金葡菌主动外排蛋白QacA α-螺旋1、2及TMS1氨基酸的功能研究

目的:评价金黄色葡萄球菌多药耐药主动外排蛋白Qac Aα-螺旋1和2及跨膜区(TMS)1上的氨基酸对于底物转运的重要性。方法:采用半胱氨酸定点诱变的方法诱变Qac A蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸I2、S3、F4、F5、T6、K7、D10、M11、R17、W18、T_19、A20、V21、V22、V23、F29、D34、P43、E48、E50、P51和Q55。测定诱变菌株最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)以及荧光运输试验分析氨基酸的功能变化。结果:MIC和MBC结果分析提示获得的诱变菌株S3C、T6C、R17C、T_19C、A20C、F29C和E50C对所测药物完全恢复敏感性,F4C、F5C和P51C对所测药物耐药性明显降低。运输试验结果与MIC、MBC结果一致,提示10株诱变菌株失去对底物的转运能力。结论:Qac A蛋白α-螺旋1和2及TMS1上的氨基酸S3、F4、F5、T6、R17、T_19、A20、F29、E50和P51可能与Qac A蛋白一价和二价阳离子底物的结合和转运功能密切相关。