促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶-9 mRNA表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬酶9(caspase9)mRNA表达的影响。方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为脑缺血再灌注组(A组)、EPO干预组(B组)。制模后A、B两组再分为6h、12h、24h、48h、72h5个亚组。在相应时间点断头取脑,逆转录聚合酶链反应技术检测大鼠皮质caspase9mRNA的表达,并与对照组(C组)比较。结果全脑缺血再灌注后,(1)A组caspase9mRNA的表达各时间点明显高于B组和C组(均P<0.05);(2)B组在6h、12h、24h、48h时caspase9mRNA的表达明显高于C组(均P<0.05),但72h时与C组比较差异无显著性。结论EPO对缺血再灌注损伤后神经元的保护机制之一与阻滞或下调凋亡通路中的caspase9的表达有关。

锰对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9和凋亡抑制蛋白表达的影响

为研究锰对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-9(caspase-9)、凋亡抑制蛋白(livin)表达的影响,将24只健康雄性清洁级SD大鼠随机分为3组,分别为对照(生理盐水)组和15、30 mg/kg氯化锰染毒组,每组8只。采用腹腔注射方式进行染毒,每天1次,每周5 d,连续染毒6周。采用免疫组化SP法检测睾丸生精细胞caspase-9、livin蛋白的表达情况。结果显示,与对照组比较,15、30 mg/kg氯化锰染毒组大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率均升高,livin的阳性细胞率均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸生精细胞caspase-9的阳性细胞率呈上升趋势,livin的阳性细胞率呈下降趋势。提示锰可通过上调大鼠生精细胞caspase-9表达和下调livin表达诱导生精细胞凋亡。

杏仁核内注射KA诱导的边缘叶发作大鼠海马中caspase-9的表达

目的 :红藻氨酸 (kainicacid ,KA)诱导的大鼠边缘叶发作模型 ,检测半胱氨酸天冬酶 9(caspase 9)在癫大鼠海马神经元表达。方法 :立体定位杏仁核注射KA诱导癫发作 ,以持续记录脑电、局部脑血流 (regionalcerebralbloodflow ,r CBF) ,用TUNEL染色和cresylviolet染色观察海马神经元存活和凋亡 ;用免疫荧光和Westernblot检测海马caspase 9的表达。结果 :发作终止 4h时caspase 9出现裂解片段 ,8h时出现TUNEL阳性细胞 ,2 4h时达高峰。脑室内注射caspase 9抑制剂z LEHD fluoromethylketone(z LEHD fmk)可减少TUNEL阳性细胞 ,增加存活神经元 ;发作后在KA注射同侧海马的CA3区神经元caspase 9免疫反应性增强 ;对侧海马未见TUNEL阳性细胞及caspase 9的上述变化。发作前后r CBF无明显变化。结论 :癫发作可诱导caspase 9的激活。caspase 9可能是癫潜在的治疗靶点。

Caspase-3,-8,-9在铜诱导大鼠原代皮层神经元凋亡中的作用研究

目的通过建立体外铜诱导神经元模型,观察醋酸铜对大鼠原代皮层神经元凋亡及活化caspase-3,caspase-8和caspase-9蛋白表达的影响,探索高浓度铜导致大鼠神经元损伤的作用机制。方法采用不同浓度(20,40,80μM)醋酸铜诱导体外培养72h的大鼠原代皮层神经元;MTT法检测神经元活力,Hoechst33258染色和流式Annexin-V/PI法检测神经元凋亡,Western blot法检测不同浓度和时间点活化的caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表达。结果体外培养的原代皮层神经元经醋酸铜诱导48h后,凋亡率上升,细胞活力呈浓度梯度下降,活化的caspase-8和caspase-9在铜诱导4h20μM组开始升高,48h各浓度组表达最高,呈时间与浓度梯度依赖;活化caspase-3在铜诱导24h20μM组才开始升高,激活的时间晚于caspase-8和caspase-9,48h各浓度组表达最高。结论过量铜可导致体外培养大鼠原代皮层神经元发生凋亡,caspase-3、caspase-8和caspase-9级联反应在铜诱导皮层神经元凋亡过程中发挥重要调控作用。

海马益智散对缺血性脑卒中伴阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者认知功能与睡眠结构的影响

目的:观察在常规疗法基础上加用海马益智散对缺血性脑卒中伴阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者认知功能、睡眠结构的作用及对血清半胱氨酸天冬酶(caspase)-3和caspase-9水平的影响。方法:选取90例缺血性脑卒中伴OSAS患者,按随机数字表法分为治疗组和对照组各45例。2组均予经鼻持续气道正压通气和脑卒中常规疗法,治疗组加予海马益智散治疗。2组均连续治疗3个月。比较2组治疗前后的蒙特利尔认知量表(Mo CA)评分、简易智能精神状态检查量表(MMSE)评分、睡眠结构。检测2组治疗前后的血清caspase-3和caspase-9水平。结果:治疗后,2组MoCA评分和MMSE评分均较治疗前升高(P<0.01),治疗组MoCA评分和MMSE评分均高于对照组(P<0.01)。2组Ⅰ期睡眠时间、觉醒时间均较治疗前缩短,Ⅰ期睡眠比率、觉醒次数均较治疗前降低和减少,Ⅱ期睡眠时间、Ⅱ期睡眠比率均较治疗前增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。治疗组Ⅰ期睡眠比率低于对照组,Ⅰ期睡眠时间、觉醒时间均较对照组缩短,觉醒次数少于对照组,Ⅱ期睡眠时间长于对照组,Ⅱ期睡眠比率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。2组血清caspase-3和caspase-9水平均较治疗前降低(P<0.01)。治疗组血清caspase-3和caspase-9水平均低于对照组(P<0.01)。结论:在常规疗法基础上加用海马益智散,可明显改善脑卒中伴OSAS患者的认知功能和睡眠结构,下调血清caspase-3和caspase-9水平可能是其疗效途径之一。