深低温停循环不同时间点犬脑皮质半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3mRNA的表达

目的利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3 mRNA(Caspase-3 mR-NA)在深低温停循环(DHCA)过程中的表达,探讨DHCA对神经细胞凋亡的影响,为深低温停循环后脑损害的研究和防治提供资料。方法选择健康成年杂种犬10只,建立DHCA模型,分别于体外循环0 min、停循环0 min、停循环30 min、停循环60 min、复温再灌注45 min取脑皮质迅速冻存,待全部动物实验结束后统一行实时荧光PCR定量检测Caspase-3mRNA的表达情况。结果体外循环后特别是降温后Caspase-3 mRNA的拷贝数先下降,DHCA 0 min达最低值,随着DHCA过程的延长,Caspase-3 mRNA的表达逐渐增强,复温再灌注45 min达最大值,不同时间点Caspase-3 mRNA的拷贝浓度间差异有显著性意义(F=42.71,P<0.001)。复温再灌注45 min后Caspase-3 mRNA的拷贝数均显著高于此前各时间点(P<0.01)。结论DHCA中随着缺氧的加重可诱导Caspase-3 mRNA的表达,随着DHCA时间的延长,Caspase-3 mRNA表达升高。复灌后表达达最高值。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C比值对胰腺癌患者的早期诊断与预后价值

目的探讨血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(sCr/CysC)比值对胰腺癌早期诊断和预后评估的价值。方法回顾性分析苏州大学附属第一医院2020年1月至2021年12月收治的60例初诊胰腺癌患者、30例胰腺良性肿瘤患者和30例健康对照者的临床资料。比较三组间sCr/CysC比值、C反应蛋白(CRP)、L3骨骼肌指数(L3-SMI)、Alb和CA199水平的差异。采用ROC曲线分析sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断效能。根据sCr/CysC比值中位数将胰腺癌患者分为高比值组和低比值组,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析sCr/CysC比值对胰腺癌预后的预测价值。结果与胰腺良性肿瘤组和健康对照组相比,胰腺癌组的sCr/CysC比值和Alb水平显著降低,而CRP水平明显升高(均P<0.05)。与低sCr/CysC比值组相比,高比值组患者的性别构成、年龄和L3 SMI水平差异有统计学意义(均P<0.05)。sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断ROC曲线下面积为0.640(95%CI:0.524~0.756,P<0.05),在cut-off值为0.69时敏感性为46.7%,特异性为83.3%。相关分析显示,sCr/CysC比值与L3-SMI呈正相关(r=0.425,P<0.01)。生存分析表明,高sCr/CysC比值组患者的中位生存期显著长于低比值组(379 d vs 210 d,P<0.01)。Cox回归分析确认sCr/CysC比值是胰腺癌预后的独立危险因素(HR=0.151,95%CI:0.028~0.826,P<0.05)。结论sCr/CysC比值可能是胰腺癌早期诊断和预后评估的有效指标,有望为胰腺癌的临床诊疗提供参考。

伊木萨克提取物调控NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1通路对勃起功能障碍大鼠的干预效果

目的分析伊木萨克提取物调控核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(NLRP3/Caspase-1)通路对勃起功能障碍大鼠的干预效果。方法选取40只SPF级8周龄SD大鼠,随机选取10只作为对照组,另外30只建立勃起功能障碍模型,并将30只建模成功大鼠分为3组:用生理盐水灌胃大鼠为模型组,用西地那非灌胃大鼠为药物对照组,用伊木萨克提取物灌胃大鼠为伊木萨克提取物组,每组各10只。连续灌胃28 d后,采用HE染色法观察各组大鼠阴茎海绵体病理组织学特征;比较各组大鼠性功能指标;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠外周血氮氧化物(NOX)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)等内皮功能指标,和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)等氧化应激指标;采用实时定量PCR法检测各组大鼠阴茎海绵体组织NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠海绵体组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况。结果各组大鼠海绵体形态学观察显示,对照组大鼠海绵体窦状隙中具有红细胞;模型组大鼠阴茎海绵体内血窦数量、小血管数量减少,内皮细胞密度下降;药物对照组、伊木萨克提取物组大鼠阴茎海绵体内小血管数量、血窦数量增加,且伊木萨克提取物组大鼠海绵体形态学特点的改善程度大于药物对照组。与对照组比较,其他3个建模组骑跨次数、插入次数、舔嗅次数、精子密度、精子存活率均显著下降,首次爬背时间显著增加(P<0.05);伊木萨克提取物组骑跨次数、插入次数、舔嗅次数、精子密度、精子存活率显著高于模型组和药物对照组,首次爬背时间显著少于模型组和药物对照组(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组比较,其他3个建模组血清NOX、ET-1、LOX-1、MDA水平显著升高,NO、SOD、GSH水平显著降低(P<0.05);伊木萨克提取物组NOX、ET-1、LOX-1、MDA水平显著低于模型组和药物对照组,NO、SOD、GSH水平显著高于模型组和药物对照组(P<0.05)。实时定量PCR结果显示,与对照组比较,其他3个建模组NLRP3、Caspase-1相对表达量显著升高(P<0.05);伊木萨克提取物组NLRP3、Caspase-1相对表达量显著低于模型组和药物对照组(P<0.05);Western Blot检测结果显示,与对照组比较,其他3个建模组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量显著升高(P<0.05);伊木萨克提取物组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量显著低于模型组和药物对照组(P<0.05)。结论伊木萨克提取物可改善大鼠性功能,提高大鼠精子密度及精子存活率,其作用机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路有关。

缬沙坦对老年原发性高血压伴轻度认知障碍病情改善及血清同型半胱氨酸、基质金属蛋白酶-9水平的影响

目的探讨缬沙坦对老年原发性高血压伴认知功能障碍患者病情改善及对血清同型半胱氨酸(Hcy)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年12月联勤保障部队第九二一医院收治的142例老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组(n=71)和对照组。观察组给予缬沙坦胶囊降压治疗,对照组给予苯磺酸左氨氯地平降压治疗,观察并比较两组患者治疗前后的心率、血压、认知功能、血清Hcy和MMP-9水平变化情况。结果两组患者治疗前后组间、组内的心率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的收缩压、舒张压水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的收缩压低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗后两组的舒张压比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前的认知功能各项评分及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的延迟回忆、抽象、注意、语言4项维度和认知功能总分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后的命名、定向、视空间与执行功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前血清Hcy及MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后的血清Hcy及MMP-9水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍的患者采用缬沙坦和苯磺酸左氨氯地平均可降低血压、改善认知功能障碍、降低血清Hcy、MMP-9水平,相比之下,缬沙坦的作用效果更为明显,值得在临床上推广实施。

急性脑梗死患者血清微小RNA-124和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9水平与预后相关

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小RNA-124(miR-124)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的关系,及二者对患者预后的预测价值。方法:收集216例ACI患者为研究对象,选择同期健康体检者86例为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患者血清miR-124水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Caspase-9及炎性因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、正五聚蛋白(PTX)-3水平。ACI患者根据6个月随访结果分为预后良好组152例和预后不良组64例;分析预后不良组患者血清miR-124、Caspase-9表达水平与炎性因子相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、Caspase-9表达水平对患者预后的预测价值;采用Logistic回归方程分析影响预后的因素。结果:预后不良组患者miR-124、Caspase-9、hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3高于预后良好组和对照组,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及冠心病、糖尿病、大血管闭塞患者比例高于预后良好组(P均<0.05)。预后不良组患者血清miR-124与Caspase-9水平呈正相关(r=0.582,P<0.05),且二者与hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3水平呈正相关(P均<0.05)。血清miR-124、Caspase-9水平预测ACI患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.906、0.836,特异性分别为77.6%、88.8%,灵敏度分别为89.1%、71.9%;二者联合预测的AUC为0.920,特异性为90.8%,灵敏度为81.3%。miR-124、Caspase-9、LDL-C、冠心病、糖尿病、大血管闭塞是ACI患者发生不良预后的危险因素(P均<0.05)。结论:联合检测血清miR-124、Caspase-9水平可能有助于早期预测ACI患者预后。

25-羟维生素D3、低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响

目的探讨25-羟维生素D3[25(OH)D3]、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和同型半胱氨酸(HCY)对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响。方法选取2021年1月至2023年4月于内蒙古自治区人民医院体检并诊断为桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块的患者200例,随机选取同期体检健康人群116例作为对照组,按照斑块厚度、内部回声、超微血流和溃疡情况及纤维帽是否完整的特点将桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块患者分为稳定斑块组(n=132)和易损斑块组(n=68)。记录三组患者的基线资料,采用受试者工作特征(ROC)曲线对颈动脉斑块的稳定性进行评估,计算ROC曲线下面积(AUC)。结果稳定斑块组和易损斑块组葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、LDL-C、HCY水平均高于对照组,25(OH)D3、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。稳定斑块组与易损斑块组患者LDL-C、HCY水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,LDL-C、HCY均是导致颈动脉发生易损斑块的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析显示,LDL-C、HCY诊断颈动脉易损斑块的AUC分别为0.662、0.633,灵敏度分别为0.706、0.824,特异度分别为0.636和0.273。结论25(OH)D3、LDL-C、HCY、GLU、TC、HDL-C均是桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块形成的影响因素,LDL-C、HCY均是影响颈动脉斑块稳定性的独立危险因素,对颈动脉易损斑块具有预测价值。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

辛伐他汀对COPD大鼠肺组织半胱氨酸蛋白酶-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3表达及细胞凋亡的影响。方法30只雄性成年SD大鼠随机分为对照组、COPD组、辛伐他汀组,每组10只,COPD组通过鼻内滴注烟草提取物和气管内滴入脂多糖建立模型,通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理学变化,免疫组织化学法和Western印迹法检测肺组织caspase-3的表达及流式检测细胞凋亡。结果HE染色镜下观察发现COPD组支气管壁略增厚,结构较完整,肺泡扩张、肺血管壁增厚均较对照组加重,辛伐他汀组较对COPD组减轻。免疫组织化学实验结果显示COPD组肺组织的caspase-3表达较对照组显著增加(P<0.05),而辛伐他汀组caspase-3表达较COPD组显著减少(P<0.05)。Western印迹显示COPD组肺组织的caspase-3表达较对照组显著增加(P<0.05),而辛伐他汀组caspase-3表达较COPD组显著减少(P<0.05);COPD组肺组织早期细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05),而辛伐他汀组肺组织早期细胞凋亡率较COPD组显著降低(P<0.05)。结论辛伐他汀能够通过减少COPD大鼠肺组织caspase-3蛋白表达,减少肺组织细胞凋亡。

人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白浓度明显减少(P<0.001)。结论 rhBMP-7具有抑制HK-2细胞焦亡的作用,其通过调控caspase-1/GSDMD信号通路减缓高糖诱导的HK-2细胞焦亡。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3mRNA在人脑挫裂伤后神经细胞中的表达

目的研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3mRNA在脑挫裂伤患者神经细胞中的表达与预后的关系。方法应用原位杂交技术检测脑组织15例Caspase-3mRNA的表达情况。结果均有不同程度的Caspase-3mRNA表达,死亡组表达值较存活组明显升高。两组之间表达差异有显著性意义。结论脑挫裂伤后Caspase-3mRNA表达程度较高,Caspase-3mRNA过度表达在脑挫裂伤后神经细胞凋亡的调控中起一定的作用。

亚低温联合高压氧对重型颅脑损伤术后患者应激反应的改善作用及对血清半胱氨酸蛋白酶3、髓鞘碱性蛋白水平的影响

目的:观察亚低温联合高压氧对重型颅脑损伤患者术后应激反应的改善作用及对于血清中半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响,为重型颅脑损伤患者术后恢复提供临床治疗方案。方法:选取2018年6月—2019年6月民权县人民医院收治的94例重型颅脑损伤术后患者作为研究对象,随机数表法分为A、B组,每组各47例,A组给予亚低温治疗,B组给予亚低温联合高压氧治疗。比较治疗前后A、B两组患者的颅内压值(ICP)及日常生活能力;比较A、B两组患者的治疗效果;比较A、B两组患者治疗前后血清皮质醇(CORT)、肾上腺素(E)、Caspase-3和MBP水平。结果:治疗后,两组患者ICP水平降低,Barthel指数升高,差异有统计学意义(t=2.380、2.815,P<0.01);B组总有效率高于A组,差异有统计学意义(χ2=4.398,P<0.05)。治疗后两组患者CORT、E、Caspase-3、MBP水平均降低,B组低于A组,差异有统计学意义(t=2.349、4.239、7.855、6.353,P<0.05)。结论:重型颅脑损伤患者术后应用亚低温联合高压氧治疗可减轻应激反应,降低血清Caspase-3、MBP水平,改善恢复效果。

乌鳢半胱氨酸蛋白酶3基因克隆及表达分析

【目的】克隆和表达分析乌鳢(Channa argus)的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase)3基因(caspase-3),为探究该基因在乌鳢机体中的免疫应答作用及在其他鱼类免疫上的作用提供理论依据。【方法】根据NCBI公布的乌鳢基因组信息,对乌鳢的caspase-3基因序列进行克隆,对推导的caspase-3氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测caspase-3基因在健康乌鳢各组织中的表达分布及在不同刺激物[鰤鱼(Seriola quinqueradiata)诺卡氏菌(Nocardia seriolae)、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)]刺激下的时序表达情况。【结果】caspase-3基因序列全长855 bp,编码284个氨基酸残基,蛋白分子量为31.069 kD,理论等电点(p I)为6.17。caspase-3蛋白含有1个CASc结构域。多序列比对结果显示,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷(Lutjanus peru)的caspase-3氨基酸序列相似度最高,达81.7%;系统发育进化树分析结果表明,乌鳢的caspase-3氨基酸序列与秘鲁笛鲷的caspase-3氨基酸序列聚为一支。实时荧光定量PCR检测结果表明,乌鳢caspase-3基因在肌肉、皮肤、鳃、心脏、胸腺、脑、头肾、脾脏、肝脏和血液等组织中均有表达,其中在脾脏和头肾的表达量最高;在不同刺激物刺激下,caspase-3基因在乌鳢脾脏、肾脏、血液和肝脏组织中的表达量均发生显著变化(P<0.05);用灭活鰤鱼诺卡氏菌、LPS和PolyI:C孵育乌鳢头肾白细胞后,caspase-3基因表达量均显著升高,且具有明显的时间依赖性。【结论】乌鳢caspase-3基因可能在乌鳢抵御细菌和病毒入侵的免疫反应中发挥着重要作用。

miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学及脊髓组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的:观察电针对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠尿流动力学、髓内细胞凋亡率及脊髓组织中Caspase-3表达的影响。方法:从60只雌性SD大鼠中随机抽取36只,按脊髓横断法制作神经源性膀胱模型后,将符合要求的模型大鼠24只随机分为模型组、电针组各12只,其余24只随机分为空白组、假手术组各12只;术后第19天取"次髎""中极""三阴交""大椎"行电针干预,连续治疗7天后行尿流动力学检测,并用TUNEL法测定髓内细胞凋亡率、Western Blot法测定脊髓组织中Caspase-3蛋白的表达情况。结果:(1)尿流动力学,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力升高(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性降低(P<0.01);与模型组比较:电针组的膀胱基础压力、膀胱最大压力、漏尿点压力均降低(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性均升高(P<0.01);(2)髓内细胞凋亡率,与空白组及假手术组比较:模型组及电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组的脊髓组织TUNEL阳性率明显降低(P<0.01);(3)Caspase-3蛋白表达,与空白组及假手术组比较:模型组、电针组脊髓组织中Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较:电针组脊髓组织中的Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:电针"次髎""中极""三阴交""大椎"可改善骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠的膀胱压力、最大容量及顺应性,降低受损脊髓组织的凋亡率,其作用机制可能与脊髓组织中凋亡效应蛋白Caspase-3的表达下调有关。

急性脑梗死患者血清半胱氨酸蛋白酶-3水平改变及其与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的:探讨急性脑梗死患者血清半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)水平改变及其与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:收集2015年1月-2016年2月我院收治的40例MRI证实的急性脑梗死患者及40例无脑梗死的健康者(对照组)血清,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两组血清中Caspase-3水平,并用MRI检查颈动脉粥样斑块,扫描序列包括T1WI、T2WI、二维时间飞跃法(2D-TOF)成像及增强颈部血管成像,研究并分析斑块内成分及其分型。结果:急性脑梗死组经颈动脉MRI检查发现颈动脉颅外段均检出粥样硬化斑块,其中不稳定斑块29例(不稳定斑块亚组),稳定性斑块11例(稳定斑块亚组)。与对照组血清Caspase-3水平[(16.80+2.75)pg/ml]比较,急性脑梗死组血清Caspase-3水平[(36.41±3.45)pg/ml]明显升高(P<0.05);而其中不稳定斑块亚组血清Caspase-3水平[(39.32±3.78)pg/ml]又明显高于稳定斑块亚组[(31.70±2.80)pg/ml](P<0.05)。结论:急性脑梗死患者血清Caspase-3水平明显升高,且血清内Caspase-3水平与颈动脉粥样硬化斑块稳定性有密切的关系。

P38通路对帕金森病小鼠模型黑质环氧合酶-2、半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的研究P38MAPK通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达调控作用。方法采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学、免疫组化和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2、caspase-3和磷酸化P38MAPK(p-P38MAPK)的变化,及给予P38MAPK抑制剂SB203580后对上述变化的影响。结果模型7d组小鼠出现典型的PD样症状,黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约65%和75%(P<0.01);模型3d组小鼠黑质区COX-2、p-P38MAPK、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加,TH阳性神经元明显丢失;经P38MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01)。结论在MPTP所致亚急性小鼠PD模型中,P38MAPK通路对黑质区炎症与凋亡可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定神经保护作用。

2型糖尿病肾病的检测指标尿蛋白-肌酐比值与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C糖化血红蛋白的相关性探讨

目的分析2型糖尿病肾病的尿蛋白-肌酐比值(albumin creatinine ratio,ACR)与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,CysC)、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)的相关性。方法选取2019年8月—2021年8月于上饶市广信区人民医院就诊的60例2型糖尿病肾病患者(糖尿病肾病组)、60例单纯2型糖尿病患者(糖尿病组)与60名正常体检者(健康对照组)为研究对象,采集3组的静脉血5 mL,检测3组ACR、CysC、HbA1c水平;采用Pearson相关性分析2型糖尿病肾病患者的ACR与CysC、HbA1c水平之间的相关性;同时绘制受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),分析ACR、CysC、HbA1c单独与联合检测2型糖尿病肾病的诊断效能。结果糖尿病肾病组的ACR、CysC、HbA1c水平均高于糖尿病组与健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,2型糖尿病肾病患者的ACR与CysC、HbA1c水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,ACR、CysC、HbA1c对2型糖尿病肾病的诊断价值较高,其曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.922(95%CI:0.869~0.974)、0.934(95%CI:0.890~0.979)、0.805(95%CI:0.724~0.885),而3项指标联合检测的AUC为0.968(95%CI:0.938~0.998),高于3项指标单独检测的AUC。结论ACR与CysC、HbA1c水平呈显著正相关,3项指标联合检测可提高2型糖尿病肾病的检出准确率,可为临床治疗方案的制定提供更为可靠的指导。

炎性介质阻断剂对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨炎性介质阻断剂AG490对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响。方法雄性SD大鼠被随机分为假手术组、缺血再灌注组、生理盐水组、AG490组;采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;AG490组于脑缺血即刻及再灌注后12 h分别腹腔注射AG490 1 mg/kg。再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测神经细胞凋亡数;应用Western Blot法检测各组脑组织磷酸化酪氨酸蛋白激酶(P-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子(P-STAT3)、caspase-3表达。结果与缺血再灌注组及生理盐水组比较,AG490组大鼠神经功能缺损评分明显减低(均P<0.05);凋亡细胞数及P-JAK2、P-STAT3、caspase-3表达明显减少(均P<0.01)。结论AG490可阻断JAK2/STAT3细胞因子信号转导通路,有效抑制caspase-3表达,减轻缺血灌注损伤后神经细胞凋亡,改善神经功能缺损症状。