈下降趋势,而Caspase-3蛋白表达呈上升趋势（P＜0.05）.结论 PDTC可诱导入骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其机制可能与PDTC抑制核因子（NF）-κB传导通路,下调Livin表达继而上调Caspase-3表达有关.

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂早期干预在脓毒症急性肾损伤中的作用

目的观察半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）抑制剂Ac—DEVD—CHO在脓毒症诱导的急性肾损伤（AKI）中的作用。方法健康清洁级雄性C57BL／6小鼠72只，随机分为3组（每组24只）：假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孑L组（CLP组）和Caspase-3抑制剂组（cI组）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症AKI小鼠模型。cI组术后30min立即给予4μg／gCaspase．3抑制剂Ac—DEVD—CHO皮下注射。于术后6、12、24h各组小鼠取血及肾组织，测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度，观察肾组织光镜下病理学变化并检测肾组织细胞凋亡率及凋亡相关因子Caspase-3、B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）、bax蛋白在肾组织中的表达。结果与Sham组比较，CLP组血清Cr术后6h、BUN术后6h和12h显著升高（P〈0．05）；肾组织损伤评分、肾组织凋亡率各时间点均显著增高（P〈0．05）；术后24h肾组织Caspase-3、bcl-2、bax表达上调（P〈0．05）。与CLP组比较，CI组术后6h血清Cr、BUN浓度显著下降[血清cr：（83．82±10．15）μmol／L比（125．05±33．48）μmol／L；BUN：（10．15±4．34）mmol／L比（14．02±5．51）mmol／L，P〈0．05]；肾组织损伤评分、肾组织细胞凋亡率各时间点均显著降低[肾组织损伤评分6h：（0．88±0．64）分比（2．17±0．75）分，12h：（0．63±0．74）分比（1．83±0．98）分，24h：（1．83±0．98）分比（1．33±0．52）分；肾组织细胞凋亡率6h：（13．28±0．91）％比（18．27±1．40）％，12h：（9．71±0．91）％比（15．85±3．51）％，24h：（8．45±．55）％比（12．48±2．14）％，P〈0．05]；肾组织Caspase-3及促凋亡因子bax表达下调，而抗凋亡因子bcl-2表达上调（P〈0．05）。结论Caspase-3抑制剂可抑制肾组织细胞凋亡，从而起到肾保护性作用。

生存素和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在骶骨脊索瘤中的表达及其与凋亡的相关性

目的探讨骶骨脊索瘤组织中生存素（Survivin）和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）的表达相关性及其临床意义。方法应用免疫组织化学（SP）法检测30例人骶骨脊索瘤组织和10例癌旁组织中Survivin和Caspase-3的表达。结果Survivin在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为70．0％，在瘤旁组织中不表达，两者差异有统计学意义（P〈0．05），Survivin的表达与患者肿瘤有无局部浸润、是否复发相关（P〈0．05）；Caspase．3在骶骨脊索瘤中的阳性表达率为33．3％，显著低于瘤旁组织的90．0％（P〈0．05），Caspase-3的表达与患者肿瘤有无局部浸润、是否复发相关（P〈0．05）。Survivin与Caspase-3表达呈显著负相关（r=-0．463，P〈0．05）。结论Survivin在骶骨脊索瘤中高表达，可能通过抑制Caspase-3活性，从而阻止细胞凋亡，促进肿瘤细胞增殖与肿瘤的发生、发展。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3和β-连环蛋白、糖原合成激酶-3β在体外培养保存关节软骨组织中的表达及其相关性

目的体外培养保存关节软骨组织，探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）和Wnt／β-连环蛋白（β-catenin）信号通路中关键蛋白表达规律及其相关性。方法选取20只健康成年新西兰大白兔，切取膝骨软骨柱100枚，随机分为5组（n=20）。对照组：取材2h内的新鲜软骨；实验组：分为4组，将软骨柱浸入MEME培养液中保存，第14、21、28、35天时各取一组检测指标。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V—FITC）细胞凋亡检测法测定凋亡率，Western blot检测Caspase-3、糖原合酶激酶-38（GSK-3B）表达，免疫组织化学法检测β-catenin表达。结果随着保存时间延长，软骨细胞凋亡率逐渐增加，Caspase-3、GSK-3β表达逐渐上调，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05），各组软骨细胞凋亡率为：对照组（6．04±1．09）％、14d（12．75±0．40）％、21d（21．90±0．57）％、28d（30．44±0．79）％、35d（40．70±0．43）％，Caspase-3表达量为：0．078±0．032、0．193±0．026、0．327±0．041、0．510±0．023、0．719±0．063，GSK-3β表达量为：0．162±0．025、0．242±0．019、0．493±0．012、0．717±0．020、0．905±0．011；免疫组织化学结果显示，细胞质与细胞核中B-catenin阳性染色逐渐增强，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞凋亡率与Caspase-3、GSK-3β、β—Catenin表达呈高度正相关（r=0．695、0．702、0．682，P〈0．01）；Caspase-3与GSK-3β、β—catenin表达呈高度正相关（r=0．713、0．661，P〈0．01）。结论体外培养保存关节软骨组织过程中，软骨细胞凋亡伴有Wnt／β-catenin信号通路关键蛋白β—catenin和GSK-3β表达的显著上调。

芹菜素抑制PC-3细胞增殖及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3的作用

目的 观察芹菜素（API）对雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞的调控作用并探讨其机制.方法 以不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）的API干预PC-3细胞48 h,通过细胞形态学观察以及细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测API对PC-3细胞的增殖抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3 mRNA的表达.结果 CCK-8法检测显示0、10、20、40μmol/L API处理PC-3细胞48 h后的吸光度值分别为1.48 ±0.04、0.81 ±0.04、0.69±0.03、0.33±0.03,相较于对照组,10、20、40 μmol/L API浓度组对PC-3细胞均有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为44.7％、53.5％、77.4％ （P＜ 0.01）.0、10、20、40 μmol/L API浓度组Caspase-3 mRNA的表达分别为0.230±0.036、0.410±0.080、0.480 ±0.100、0.730±0.150,实验组与对照组之间的差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 API对PC-3细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性,其机制可能通过诱导PC-3细胞Caspase-3表达的增加,最终导致细胞凋亡.

B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3在不同级别脑胶质瘤中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学法检测60例脑胶质瘤和11例正常脑组织中bcl-2、Caspase-3蛋白表达.结果 bcl-2在正常脑组织、低、高级别胶质瘤组表达阳性率分别为9％、78％、100％,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;Caspase-3表达阳性率分别为0％、100％、84％,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;bcl-2、Caspase-3在肿瘤组表达呈负相关（r=-0.814,P＜0.05）.结论 在胶质瘤中bcl-2表达增高,通过抑制Caspase-3表达,失去对细胞周期的调控,促进胶质瘤的增殖和恶性进展.

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达及意义

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3在乙醇致睾丸损伤中表达的变化，并探讨其意义。方法将24只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组，每组12只，连续对实验组小鼠腹腔注射乙醇14d，建立睾丸损伤模型，处死所有小鼠并收集睾丸标本，应用实时定量聚合酶链反应（Real—time PCR）和Western blot检测Caspase-3 mRNA和蛋白的表达变化。结果Real-time PCR结果显示实验组Caspase-3 mRNA表达（3．35±0．13）显著高于对照组（P〈0．05）；Western blot结果显示Caspase-3蛋白表达（44．51±8．94）显著高于对照组（140．66±6．25，P〈0．05）。结论Caspase-3作为重要的促凋亡基因参与乙醇致睾丸损伤的过程。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）．3抑制剂对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法45只肺缺血再灌注损伤模型大鼠随机分为模型组、低剂量组和高剂量组；同时选取15只大鼠作为假手术组。低剂量组和高剂量组分别经尾静脉注射z-VAD-FMK5mg／kg和15mg／kg，模型组和假手术组给予尾静脉注射等体积的生理盐水。治疗12h后，取肺组织，测定肺组织中氧化应激指标[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和活性氧水平（ROS）]和炎性因子水平[肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β和IL-6]；采用Westernblot分析凋亡相关蛋白水平[凋亡诱导因子（AIF）、Caspase．3、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）和bcl-2相关x蛋白（bax）]；采用原位缺口末端标记法（TUNEL）染色分析肺组织中细胞凋亡水平。结果与对照组比较，模型组、低剂量组和高剂量组MDA和ROS水平明显增加，而SOD水平显著降低（均P=0．000）。与模型组比较，低剂量组和高剂量组MDA和ROS水平明显下降，而SOD水平显著升高（均P=0．000）。与假手术组比较，模型组、低剂量组和高剂量组TNF-α、IL-1β和IL-1β等炎性因子水平显著升高，而与模型组比较，低剂量组和高剂量组上述炎性因子显著下调（均P=0．000）。与假手术组比较，模型组、低剂量组和高剂量组AIF、Caspase-3和bax蛋白水平显增加，而bcl-2水平显著下调；与模型组比较，低剂量组和高剂量组AIF、Caspase-3和bax蛋白水平明显下降，而bcl-2水平显著升高。与假手术组（3．43±0．67）比较，模型组、低剂量组和高剂量组肺组织细胞凋亡水平（25．32±3．21、17．39±2．97和11．33±2．56）显著升高，差异有统计学意义（均P=0．000）。与模型组比较，低剂量组和高剂量组肺组织中细胞凋亡水平显著下降，差异有统计学意义（均P=0．000）。与低剂量组比较，高剂量组大鼠肺组织中细胞凋亡水平下降更为显著，差异有统计学意义（P=0．000）。结论Caspase-3抑制剂z-VAD．FMK可显著降低氧化应激、炎症以及肺细胞凋亡，对肺组织起到保护作用。

芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响及其意义

本研究旨在检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3蛋白及mRNA表达的变化,观察芹菜素对PC-3裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响.一、材料与方法1．材料：雄性BALB／c（nu／nu）裸鼠30只；人前列腺癌细胞株PC-3；R＆D公司生产的人Caspase-3酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒；Fermentas公司生产的逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）试剂盒；β-肌动蛋白（β-actin）、Caspase-3引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

缺氧对泡球蚴原头节血管内皮生长因子、微血管密度、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

目的观察缺氧对泡球蚴原头节血管内皮生长因子（VEGF）、微血管密度（MVD）-CD34、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶。3（Caspase-3）表达的影响。方法将泡球蚴原头节与肝癌HepG2细胞共培养1周后取原头节平均分为3组，即正常培养组（A组）、二甲基亚砜（DMSO）溶剂对照组（B组）、去铁敏诱导组（C组），继续培养24h后伊红染色检测头节的活力，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）、VEGF、CD34的表达，可见光光度比色法检测Caspase-3的活性。结果继续培养24h后，3组原头节活力差异无统计学意义（P〉0．05）；A、B、C组泡球蚴原头节的HIF-1α的表达量分别为（852．00±124．41）、（806．20±118．51）、（1168．20±93．59）ng／L；VEGF的表达水平分别为（158．28±29．24）、（157．49±26．88）、（222．36±18．87）ng／L；CD34的表达水平分别为：（605．40±49．95）、（592．20±51．91）、（873．60±61．15）ng／L；Caspase-3的释放量分别为（14．90±1．06）、（15．54±1．17）、（20．54±2．25）mmol／L；C组与A组和B组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论模拟体内缺氧微环境，可上调泡球蚴原头节VEGF、CD34、Caspase．3表达，血管新生可能是泡球蚴侵袭性生长的重要原因之一。

洛铂诱导胆管癌RBE细胞凋亡及其对B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8和细胞色素C凋亡相关因子影响

目的 观察洛铂对胆管癌RBE细胞抗肿瘤作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、actived-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8和细胞色素C（Cyt-C）转录及表达的影响.方法 不同浓度洛铂干预胆管癌RBE细胞一定时间,噻唑蓝（MTT）比色法检测RBE细胞的生长抑制,流式细胞法检测细胞周期,膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染检测凋亡率,Western blot及实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测bax、bcl-2、actived-Caspase-3、Caspase-8、Cyt-C蛋白及mRNA表达的变化.结果 MTT结果显示随浓度升高及时间延长,药物对细胞增殖抑制作用增强（P＜0.05）,24 h的半数抑制剂量（IC50）值为11.82 mg/L.随药物浓度增加G0/G1期与G2/M期细胞增加,S期细胞比例减少（P＜0.05）.Annexin V-异硫氰酸荧光素（FITC）/PI检测显示洛铂能诱导RBE细胞凋亡,与对照组比较有更高的凋亡率（Pp＜0.05）.Western blot及Real-time PCR检测结果显示bax、actived-Caspase-3、Caspase-8和胞质内Cyt-C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低.结论 洛铂对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放Cyt-C激活Caspase-8、Caspase-3诱导RBE细胞凋亡.

姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的作用及其对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3、-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白的影响

目的观察姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的作用及对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)的影响。方法姜黄素溶液干预脑胶质瘤细胞U87,使用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率,使用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的Caspase-3和Caspase-8水平,使用Western blot检测细胞中bcl-2和bax蛋白表达水平。结果姜黄素低剂量组24、48 h细胞的增殖率[(8.48±1.19)%、(11.89±1.39)%]和高剂量组24、48 h细胞的增殖率[(16.04±1.58)%、(25.63±1.66)%]均低于空白对照组24、48 h细胞的增殖率[(1.47±0.10)%、(1.39±0.19)%,P<0.05],姜黄素高剂量组24、48 h细胞的增殖率均低于姜黄素低剂量组(P<0.05),姜黄素高剂量组和姜黄素低剂量组48 h细胞的增殖率均低于同组24 h(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞凋亡率[(9.53±1.21)%]和姜黄素高剂量组细胞凋亡率[(20.52±2.35)%]均显著高于空白对照组细胞凋亡率[(2.22±0.14)%,P<0.05],姜黄素高剂量组细胞凋亡率显著高于姜黄素低剂量组(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(156.35±29.63)、(158.35±25.36)) ng/ml]和姜黄素高剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(252.52±35.21)、(225.61±30.66) ng/ml]均显著高于空白对照组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平[(50.63±10.36)、(78.23±11.35) ng/ml,P<0.05],姜黄素高剂量组细胞培养上清液中Caspase-3和Casepase-8水平显著高于姜黄素低剂量组(P<0.05);姜黄素低剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.61±0.10、0.67±0.09)和姜黄素高剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.42±0.08、0.88±0.11)显著低于空白对照组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平(0.88±0.16、0.33±0.04),bax蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05),姜黄素高剂量组细胞U87中bcl-2蛋白表达水平显著高于姜黄素低剂量组,bax蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 姜黄素对脑胶质瘤细胞U87的增殖具有抑制作用,凋亡具有促进作用,作用机制可能为促进细胞中的Caspase-3和Caspase-8的表达,并同时改变细胞中bcl-2和bax的表达水平。

肺动脉注射尼卡地平预处理对体外循环诱发犬缺血再灌注损伤肺组织形态、凋亡及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白表达的影响

体外循环（CPB）技术诱发的肺缺血再灌注损伤及其引起的肺功能障碍是患者术后死亡常见原因之一。研究结果显示尼卡地平可减轻CPB后的肺功能障碍，但其对肺组织形态结构、凋亡及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）表达的影响尚无进一步研究。本课题拟研究肺动脉注射尼卡地平预处理对CPB诱发的犬肺缺血再灌注损伤时犬肺组织形态结构、凋亡及Caspase-3、bcl-2、bax表达的影响。

依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用

目的 :探讨肝硬化大鼠肝缺血 /再灌注 (I/R)损伤是否与肝细胞凋亡相关及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 - 3(caspase- 3)活性变化与肝细胞凋亡的关系。方法 :Pringle法复制肝I/R模型 ,将肝硬化大鼠随机分为 2组 :A组 :单纯肝门阻断 ;B组 :血流阻断 +抑制剂 :N -苯甲基氧化碳酰 -缬氨酸 -丙氨酸 -天冬氨酸 -氟化丙酮(ZVAD -fmk) 15mg/kg ;取无肝硬化大鼠 ,作单纯肝门阻断为C组。各组肝门阻断时间均为 30min ,再灌注 72h。比较 3组的血清天冬氨酸转氨酶 (AST)、肝组织的caspase - 3活性和肝细胞凋亡数。结果 :A组大鼠肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数在再灌注后 6h达高峰 ,分别为 (18 1± 1 8) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 2 0 9%± 4 9% ,与I/R前的 (6 6± 2 0 ) μmolAMC·h-1·g-1(tissue)和 0 5 %± 0 3%相比 ,P <0 0 1。肝细胞凋亡数、caspase - 3的活性随灌注时间的延长而减低 ,两者随时间的变化一致。 3组中A组肝损伤最严重 ,表现为再灌注后 6h血清AST最高 ,与B、C组比较有显著差异 ,大鼠 7d生存率只为 6 2 5 %。进一步研究表明 ,再灌注后 6h ,A组的肝组织caspase - 3活性、肝细胞凋亡数亦明显比B、C组高。结论 :肝细胞凋亡是肝硬化大鼠肝I/R损伤的主要病理改变。

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9活性改变及其与凋亡的关系

目的探讨脓毒症时CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9（caspase-3／9）活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系。方法体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg，随机分为对照组、抗CD3／CD28组、抗CD3／CD28＋脂多糖（LPS）组，培养3d后采用流式细胞术检测Treg凋亡率，荧光比色法检测caspase-3／9活性。同时采用盲肠结穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒症模型，将动物随机分为正常对照组、假手术组、CLP组，于第3日分离Treg后检测Treg凋亡率和caspase-3／9活性。结果体外实验显示，抗CD3／CD28组和抗CD3／CD28＋LPS组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率均显著高于对照组（P均〈0．01），而抗CD3／CD28＋LPS组Treg凋亡率明显低于抗CD3／CD28组（P〈0．05）。抗CD3／CD28组caspase-3／9活性均显著高于对照组（P均〈0．01）；抗CD3／CD28＋LPS组caspase-3／9活性则明显低于抗CD3／CD28组（P均〈0．01）。体内实验显示，CLP组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率和caspase-3活性均显著低于正常对照组和假手术组（P均〈0．01），但caspase-9活性改变不明显（P均〉0．05）。结论脓毒症病理过程中CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率明显下降，caspase-3激活是诱发Treg凋亡的重要途径之一。

银杏叶提取物对惊厥性脑损伤大鼠天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在惊厥性脑损伤发病机制中的作用及银杏叶提取物对脑损伤的可能保护机制。方法将20日龄健康SD大鼠108只随机分为3组:对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组。通过三氟乙醚反复吸入制备大鼠惊厥模型。干预组在每次惊厥后立即腹腔注射银杏叶提取物50 mg/kg,12 h后再重复注射1次,其他两组注射等量生理盐水。各组动物于末次惊厥后1、3和7 d采用免疫组化法检测海马组织中caspase-3蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中caspase-3 mRNA表达。结果末次惊厥后1、3和7 d海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较对照组显著升高,3 d时达峰值(P均<0.01)。银杏叶提取物干预组各时间点海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较惊厥组显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠反复惊厥后海马caspase-3表达显著增高,提示caspase-3参与了惊厥性脑损伤的病理过程。银杏叶提取物能下调惊厥后海马caspase-3的异常表达,提示其对惊厥性脑损伤的保护机制可能与抑制海马caspase-3异常表达有关。